陸雨順，王澤帥，畢曉東，夏蘊(yùn)實(shí)，盧 思，孫印石*

鹿茸飲片浸出物提取方法的建立及多成分測定在質(zhì)量評價(jià)中的應(yīng)用

陸雨順1，王澤帥1，畢曉東2，夏蘊(yùn)實(shí)1，盧 思2，孫印石1*

1. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所，吉林 長春 130112 2. 吉林省鹿產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心，吉林 長春 130600

比較不同提取方式、不同溶劑、不同料液比、不同提取時(shí)間對鹿茸浸出物得率的影響，對15個(gè)產(chǎn)地養(yǎng)殖的60批鹿茸飲片中7種核苷類主要成分（尿嘧啶、鳥嘌呤、次黃嘌呤、黃嘌呤、尿苷、肌苷和鳥苷）進(jìn)行分析，比較不同部位鹿茸飲片（蠟片、粉片、紗片和骨片）的差異。參照《中國藥典》2015年版四部通則相關(guān)方法優(yōu)化鹿茸浸出物的提取方法，建立鹿茸浸出物最佳提取工藝，采用UPLC法對60批不同批次鹿茸飲片7種核苷類成分進(jìn)行測定，結(jié)合主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘-判別分析（OPLS-DA）化學(xué)計(jì)量學(xué)方法對鹿茸飲片進(jìn)行區(qū)分與比較。熱浸法提取條件下水溶性浸出物含量顯著高于冷浸法，同一批次來源不同部位鹿茸飲片的浸出物含量，骨片低于蠟片、粉片、紗片（＜0.05）。不同部位飲片中7種核苷類成分總量在0.95～5.20 mg/g。通過OPLS-DA得出5個(gè)主要差異性成分尿嘧啶、鳥嘌呤、次黃嘌呤、尿苷和鳥苷為不同部位鹿茸飲片之間含量變化差異較為顯著的成分。建立的鹿茸浸出物提取方法簡便高效，結(jié)合7種核苷類成分含量測定可將紗片、骨片、蠟片與粉片之間進(jìn)行初步區(qū)分，從而用于鹿茸飲片的質(zhì)量控制與評價(jià)，為進(jìn)一步完善鹿茸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供科學(xué)依據(jù)。

鹿茸；浸出物；核苷成分；正交偏最小二乘法-判別分析；質(zhì)量控制；主成分分析

鹿茸為鹿科鹿屬動物梅花鹿Temminck或馬鹿Linnaeus雄鹿未骨化密生茸毛的幼角[1]。鹿茸具有較高的食用和藥用價(jià)值，富含膠原蛋白[2]、多肽[3]、多糖[4]、甾體化合物[5-6]、氨基酸[7]、脂肪酸[8-9]、無機(jī)元素[10]、核苷及生物堿[11-15]等多種營養(yǎng)成分，具有增強(qiáng)免疫[16-18]、抗疲勞[19]、保護(hù)神經(jīng)系統(tǒng)[20]等功效。目前，市場上流通的鹿茸通常按照不同切制部位分為蠟片、粉片、紗片、骨片進(jìn)行流通，不同部位飲片之間化學(xué)成分差異較大且功效物質(zhì)不明確[21]。因此，針對鹿茸具有多成分多作用靶點(diǎn)的特點(diǎn)，采用浸出物聯(lián)合含量測定復(fù)合指標(biāo)共同評價(jià)飲片質(zhì)量，以便完善鹿茸品質(zhì)評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。

浸出物測定系指用水或其它適宜的溶劑對藥材和飲片中可溶性物質(zhì)進(jìn)行的測定[1]。目前，已有研究利用浸出物對不同產(chǎn)地、不同品種及不同炮制方式的中草藥進(jìn)行質(zhì)量控制[22-26]。而在鹿茸中找到結(jié)構(gòu)明晰、功能明確的某類成分或質(zhì)量標(biāo)志物之前，通過測定浸出物含量，對鹿茸進(jìn)行質(zhì)量控制更具有可操作性和現(xiàn)實(shí)意義。然而《中國藥典》2015年版中收錄的4個(gè)鹿產(chǎn)品中只有鹿角規(guī)定了浸出物含量限度，尚未制定鹿茸浸出物的測定方法及浸出物含量。因此，為充分考慮樣品的代表性及多樣性，本實(shí)驗(yàn)收集了全國15個(gè)產(chǎn)地養(yǎng)殖的60批不同規(guī)格的鹿茸飲片，通過比較不同提取方法、提取溶劑、料液比、提取時(shí)間對鹿茸飲片浸出物的影響，建立最佳提取方法。結(jié)合浸出物中7種核苷類成分的定量分析，以期在性狀鑒別的基礎(chǔ)上，采用浸出物聯(lián)合多成分含量測定復(fù)合指標(biāo)共同評價(jià)，建立客觀合理的質(zhì)控指標(biāo)，為進(jìn)一步完善鹿茸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器與試劑

