朱麗君，方正美，黃孟云，金岳龍，陳 燕，姚應水,2

(1.皖南醫(yī)學院公共衛(wèi)生學院/皖南醫(yī)學院慢性病防制研究所，安徽 蕪湖 241000;2.安徽中醫(yī)藥高等專科學校，安徽 蕪湖 241000)

高血壓是全身血管受到較高壓力時，以體循環(huán)動脈血壓持續(xù)增高為主要特征的多因素復雜疾病，在全球范圍內(nèi)，具有較高的發(fā)病率和死亡率[1]，是過早死亡和心血管疾病的重要原因之一，造成了巨大的疾病負擔[2]。目前，我國成人高血壓患病人數(shù)已高達2.45億，血壓正常高值檢出粗率為39.1%，且合并心血管危險因素的高危人群不斷增加，預防已刻不容緩[3]。高血壓的發(fā)病機制包括腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)過度激活、交感神經(jīng)系統(tǒng)過度興奮、內(nèi)皮功能障礙、氧化應激和血管生成受損等，但其潛在的分子機制有待進一步探索[4]。近來研究表明，微小RNA(microRNA，miRNA，miR)參與多種疾病的生理和病理過程[5]。如果miRNAs修飾了高血壓相關(guān)基因的信使RNA(mRNAs)，可以形成新的抗高血壓療法。miR-21是近年來研究最深入的miRNAs之一，在腫瘤和心血管系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用[6]。有研究報道在高血壓個體中miR-21水平明顯上調(diào)[7]，提示miR-21可能是高血壓的潛在治療靶點。因此，通過Meta研究來系統(tǒng)評價外周血miR-21水平與高血壓的關(guān)系，可以為高血壓的致病機制和治療提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 文獻檢索方法

在PubMed、Web of Science、EMbase、中國知網(wǎng)(CNKI)、萬方和維普數(shù)據(jù)庫進行了檢索，時間從建庫至2020年11月。采取主題詞與自由詞相結(jié)合的方式進行。英文檢索詞：hypertension、high blood pressure、HT、miR-21、microRNA-21、miRNA-21、hsa-mir-21 及 miR-21-5p；中文檢索詞：高血壓、血壓、微小RNA、miR-21、microRNA21、miRNA-21、hsa-mir-21 和 miR-21-5p。同時對已納入研究中引用的參考文獻進行手動搜索，以補充獲取相關(guān)文獻。

1.2 納入與排除標準

納入標準：(1)病例對照研究，涉及miR-21水平與高血壓的關(guān)系；(2)以英文或中文發(fā)表，可獲得全文；(3)高血壓的診斷明確；(4)外周血中miRNA水平，如全血、外周血單個核細胞(PBMC)，血清，血漿和血小板；(5)報告了樣本量、miR-21水平等相關(guān)數(shù)據(jù)。排除標準：(1)文章重復；(2)數(shù)據(jù)信息量太少無法提??；(3)動物研究；(4)研究對象為繼發(fā)性高血壓或合并嚴重疾病等。

1.3 數(shù)據(jù)提取

兩名人員根據(jù)上述標準獨立進行數(shù)據(jù)提取。內(nèi)容如下：第一作者、發(fā)表年份、國家、標本類型、檢測方法、內(nèi)參和樣本量等。

1.4 質(zhì)量評價

參考紐卡斯爾-渥太華量表Newcastle-Ottawa Scale (NOS)評價量表，內(nèi)容包括3個方面共9分，對象選擇評價4分，可比性評價2分，暴露評價3分，超過6分為相對較高的質(zhì)量[8]。

1.5 統(tǒng)計學處理

采用Stata 16.0軟件進行分析。計量資料將標準化均值差(standardized mean differences ，SMD)和95%置信區(qū)間(CIs)視為效應分析統(tǒng)計量。SMD值為0.2、0.5、0.8和1.0時，分別定義為小，中，大和非常大的效果標準[9]。以I2評估納入研究的異質(zhì)性，若I2>50%，說明異質(zhì)性較大，選擇隨機效應模型，反之使用固定效應模型。此外，由于標本分類不同，進行了亞組分析以探討異質(zhì)性。采用敏感性分析判斷單個研究對匯總結(jié)果的影響。此外，使用Begg's 漏斗圖和 Egger's線性回歸方法評估發(fā)表偏倚，P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 入選文獻的基本特征

共檢索中英文文獻268篇，剔除重復文獻78篇，剔除不符合文章主題后初步篩選出21篇。進一步查閱全文，1篇數(shù)據(jù)重復利用，11篇無法準確提取數(shù)據(jù)，最終納入文獻9篇，中文2篇，英文7篇。共921例研究對象，高血壓組577例，對照組344例。具體篩選流程圖見圖1，所選文章的NOS得分均在6～8分，基本情況見表1。

圖1 文獻篩選流程及結(jié)果Fig 1 Literature screening process and results

表1 納入文獻基本特征

2.2 Meta分析結(jié)果

χ2=251.68，P<0.001，I2=96.4%提示納入的研究間存在異質(zhì)性，故采用隨機效應模型，高血壓組外周血miR-21水平高于對照組(SMD=1.53，95%CI：0.58～2.47，Z=3.16，P=0.002)。進一步亞組分析，3個研究采用外周血PBMC檢測miR-21表達水平，共有229例高血壓和109例對照，結(jié)果顯示高血壓患者PBMC中miR-21水平高于對照人群(SMD=3.49，95%CI：1.24～5.74)，差異具有統(tǒng)計學意義(P=0.002)，有6個研究檢測了血漿miR-21水平，共210例高血壓和175對照，未發(fā)現(xiàn)血漿中miR-21水平與高血壓發(fā)病風險存在關(guān)聯(lián)(P=0.375)，僅1項研究檢測血清miR-21水平，相關(guān)結(jié)果如圖2所示。

