柯軍 葉曉燕 ＊ 張海悅 魏瀅 何曉帆 黃麒諭

1 廣東省醫(yī)療器械質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所，國(guó)家藥品監(jiān)督管理局體外循環(huán)器械重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣州市生物醫(yī)用血液凈化材料研究與開(kāi)發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 (廣東 廣州 510663)

2 吉林省富生醫(yī)療器械有限公司 (吉林 長(zhǎng)春 130607)

內(nèi)容提要：目的：針對(duì)旋光儀檢測(cè)透析液中葡萄糖含量時(shí)遇到的檢測(cè)結(jié)果不穩(wěn)定問(wèn)題，探索建立一種更加可靠的檢測(cè)方法。方法：采用碘量法檢測(cè)透析液中葡萄糖含量，通過(guò)對(duì)該方法進(jìn)行重復(fù)性、穩(wěn)定性及回收率實(shí)驗(yàn)，考察了方法的可行性。結(jié)果：該方法檢測(cè)透析液中葡萄糖含量，平均回收率分別為100.45%、100.13%、99.87%，RSD值為0.29%。結(jié)論：本方法具有重復(fù)性好、準(zhǔn)確度高的優(yōu)點(diǎn)，可用于含葡萄糖透析液的檢測(cè)和質(zhì)量控制。

在血液透析過(guò)程中，無(wú)論是糖尿病或非糖尿病的患者都可能發(fā)生低血糖的癥狀，此癥狀是潛在的、嚴(yán)重的并發(fā)癥，所以應(yīng)當(dāng)進(jìn)行嚴(yán)格的葡萄糖水平檢測(cè)和適當(dāng)?shù)臓I(yíng)養(yǎng)[1]。在美國(guó)、日本及大多數(shù)歐洲國(guó)家，使用的透析液中常含有葡萄糖成分，其濃度多為1g/L，而2g/L濃度的含糖透析液使用逐漸減少[2,3]。有研究表明，透析液中糖濃度為1～2g/L時(shí)可以對(duì)透析患者帶來(lái)很大的益處，如Sangill等[4]對(duì)使用含糖透析液和無(wú)糖透析液時(shí)患者血壓的比較研究發(fā)現(xiàn)，使用含糖透析液透析期間患者血壓明顯低于無(wú)糖透析組。丁雪梅等[5]研究發(fā)現(xiàn)，與人體生理濃度相接近的5mmol/L或5.5mmol/L的含糖透析液既可以增加透析期間糖尿病腎病患者的血糖，預(yù)防透析過(guò)程中低血糖的發(fā)生，還可以避免血糖過(guò)高。但是，如果透析液中葡萄糖的含量過(guò)高，則可能存在誘發(fā)炎癥的風(fēng)險(xiǎn)[6]。因此，準(zhǔn)確檢測(cè)透析液中葡萄糖的含量具有重要意義。

YY 0598-2015《血液透析及相關(guān)治療用濃縮物》[7]中規(guī)定，取A液、B液和透析用水按照比例進(jìn)行混合后的透析液為供試液，按照《中國(guó)藥典》中“葡萄糖氯化鈉注射液”項(xiàng)的方法進(jìn)行測(cè)試，以樣品旋光度與2.0852相乘，即得供試液量中含水葡萄糖的重量（g）。通常透析液中含水葡萄糖的標(biāo)示量為1g/L，其檢測(cè)合格范圍即是0.95～1.05g/L（標(biāo)示量的95.0%～105.0%），對(duì)應(yīng)的旋光度值非常低，對(duì)儀器的精密度及穩(wěn)定性要求非常高，檢測(cè)過(guò)程會(huì)存在較大誤差。

本文采用了一種改良后的碘量法進(jìn)行了透析液中葡萄糖含量的檢測(cè)。碘量法是氧化還原滴定法中應(yīng)用比較廣泛的一種方法，是將待測(cè)樣品精密加碘滴定液后，邊振搖邊滴加NaOH試液，在暗處放置一段時(shí)間，加稀硫酸，用硫代硫酸鈉滴定液滴定，至近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，根據(jù)滴定液使用量，計(jì)算葡萄糖的含量。該方法在檢測(cè)右旋糖酐40葡萄糖注射液中葡萄糖的含量中被普遍采用[8]。本研究通過(guò)對(duì)此方法進(jìn)行重復(fù)性、穩(wěn)定性及回收率實(shí)驗(yàn)，考察了方法的可行性，為檢測(cè)透析液中葡萄糖含量提供了更加可靠的方法。

表1.旋光儀檢測(cè)透析液和濃縮液中葡萄糖含量(n=6)

1.材料與方法

1.1 試劑試液[9]

硫代硫酸鈉滴定液（0.1mmol/L）：稱(chēng)取Na2S2O3·H2O 26g，加無(wú)水碳酸鈉0.20g，用蒸餾水溶解成1000mL，搖勻。裝于棕色玻璃瓶中，置暗處，30d后經(jīng)過(guò)濾并標(biāo)定其濃度。

碘滴定液（0.05mol/L）：取碘13.0g，加碘化鉀36g與水50mL溶解后，加鹽酸3滴與水適量使成1000mL，搖勻，用垂熔玻璃濾器濾過(guò)。

氫氧化鈉試液：取氫氧化鈉4.3g，加水溶解，定容至100mL。

表2.專(zhuān)屬性實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=3,%)

表3.重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表(n=6,%)