Acquity UPLC H-Class型超高效液相色譜儀，PDA檢測器，美國沃特世公司；DHG-9123A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，上海精宏有限公司；MS-204-S電子分析天平，瑞士梅特勒-托利多公司；WP-UP- WF-40微量分析型超純水機(jī)，四川沃特爾水處理設(shè)備有限公司；DTC-8超聲清洗機(jī)，湖北鼎泰恒勝超聲波清洗設(shè)備有限公司；TGL-16G高速臺式離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠；Vortex 3旋渦混勻器，德國艾卡儀器設(shè)備有限公司。

對照品尿嘧啶（批號TM0313XB13）、鳥嘌呤（批號KM0522CA14）、次黃嘌呤（批號TM0313XC13）、黃嘌呤（批號AJ0722MA14）、尿苷（批號TM0313XA13）、肌苷（批號TJ0623XA13）和鳥苷（批號AJ0609NA14），質(zhì)量分?jǐn)?shù)均大于98%，購自上海源葉生物科技有限公司；甲酸、乙腈，色譜級，購自美國Sigma公司；無水乙醇，分析純，購自北京化工廠。

1.2 樣品

采自全國10個(gè)省份、15個(gè)不同產(chǎn)地養(yǎng)殖的鮮鹿茸，經(jīng)中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所孫印石研究員鑒定為鹿科動物梅花鹿Temminck雄鹿未骨化密生茸毛的幼角（二杠），按照行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)切制成蠟片、粉片、紗片、骨片4個(gè)部位，粉碎備用，具體信息見表1。另取梅花鹿鹿茸（二杠），由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)所左家試驗(yàn)站提供，整只粉碎備用，編號H1。

2 方法

2.1 浸出物提取工藝優(yōu)化

2.1.1 冷浸法對浸出物含量的影響 參照《中國藥典》2015年版附錄2201浸出物測定法中冷浸法操作規(guī)程，準(zhǔn)確稱取供試品H1粉末4.00 g，15份，精密稱定，置250 mL錐形瓶中，分別精密量取水及20%、40%、60%、80%乙醇各100 mL，每組試驗(yàn)重復(fù)3次，冷浸24 h，參照《中國藥典》2015年版附錄2201測定方法中冷浸法操作規(guī)程，計(jì)算各浸出物得率。

2.1.2 熱浸法對浸出物含量的影響 參照《中國藥典》2015年版附錄2201浸出物測定法中熱浸法操作規(guī)程，準(zhǔn)確稱取供試品H1粉末2.00 g，15份，精密稱定，置250 mL的錐形瓶中，分別精密加水及20%、40%、60%、80%乙醇各50 mL，每組試驗(yàn)重復(fù)3次，參照《中國藥典》2015年版附錄2201測定方法中熱浸法操作規(guī)程，計(jì)算各浸出物得率。

2.1.3 料液比對浸出物含量的影響 準(zhǔn)確稱取供試品H1粉末2.00 g，15份，精密稱定，置250 mL的錐形瓶中，選取提取溫度為98 ℃、回流提取時(shí)間為1 h，以料液比1∶20、1∶25、1∶30、1∶35、1∶40精密量取水，加入錐形瓶，每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，參照《中國藥典》2015年版附錄2201測定方法中熱浸法操作規(guī)程，計(jì)算各浸出物得率。

2.1.4 提取時(shí)間對浸出物含量的影響 準(zhǔn)確稱取供試品H1粉末2.00 g，12份，精密稱定，置250 mL的錐形瓶中，選取提取溫度為98 ℃、料液比為1∶25精密量取水，以回流提取時(shí)間0.5、1.0、2.0、3.0 h對供試品進(jìn)行提取，每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，參照《中國藥典》2015年版附錄2201測定方法中熱浸法操作規(guī)程，依法計(jì)算各浸出物得率。