圖2 外周血miR-21水平與高血壓相關(guān)性的Meta分析Fig 2 Meta-analysis of the correlation between peripheral blood miR-21 level and hypertension

2.3 敏感性分析

采用敏感性分析衡量研究結(jié)果的穩(wěn)定性，逐個剔除研究后結(jié)果并未顯著改變，說明研究結(jié)果較可靠，見圖3。

圖3 外周血miR-21水平與高血壓關(guān)系的敏感性分析Fig 3 Sensitivity analysis of the relationship between peripheral blood miR-21 level and hypertension

2.4 發(fā)表偏倚分析

Begg's漏斗圖初步觀察各研究分布基本對稱(Z=0.89，P=0.371)，見圖4；采用 Egger's 法進一步分析，顯示發(fā)表偏倚較小(t=-0.19，P=0.857)。

圖4 外周血miR-21水平與高血壓關(guān)系的Begg's 漏斗圖Fig 4 Begg's funnel chart of the relationship between peripheral blood miR-21 level and hypertension

3 討論

近年來，循環(huán)miRNA被發(fā)現(xiàn)可作為高血壓早期診斷的新型生物標記物，而與內(nèi)皮功能有關(guān)的miR-21倍受關(guān)注[18]。miR-21在哺乳動物組織、器官、細胞、血液中廣泛表達，因其在循環(huán)系統(tǒng)中的穩(wěn)定性及病理特異性與靈敏性高，使之可能成為高血壓潛在的診斷、治療及預后生物標志物[19]。miR-21基因定位于人類染色體上17q23.2區(qū)，巨噬細胞缺乏miR-21可促進動脈粥樣硬化形成過程中的細胞凋亡、斑塊壞死和血管炎癥[20]。抗miR-21治療在大型動物心衰模型中有較好的纖維化抑制效果，且可改善心功能[21]。動物研究發(fā)現(xiàn)，與血壓正常大鼠相比，高血壓大鼠骨骼肌中的miR-21水平升高[22]。也有相反結(jié)論，miR-21在高血壓大鼠的線粒體翻譯中具有積極作用，從而降低血壓，減輕大鼠心肌肥厚[23]。此外，人群研究結(jié)果也并不一致[13, 24]。

本研究結(jié)果顯示，與對照組相比，高血壓組外周血miR-21表達上調(diào)。根據(jù)檢測標本不同，分別進行PBMC、血漿和血清亞組分析，僅PBMC中miR-21與高血壓風險相關(guān)，提示是高血壓危險因素。在血漿中尚未發(fā)現(xiàn)兩者的關(guān)聯(lián)，可能是 Hijmans等[13]研究，選擇cel-miR-39作為內(nèi)參。qRT-PCR是檢測miRNA表達變化的確證實驗，其中內(nèi)參的選擇關(guān)系到相對定量結(jié)果是否真實可靠[25]。由于選擇的內(nèi)參不同，相對定量的結(jié)果不同，甚至可能出現(xiàn)截然相反結(jié)論[26]。此外，僅1篇研究涉及血清miR-21水平與高血壓的相關(guān)研究，結(jié)果與PBMC結(jié)論一致。細胞外血漿容易受到凝血過程影響，從而影響血漿 miRNAs 表達譜[27]，這可能部分解釋了血漿 miR-21 與 高血壓之間的陰性結(jié)果。關(guān)于miR-21與高血壓可能機制如下：血管重建是高血壓的基本病理過程，miR-21是血管重構(gòu)調(diào)控的關(guān)鍵分子，它在去分化血管平滑肌細胞中的表達水平明顯高于新鮮分離的分化細胞[28]。其次，活性氧增加與抗氧化防御機制失衡導致氧化應激的加重進而升高血壓，而miR-21的高表達可以加重氧化應激[29]。此外，miR-21的過度表達會調(diào)節(jié)血流誘導的內(nèi)皮炎癥，從而可能引起血壓的波動[30]。

本Meta分析存在一定的局限性。首先納入研究數(shù)量以及樣本含量較少。亞組分析時，也僅有一項血清miR-21水平的研究，存在偏倚的可能性。此外，大多數(shù)研究主要是針對單一miRNA，針對多個miRNA同時作用的研究較少。最后，沒有評估與高血壓有關(guān)的其他危險因素的貢獻，這些變量可能影響了本研究結(jié)果，并部分解釋了相關(guān)病例對照研究中的差異。為了完整準確地評價外周血miR-21水平與高血壓之間的關(guān)聯(lián)，尚需進一步在不同地區(qū)、不同種族人群中開展更多大樣本高質(zhì)量研究予以驗證。

作者貢獻度說明：

朱麗君：數(shù)據(jù)提取和文章撰寫。方正美：數(shù)據(jù)提取和質(zhì)量評估。黃孟云：數(shù)據(jù)核對及質(zhì)量評估。金岳龍：文章指導和修改。陳燕：文章指導和修改。姚應水：基金支持和審校。