羅蕙雨 張翠娟 林金鳳

宮頸癌屬于一種惡性腫瘤，在婦科極為常見(jiàn)。2012年，在全球范圍內(nèi)，新發(fā)宮頸癌病例達(dá)到了52.8萬(wàn)，其中26.6萬(wàn)左右死亡，而發(fā)展中國(guó)家占70%左右，其中年輕女性是主體[1]?，F(xiàn)階段，臨床普遍認(rèn)為，宮頸細(xì)胞學(xué)檢查、人乳頭瘤病毒（HPV）檢測(cè)是早期診斷宮頸癌的有效方法，但是仍然有不明確性存在，特別是在診斷腺癌的過(guò)程中，由于形態(tài)學(xué)上重疊，因此很難區(qū)分早期宮頸病變良惡性[2]。本研究探討了乳腺型黏蛋白（MUC1-1）、Toll樣受體-4（TLR4）在不同程度宮頸病變組織中的表達(dá)及臨床意義，具體如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性選取2019年1月-2020年1月筆者所在醫(yī)院不同程度宮頸病變患者石蠟標(biāo)本100例。納入標(biāo)準(zhǔn)：均具有完整的臨床資料；均經(jīng)陰道鏡宮頸活檢病理確診為宮頸病變。排除標(biāo)準(zhǔn)：接受過(guò)放化療等治療。年齡30～72歲，平均（49.3±7.5）歲。在疾病類型方面，輕微子宮頸病變9例（9.0%）；慢性宮頸炎9例（9.0%）；宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）38例（38.0%），其 中 CINⅠ13例（13.0%），CINⅡ13例（13.0%），CINⅢ12例（13.0%）；宮頸腺癌10例（10.0%）；宮頸鱗癌34例（34.0%），其中低分化8例（8.0%），中分化例17例（17.0%），高分化9例（9.0%）。

1.2 方法

1.2.1 MUC-1表達(dá)檢測(cè) 應(yīng)用北京中杉金橋生物工程公司生產(chǎn)的MUC-1抗體，用10%甲醛固定標(biāo)本，石蠟包埋，組織切片，厚度為4 μm，HE染色。運(yùn)用免疫組織化學(xué)染色，切片脫蠟，脫水過(guò)程中將梯度乙醇充分利用起來(lái)，修復(fù)抗原，然后運(yùn)用鏈霉菌抗生物素蛋白/過(guò)氧化物酶連接法（SP法）進(jìn)行染色，用PBS將一抗取代。

1.2.2 TLR4表達(dá)檢測(cè) 運(yùn)用常規(guī)方法進(jìn)行30 min烤片，乙醇、二甲苯脫蠟，PBS洗片，室溫下孵育于3% H2O2中，PBS洗片，室溫下用5%羊血清封閉，將Abnova公司生產(chǎn)的TLR4抗體加入孵育，PBS洗片，將鼠抗人單克隆抗體加入，將通用型二抗滴加其上，室溫下反應(yīng)20 min，PBS洗片，顯色、復(fù)染、透明、封片過(guò)程中分別應(yīng)用DAB顯色試劑盒、蘇木精、組織、樹(shù)膠。用PBS將一抗取代。

1.3 觀察指標(biāo)及評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)

（1）MUC-1表達(dá)評(píng)定。將5個(gè)表達(dá)集中的陽(yáng)性細(xì)胞從每張切片中隨機(jī)選取出來(lái)，200倍視野下觀察，定性時(shí)依據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞/視野×100%，0～4%、5%～100%分別評(píng)定為陰性表達(dá)、陽(yáng)性表達(dá)[3]。（2）TLR4表達(dá)評(píng)定。運(yùn)用綜合評(píng)分法，包括免疫組化切片評(píng)分、陽(yáng)性細(xì)胞率評(píng)分，其中前者依據(jù)染色強(qiáng)度，無(wú)色、淡黃色、棕黃色、棕褐色分別評(píng)定為0、1、2、3分，后者依據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞率，無(wú)陽(yáng)性染色存在于腫瘤細(xì)胞中（0）、1%～10%、11%～50%、51%～75%、76%～100%分別評(píng)定為0、1、2、3、4分。二者相乘，0、1～4、5～8、9～12分分別評(píng)定為陰性、弱陽(yáng)性、中等陽(yáng)性、強(qiáng)陽(yáng)性，分別用-、+、++、+++表示，-為陰性表達(dá)，+、++、+++之和為陽(yáng)性表達(dá)[4]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 21.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以（±s）表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同程度宮頸病變組織MUC1-1陽(yáng)性表達(dá)率比較