2.2 鹿茸浸出物中多成分含量測定

2.2.1 供試品溶液制備 取鹿茸片粉末（過60目篩）約0.10 g，精密稱定，置于5 mL離心管中，加水2 mL，超聲處理30 min后，5000 r/min離心，取上清液，經(jīng)0.22 μm水系微孔濾膜濾過，供UPLC檢測分析。

2.2.2 對照品溶液制備 精密稱取尿嘧啶、鳥嘌呤、次黃嘌呤、黃嘌呤、尿苷、肌苷和鳥苷對照品各5.00 mg，置于5.00 mL量瓶中，除鳥嘌呤、黃嘌呤采用0.1%氫氧化鈉溶解外，其他對照品均采用超純水溶解，配成質(zhì)量濃度均為1000 mg/L的對照品儲備液。取各對照品儲備液800 μL于10 mL量瓶中，室溫條件下超純水定容，配成質(zhì)量濃度均為80 mg/L的混合對照品母液。

2.2.3 色譜條件 色譜柱為Acquity UPLC HSS T3柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）；流動相為A為0.006%醋酸水溶液，B為乙腈；體積流量0.30 mL/min；柱溫35 ℃；進(jìn)樣量1 μL；梯度洗脫程序：0～1 min，100% A；1～10 min，100%～94% A；10～11.5 min，94%～85% A；11.5～13 min，85%～100% A；13～15 min，100% A。

3 結(jié)果與討論

3.1 提取工藝對鹿茸浸出物的影響

3.1.1 不同提取溶劑對鹿茸浸出物得率的影響 從表2中可以看出，熱浸法在不同體積分?jǐn)?shù)乙醇提取條件下明顯高于冷浸法，為冷浸法浸出物得率的2倍以上。這可能是因?yàn)楦邷卦黾恿四繕?biāo)化合物的溶解度和傳質(zhì)速率，有利于萃取。水溶性浸出物高于醇溶性浸出物，并且隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的增加，浸出物得率呈現(xiàn)下降趨勢。這是因?yàn)樗臉O性較高，使得鹿茸水溶性多糖和蛋白更好地溶解，從而得到較高的浸出物得率。因此，于熱浸法下，選擇水作為鹿茸提取溶劑，既達(dá)到了較高提取效率又降低了成本。

3.1.2 不同料液比對鹿茸浸出物得率的影響 表3實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在熱浸法中，當(dāng)料液比從1∶20增加到1∶25時(shí)，鹿茸浸出物的得率隨料液比的增加而增加。一般來說，較高的溶劑體積可以更有效地溶解目標(biāo)化合物，從而得到更好的提取率。當(dāng)料液比從1∶25增加到1∶35時(shí)，沒有顯著差異（＞0.05）。因此，在熱浸法中最適合的料液比應(yīng)為1∶25，鹿茸水溶性浸出物得率達(dá)到24.55%，即達(dá)到較高的提取效率又避免了溶劑浪費(fèi)。

上標(biāo)字母相同表示沒有顯著性差異（＞0.05），否則有顯著性差異（＜0.05），下表同

The same superscript letters indicate no significant difference (> 0.05); otherwise, there is a significant difference (< 0.05), same as below

3.1.3 不同提取時(shí)間對鹿茸浸出物得率的影響 一般來說，為獲得較高的提取率需要較長的提取時(shí)間，當(dāng)達(dá)到一定提取時(shí)間時(shí)，提取率達(dá)到飽和或逐漸降低[27]。表4實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)采用熱浸法提取鹿茸時(shí)間從0.5 h增加到1.0 h時(shí)，熱浸法鹿茸浸出物的得率從21.04%增加到24.82%，并在后續(xù)的3.0 h內(nèi)無顯著性差異（＞0.05）。因此，熱浸法的最佳提取時(shí)間為1.0 h。

3.1.4 浸出物提取方法應(yīng)用驗(yàn)證 取鹿茸粉末2 g，在最優(yōu)的提取條件下，應(yīng)用熱浸法，以水為提取溶劑、料液比為1∶25，提取時(shí)間為1.0 h，每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，測定水溶性浸出物的得率，結(jié)果見表5。從表5中可以看出，不同產(chǎn)地養(yǎng)殖的鹿茸浸出物含量存在一定差異，6個(gè)產(chǎn)地養(yǎng)殖的鹿茸中以吉林省長春市為最高，鹿茸各部位浸出物含量高于其他地區(qū)。從鹿茸飲片來看，骨片浸出物含量明顯低于其他3個(gè)部位。通過進(jìn)一步檢驗(yàn)分析發(fā)現(xiàn)，骨片與蠟片、粉片、紗片之間均具有顯著性差異（＜0.05）。為進(jìn)一步區(qū)分不同規(guī)格鹿茸飲片，有必要對不同產(chǎn)地養(yǎng)殖的鹿茸飲片水溶性提取物中的化學(xué)成分進(jìn)行比較分析。