表4.中間重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表(n=6,%)

表5.穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表(n=3,%)

稀硫酸：取濃硫酸5.7mL，加水稀釋?zhuān)ㄈ葜?00mL。

淀粉指示劑：取可溶性淀粉0.5g，溶解至100mL，加熱煮沸后冷卻。

1.2 樣品檢測(cè)

精密量取透析液100mL，精密加入碘滴定液（0.05mol/L）20mL，滴加氫氧化鈉試液3mL（邊搖邊滴加），暗處放置25min，加稀硫酸3mL，用硫代硫酸鈉滴定液（0.1mmol/L）滴定，至淡黃色時(shí)，加淀粉指示劑2mL，繼續(xù)滴至藍(lán)色消失，將滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正，即得。（每1mL碘滴定液（0.05mol/L）相當(dāng)于9.909mg含水葡萄糖）

2.結(jié)果

2.1 旋光儀檢測(cè)透析液和濃縮液中葡萄糖含量

采用讀數(shù)精確到0.001°的旋光儀檢測(cè)同一批樣品的濃縮液和透析液中含水葡萄糖的含量，結(jié)果顯示：在檢測(cè)透析液時(shí)，由于葡萄糖含量太低，對(duì)儀器要求的精度及穩(wěn)定性較高，使得檢測(cè)的重復(fù)性不理想（RSD=4.81%）；而檢測(cè)濃縮液中葡萄糖時(shí)，由于葡萄糖含量較高，檢測(cè)結(jié)果的重復(fù)性較好（RSD=0.64%）?！吨袊?guó)藥典》通則0621旋光度測(cè)定法中對(duì)檢測(cè)葡萄糖含量時(shí)說(shuō)明“使用讀數(shù)至0.01°并經(jīng)過(guò)檢定的旋光計(jì)進(jìn)行檢測(cè)”，而以上數(shù)值是用讀數(shù)至0.001°的儀器檢測(cè)的，此儀器更加精密，但檢測(cè)透析液時(shí)RSD值卻依然很高，得不到很好的重復(fù)性，說(shuō)明使用旋光儀檢測(cè)透析液中葡萄糖的結(jié)果誤差較大。

表6.回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果表

2.2 碘量法檢測(cè)透析液中葡萄糖含量方法學(xué)試驗(yàn)[10]

2.2.1 專(zhuān)屬性實(shí)驗(yàn)

配制1g/L的含水葡萄糖溶液和按照處方量加入含水葡萄糖和其他成分的濃縮液A，將上述濃縮液A與濃縮液B按照比例與透析用水混合后，分別使用本法檢測(cè)葡萄糖液和透析液中的葡萄糖含量，比較檢測(cè)結(jié)果的差異。

檢測(cè)結(jié)果表明：采用此方法檢測(cè)時(shí)，透析液中其他成分氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、氯化鎂、冰醋酸、碳酸氫鈉對(duì)葡萄糖含量的檢測(cè)沒(méi)有影響。

2.2.2 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

按照上述方法平行6次測(cè)定透析液中葡萄糖含量，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=0.13%，說(shuō)明此方法的重復(fù)性很好。見(jiàn)表3所示。

不同操作者在不同實(shí)驗(yàn)條件下，用不同滴定管進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=0.33%，說(shuō)明此方法的中間重復(fù)性很好。見(jiàn)表4所示。

2.2.3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

連續(xù)3d進(jìn)行檢測(cè)，RSD=0.16%，說(shuō)明此方法的穩(wěn)定性較好[11]。

2.2.4 回收率實(shí)驗(yàn)

配制成3個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液，分別為標(biāo)示量的80%、100%、120%，用該方法進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)算其回收率。

標(biāo)示量的80%、100%、120%的平均回收率分別為：100.45%、100.13%、99.87%。結(jié)果表明，該方法測(cè)定含量回收率較好。

3.討論

對(duì)碘量法檢測(cè)透析液中葡萄糖含量進(jìn)行了重復(fù)性、穩(wěn)定性和回收率實(shí)驗(yàn)研究，結(jié)果表明該方法能夠準(zhǔn)確檢測(cè)出透析液中葡萄糖的含量。

值得一提的是，通常所說(shuō)的葡萄糖的相對(duì)分子質(zhì)量是180，當(dāng)透析液的葡萄糖濃度低于血漿濃度時(shí)，葡萄糖將從血液擴(kuò)散到透析液中。這里的180指的是無(wú)水葡萄糖的分子量，而實(shí)際生產(chǎn)中，通常制造商投料的原料是含有一個(gè)結(jié)晶水的葡萄糖（相對(duì)分子質(zhì)量是198），所以透析液中1g/L葡萄糖的含量指的是含水葡萄糖，應(yīng)用此方法進(jìn)行計(jì)算的時(shí)候需要考慮到這一點(diǎn)。

另外，制造商在生產(chǎn)含糖透析液時(shí)，葡萄糖是投加在濃縮液A液中，通過(guò)本研究結(jié)果可以看出：使用旋光儀進(jìn)行濃縮液A液中葡萄糖含量的檢測(cè)時(shí)，由于A濃縮液中葡萄糖含量一般在35g/L，比透析液高35倍，所以能夠得到很好的重復(fù)性，可以使用旋光儀檢測(cè)法對(duì)濃縮液A液中的葡萄糖進(jìn)行內(nèi)部質(zhì)量控制，以確保最終透析液中葡萄糖的含量。