宮頸鱗癌患者M(jìn)UC1-1陽(yáng)性表達(dá)率高于慢性宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），均低于輕微子宮頸病變患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；宮頸腺癌患者M(jìn)UC-1陽(yáng)性表達(dá)率低于CINⅡ、CINⅢ、宮頸鱗癌患者、輕微子宮頸病變患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），但與慢性宮頸炎、CINⅠ患者比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表1。

表1 不同程度宮頸病變組織MUC1-1陽(yáng)性表達(dá)率比較 例（%）

2.2 不同程度宮頸病變組織TLR4陽(yáng)性表達(dá)率比較

宮頸鱗癌患者TLR4陽(yáng)性表達(dá)率均高于輕微子宮頸病變患者、慢性宮頸炎患者、CINⅠ患者、CINⅡ患者、CINⅢ患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），宮頸腺癌和宮頸鱗癌患者TLR4陽(yáng)性表達(dá)率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表2。炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宮頸鱗癌患者M(jìn)UC1-1陽(yáng)性表達(dá)率逐漸升高，均低于輕微子宮頸病變患者；宮頸腺癌MUC1-1陽(yáng)性表達(dá)率低于CINⅡ、CINⅢ、宮頸鱗癌患者、輕微子宮頸病變患者。輕微子宮頸病變患者、慢性宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宮頸鱗癌患者的TLR4陽(yáng)性表達(dá)率逐漸升高，和上述研究結(jié)果一致。

表2 不同程度宮頸病變組織TLR4陽(yáng)性表達(dá)率比較 例（%）

3 討論

MUC1-1屬于一種膜結(jié)合型黏蛋白，在胃黏蛋白成分中占有重要地位，結(jié)直腸腫瘤、胰腺腫瘤等其他胃腸道器官也較常見(jiàn)，乳腺癌患者具有較高的MUC1表達(dá)，宮頸黏液腺癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、低生存率與MUC1過(guò)度表達(dá)相關(guān)，在根治性子宮切除術(shù)、淋巴結(jié)清掃術(shù)、術(shù)后輔助性治療的確定過(guò)程中，術(shù)前在宮頸活檢標(biāo)本中將MUC-1抗原表達(dá)水平確定下來(lái)能夠給臨床提供有效依據(jù)。因此，在宮頸黏液腺癌中，MUC-1可以作為獨(dú)立預(yù)后因子[5-6]。MUC1-1陽(yáng)性表達(dá)率在慢性宮頸炎、CIN、宮頸鱗癌中逐漸提升，MUC1-1不表達(dá)于正常宮頸鱗狀上皮上，但是會(huì)在一定程度上表達(dá)于有炎癥的宮頸鱗狀上皮及細(xì)胞癌組織上[7-8]。

Toll樣受體-4（TLR4）表達(dá)于很多皮膚黏膜表面，在皮膚及黏膜免疫反應(yīng)中將重要作用發(fā)揮出來(lái)的途徑為將病原微生物識(shí)別出來(lái)，將天然免疫防疫反應(yīng)激活，對(duì)致炎因子釋放進(jìn)行調(diào)控[9-10]。同時(shí)，對(duì)于很多重要疾病來(lái)說(shuō)，TLR4介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)是公共通路[11]。在人肺癌細(xì)胞中，TLR4能夠?yàn)槟[瘤細(xì)胞將白細(xì)胞介素-8（IL-8）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）等免疫抑制因子分泌出來(lái)提供有利條件，途徑為通過(guò)p38MAPK依賴的方式，而IL-8對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移造成了直接而深刻的影響，VEGF能夠?yàn)檠苄律峁┯欣麠l件[12-13]。在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，TLR4參與其中，但是，HPV16型高危病毒感染和宮頸癌中TLR4表達(dá)無(wú)關(guān)，即TLR4可能對(duì)其他病原體感染進(jìn)行了介導(dǎo)，從而為HPV病毒對(duì)宮頸上皮細(xì)胞致病作用提供有利條件[14]。

相關(guān)醫(yī)學(xué)研究表明，在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，MUC1-1、TLR4可能參與其中，宮頸癌、宮頸良性病變具有不同的MUC1-1、TLR4表達(dá)，能夠?yàn)榕R床鑒別診斷宮頸不同組織類型、判斷預(yù)后提供有效依據(jù)[15-16]。本研究結(jié)果表明，慢性宮頸

綜上所述，MUC1-1、TLR4在不同程度宮頸病變組織中的表達(dá)不同，能夠?qū)⒂行б罁?jù)提供給臨床的鑒別診斷及預(yù)后評(píng)定。