3.2 方法學(xué)考察結(jié)果

3.2.1 線性關(guān)系、檢出限和定量限考察 準(zhǔn)確量取混合對照品儲備液，用水稀釋成2、5、10、20、40、80 mg/L系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。以各組分的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（），相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)（），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸，得到7種核苷類成分的線性回歸方程，按照信噪比（/）＝3計(jì)算檢出限，/＝10計(jì)算定量限，結(jié)果見表6。結(jié)果表明，7種核苷成分均在2～80 mg/L呈良好的線性關(guān)系。

3.2.2 精密度試驗(yàn) 取混合對照品溶液20 mg/L，連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算各成分峰面積的RSD值。結(jié)果顯示尿嘧啶、鳥嘌呤、次黃嘌呤、黃嘌呤、尿苷、肌苷和鳥苷峰面積的RSD值分別為1.60%、0.11%、0.21%、0.43%、0.05%、0.41%、0.03%。

3.2.3 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取鹿茸（L6）粉末6份，每份0.1g，按“2.3.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.3.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣1 μL，計(jì)算各成分峰面積的RSD值。結(jié)果顯示尿嘧啶、鳥嘌呤、次黃嘌呤、黃嘌呤、尿苷、肌苷和鳥苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)的RSD值分別為0.13%、0.25%、0.81%、0.40%、0.65%、0.87%、1.03%。

表6 核苷類成分的線性回歸方程、檢出限和定量限

3.2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取鹿茸（L6）供試品溶液，按“2.3.3”項(xiàng)下色譜條件分別于0、3、6、12、24 h進(jìn)樣1 μL，測定對各成分峰面積，計(jì)算RSD值。結(jié)果表明，7種核苷類成分峰面積的RSD值分別是0.09%、0.23%、0.68%、0.35%、0.43%、0.94%、0.53%。

3.2.5 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取6份鹿茸（L6）粉末，每份0.05 g，分別加入適量對照品溶液，按“2.3.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測定并計(jì)算7種核苷類成分的加樣回收率平均值，結(jié)果表示，7種核苷類成分平均加樣回收率分別為88.50%、109.43%、84.52%、93.67 %、105.40%、108.30%、99.70%，RSD分別為0.10%、0.12%、1.12%、0.36%、0.20%、0.62%、1.60%。加樣回收試驗(yàn)結(jié)果表明，在不同的質(zhì)量濃度添加水平下，7種核苷的平均加樣回收率均在80%～120%，RSD在0.10%～1.60%，說明該方法準(zhǔn)確度較高。

3.3 核苷類成分定量測定

按照“2.3.3”項(xiàng)下色譜條件對鹿茸水溶性浸出物中主要成分進(jìn)行含量測定，7種核苷類組分對照品及鹿茸樣品（L1～G16）色譜圖見圖1，測定結(jié)果見表7。

表7結(jié)果表明，不同部位鹿茸飲片核苷成分總量相差較大（＜0.05），7種核苷成分總量為0.95～5.20 mg/g，其中蠟片含量最高，15批蠟片為3.15～5.20 mg/g，平均總量約為4.12 mg/g；粉片為2.76～4.42 mg/g，平均總量約為3.56 mg/g；紗片為1.88～3.18 mg/g，平均總量為2.49 mg/g；骨片為0.95～2.54 mg/g，平均總量為1.46 mg/g。不同產(chǎn)地養(yǎng)殖梅花鹿鹿茸飲片之間各核苷成分含量也存在差異，蠟片排名前3的地區(qū)分別為吉林省長春市、遼寧省西豐縣、吉林省四平市；粉片排名前3的地區(qū)黑龍江黑河市、貴州省貴陽市、江西省豐臺市；紗片排名前3的地區(qū)為吉林省吉林市、山東省青島市、吉林四平市；骨片排名前3的地區(qū)為山東青島市、吉林白山市、遼寧西豐縣。根據(jù)鹿茸骨片的7種核苷類成分平均含量以及不同地區(qū)檢出的最低含量，認(rèn)為可將其平均含量的70%定為限量標(biāo)準(zhǔn)，建議鹿茸飲片7種核苷總量含量不得低于1.05 mg/g。

表8結(jié)果為對取自15個(gè)產(chǎn)地養(yǎng)殖的鹿茸飲片（蠟片、粉片、紗片、骨片）中7種核苷類主要成分（尿嘧啶、鳥嘌呤、次黃嘌呤、黃嘌呤、尿苷、肌苷和鳥苷）分別計(jì)算平均值，除以不同部位鹿茸飲片總核苷平均含量，得到不同部位鹿茸飲片中7種核苷分別占總核苷的比例情況，發(fā)現(xiàn)7種核苷類成分的量比關(guān)系在不同飲片（蠟片、粉片、紗片、骨片）中存在差異，按照尿嘧啶、鳥嘌呤、次黃嘌呤、黃嘌呤、尿苷、肌苷、鳥苷的順序，蠟片中7種核苷的量比關(guān)系為1.00∶0.60∶0.97∶0.05∶0.78∶0.68∶0.83；粉片中7種核苷的量比關(guān)系為1.00∶0.73∶1.07∶0.06∶1.06∶0.78∶0.87；紗片中7種核苷的量比關(guān)系為1.00∶0.72∶1.10∶0.11∶1.54∶1.46∶1.74；骨片中7種核苷的量比關(guān)系為1.00∶0.48∶0.98∶0.15∶1.43∶1.79∶1.84。從7種核苷量比上看，蠟片、粉片中7種核苷含量比例趨于一致，與紗片和骨片中7種核苷含量的占比情況有所不同，紗片和骨片中尿嘌呤、鳥嘌呤、次黃嘌呤占總核苷的比例有明顯減少，肌苷、鳥苷占總核苷的比例有明顯上升?？梢姴煌谷罪嬈?種核苷成分的比值不同。

續(xù)表7

ND：低于定量限，未檢出

ND: below the limit of quantitation, not detected

表8 鹿茸飲片中7種核苷含量在總核苷含量中的占比情況(, n = 3)

3.4 化學(xué)模式識別區(qū)分不同部位鹿茸

3.4.1 主成分分析（PCA） 以60批鹿茸飲片樣本測得的7種核苷成分的含量為變量，通過無監(jiān)督模式的PCA，結(jié)果見圖2?？梢钥闯鱿炂c粉片不能完全區(qū)分，紗片、骨片分布比較集中，可以明顯區(qū)別于蠟片與粉片。在60批樣本中江西省豐城市骨片和黑龍江省黑河市粉片出現(xiàn)離群樣本情況也實(shí)屬正常，因?yàn)闃颖颈旧泶嬖诮M內(nèi)差異。

圖2 鹿茸飲片PCA圖

3.4.2 正交偏最小二乘-判別分析（OPLS-DA） 為了更進(jìn)一步的比較不同部位鹿茸飲片的成分差異，采用有監(jiān)督的OPLS-DA法對15個(gè)不同產(chǎn)地養(yǎng)殖的梅花鹿鹿茸飲片進(jìn)行分析[28-31]，結(jié)果見圖3。

通過對所建立的OPLS-DA模型進(jìn)行＝200的置換檢驗(yàn)，其中累積解釋能力參數(shù)認(rèn)為2和2大于0.5，并且2與軸的截距在原點(diǎn)以下，證明模型具有較好的穩(wěn)定性及預(yù)測能力[32]，相反2和2小于0.5，則說明模型不能很好地區(qū)分2組。圖3中B～F均滿足2和2大于0.5，并且2回歸截距小于0.05，證明蠟片與紗片、蠟片與骨片、粉片與紗片、粉片與骨片、紗片與骨片之間都有明顯區(qū)分。但在蠟片和粉片的區(qū)分模型構(gòu)建中，X2為0.612，Y2為0.383，2為0.194小于0.5，說明所建立的模型不能很好地將蠟片和粉片分為2類，黑龍江省大慶市和新疆昌吉市的蠟片傾向于其他地區(qū)的粉片，而江西省豐城市和吉林省長春市的粉片趨向于其他地區(qū)的蠟片，說明不同產(chǎn)地養(yǎng)殖的鹿茸在蠟片和粉片質(zhì)量上有所差異，導(dǎo)致個(gè)別地區(qū)模型不能很好地區(qū)分。進(jìn)一步以變量權(quán)重重要性排序（variable importance in projection，VIP）預(yù)測值大于1作為標(biāo)準(zhǔn)，得出各標(biāo)定峰對于區(qū)分不同部位梅花鹿鹿茸飲片做出的貢獻(xiàn)程度。在蠟片和紗片、蠟片和骨片、粉片和紗片，粉片和骨片進(jìn)行對比時(shí)，均是峰3、2、1的貢獻(xiàn)較大，在紗片和骨片進(jìn)行對比時(shí)，峰7、2、5的貢獻(xiàn)較大，而蠟片和粉片的主要區(qū)別作用的峰分別為峰1、3以及峰7。

4 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)從浸出物的角度研究其與鹿茸飲片質(zhì)量的關(guān)系，通過系統(tǒng)比較提取方法、提取溶劑（水和不同乙醇濃度）、料液比和提取時(shí)間系統(tǒng)地考察了鹿茸浸出物提取方法，發(fā)現(xiàn)熱浸法下鹿茸水溶性浸出物具有提取率高、成本低的特點(diǎn)。對全國6個(gè)產(chǎn)地養(yǎng)殖的不同部位鹿茸浸出物應(yīng)用驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)，熱浸法下水溶性浸出物可明顯區(qū)分骨片與其他部位鹿茸飲片（蠟片、粉片、紗片）。同時(shí)對60批鹿茸飲片水溶性浸出物中標(biāo)示性成分核苷類物質(zhì)進(jìn)行測定，結(jié)果顯示鹿茸中7種核苷成分的量比關(guān)系及總量在不同部位的鹿茸飲片之間有顯著差異。本研究結(jié)果從浸出物和核苷成分方面驗(yàn)證了傳統(tǒng)分級的科學(xué)性，為進(jìn)一步完善鹿茸及相關(guān)產(chǎn)品、藥品的質(zhì)量控制提供數(shù)據(jù)支撐。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Establishment of extraction method and quantitative analysis of multicomponents in evaluating differentPantotrichum decoction pieces

LU Yu-shun1, WANG Ze-shuai1, BI Xiao-dong2, XIA Yun-shi1, LU Si2, SUN Yin-shi1

1. Institute of Special Animal and Plant Sciences, China Academy of Agricultural Sciences, Changchun 130112, China 2. Jilin Deer Product Quality Supervision and Inspection Center, Changchun 130600, China

To study the effect of different extraction methods, solvent, material liquid ratio and time on the yield of extract(CCP). To analyze the content of seven chemical constituents (uracil, guanine, hypoxanthine, xanthine, uridine, inosine, and guanosine) from the 60 batches of CCP pieces in 15 habitats, and compare the differences of different parts of CCP pieces (wax slices, powder slices, gauze slices, and bone slices).The CCP extraction method was optimized according to(2015 edition, volume IV), the optimal extraction method of CCP was determined. A total of 60 batches of CCP pieces from different origins were determined by UPLC. Principal component analysis (PCA) and orthogonal partial least squares-discriminant analysis (OPLS-DA) chemometrics were used to distinguish and compare CCP pieces.The water-soluble extract, hot dip method was better than the cold dip method. Water-soluble extracts under hot dip methods could be used to significantly distinguish bone slices with wax slices, powder slices, gauze slices from the same batch of CCP pieces (< 0.05). The total content of seven nucleotides were between 0.95—5.20 mg/g in the decoction pieces of CCP. And uracil, guanine, hypoxanthine, uridine, and guanine were five main components among different parts of CCP pieces by orthogonal partial least squares discriminant analysis (OPLS-DA).The method is simple and efficient for the extraction of CCP. It is suggested that the method of water-soluble extract of CCP and the determination of seven nucleosides and nucleobases should be combined to evaluate the quality of CCP, which can provide scientific basis for further improving the quality standard.

; extract; nucleosides; orthogonal partial least squares-discriminant analysis; quality control; principal component analysis

R283.6

A

0253 - 2670(2021)02 - 0357 - 10

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.02.008

2020-08-21

國家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃（2018YFC 1706604）；國家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃（2018YFC 1706605）

陸雨順，研究實(shí)習(xí)員，主要從事特色農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)評價(jià)研究。E-mail: luyushun@caas.cn

孫印石，研究員，主要從事特種動植物貯藏與產(chǎn)品開發(fā)。Tel: (0431)81919580 E-mail: sunyinshi2015@163.com

[責(zé)任編輯 鄭禮勝]