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        人乳腺癌端粒酶基因RNA與雌激素受體、細(xì)胞周期蛋白B1、C-erbB-2相關(guān)性研究

        2021-01-16 07:54:24唐加步姚運(yùn)紅歐陽(yáng)清
        現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生 2021年1期
        關(guān)鍵詞:端粒酶生存率陽(yáng)性率

        唐加步,姚運(yùn)紅△,歐陽(yáng)清,黃 冰

        (1.廣東醫(yī)科大學(xué)東莞校區(qū)病理學(xué)系,廣東 東莞 523808;2.東莞市東城醫(yī)院病理科,廣東 東莞 523000;3.廣東醫(yī)科大學(xué)湛江附屬醫(yī)院病理科,廣東 湛江 524000)

        端粒酶作為一種RNA依賴(lài)特殊DNA聚合酶,是一種特異合成端粒DNA的逆轉(zhuǎn)錄酶,是一種蛋白質(zhì)與RNA組成的核糖核蛋白體。有研究表明,端粒酶的活化與惡性腫瘤的發(fā)生密切相關(guān),其活性的維持對(duì)惡性腫瘤的發(fā)展和患者預(yù)后也十分重要[1]。G2/M期轉(zhuǎn)換的關(guān)鍵調(diào)控分子為細(xì)胞周期蛋白B1(CyclinB1)/P34CDC2復(fù)合物,CyclinB1在S期開(kāi)始合成,G2期定位于細(xì)胞質(zhì)中,與P34CDC2結(jié)合形成有絲分裂促進(jìn)因子,促進(jìn)細(xì)胞從G2期進(jìn)入M期,從而完成有絲分裂。癌基因——C-erbB-2基因位于第17號(hào)染色體q21帶上,參與正常細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化和分裂,受到體內(nèi)外某些因素作用后可被激活,具有腫瘤轉(zhuǎn)化活性。C-erbB-2在乳腺癌中的表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等有關(guān)。本研究探討了人乳腺癌端粒酶基因RNA(hTR)、CyclinB1、雌激素受體(ER)、C-erbB-2基因的表達(dá)、臨床意義及相關(guān)性,現(xiàn)報(bào)道如下。

        1 資料與方法

        1.1資料

        1.1.1一般資料 選取2012—2013年在廣東醫(yī)科大學(xué)湛江附屬醫(yī)院接受乳腺癌根治術(shù)的乳腺癌患者70例,患者年齡16~67歲;其中浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌65例,浸潤(rùn)性小葉癌5例;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移28例(40.0%)。70例患者術(shù)前均未給予任何抗癌治療,病理資料完整。

        1.1.2試劑 (1)原位雜交試劑:地高辛標(biāo)記的hTR-cRNA探針、蛋白酶K、馬血清、緩沖液和四唑氮藍(lán)/5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸顯色液均由北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部病理系提供。(2)免疫組織化學(xué)試劑:ER、CyclinB1、C-erbB-2基因單克隆抗體,鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶連結(jié)(SP)試劑盒和DAB顯色試劑盒均為即用型,均由北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。ER、CyclinB1、C-erbB-2基因單克隆抗體SP試劑盒產(chǎn)品批號(hào)分別為E749809E、K126614B、C123406B;粘片劑氨醛酸乙基硅由武漢博士德生物工程有限公司提供。

        1.2方法

        1.2.1標(biāo)本處理 70例乳腺癌患者標(biāo)本經(jīng)10%甲醛溶液固定,石蠟包埋。以4 μm連續(xù)切片,每個(gè)蠟塊均有蘇木精-伊紅染色對(duì)照片。用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗及用不加一抗的切片作為陰性對(duì)照,已知陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照。

        1.2.2病理檢查 70例乳腺癌患者標(biāo)本均經(jīng)常規(guī)蘇木精-伊紅染色后由3位病理醫(yī)師確診。腫瘤病理分型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤大小及相關(guān)臨床參數(shù)均參照國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)。hTR檢測(cè)采用原位雜交方法,ER、CyclinB1、C-erbB-2檢測(cè)采取免疫組織化學(xué)SP法。

        1.2.3結(jié)果判斷 由2名經(jīng)驗(yàn)豐富的病理醫(yī)師采用雙盲法至少觀察5個(gè)具有代表性高倍視野,不少于1 000個(gè)細(xì)胞,染色細(xì)胞數(shù)超過(guò)10%者判斷為ER、C-erbB-2、CyclinB1表達(dá)陽(yáng)性,否則為表達(dá)陰性。hTR陽(yáng)性表達(dá)為細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)著色,陽(yáng)性信號(hào)為藍(lán)紫色顆粒;陰性為細(xì)胞不顯色。以不加探針及RNA酶處理切片作為陰性對(duì)照。乳腺癌組織ER陽(yáng)性物質(zhì)定位于細(xì)胞核,陽(yáng)性反應(yīng)為細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒。CyclinB1陽(yáng)性物質(zhì)定位于細(xì)胞核,C-erbB-2基因定位于細(xì)胞膜,陽(yáng)性反應(yīng)為細(xì)胞膜上出現(xiàn)棕黃色顆粒。見(jiàn)圖1~4。

        陽(yáng)性物質(zhì)定位于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì),呈藍(lán)紫色顆粒。

        陽(yáng)性物質(zhì)定位于細(xì)胞核,呈棕黃色顆粒。

        陽(yáng)性物質(zhì)定位于細(xì)胞核,呈棕黃色顆粒。

        1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,計(jì)數(shù)資料以率或構(gòu)成比表示,采用χ2檢驗(yàn)。采用Spearman相關(guān)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        陽(yáng)性物質(zhì)定位于細(xì)胞膜,呈棕黃色顆粒。

        2 結(jié) 果

        2.1hTR、ER、C-erbB-2、CyclinB1表達(dá)與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系 腫瘤大小、是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、不同組織分級(jí)患者h(yuǎn)TR表達(dá)陽(yáng)性率比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);不同病理類(lèi)型患者h(yuǎn)TR表達(dá)陽(yáng)性率比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者ER、C-erbB-2、CyclinB1表達(dá)陽(yáng)性率比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。不同組織分級(jí)、腫瘤大小患者CyclinB1表達(dá)陽(yáng)性率比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。不同病理類(lèi)型、腫瘤大小、組織分級(jí)患者ER、C-erbB-2表達(dá)陽(yáng)性率比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。ER與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)(r=-0.329,P<0.05),C-erbB-2、CyclinB1均與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)(r=0.467、0.548,P<0.05),CyclinB1與組織分級(jí)和腫瘤大小呈正相關(guān)(r=0.589、0.568,P<0.05)。

        表1 hTR、ER、C-erbB-2、CyclinB1表達(dá)與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系[n(%)]

        2.2hTR與ER、C-erbB-2、CyclinB1表達(dá)的相關(guān)性 腺癌組織hTR表達(dá)水平與ER無(wú)關(guān)(r=0.167,P>0.05),與C-erbB-2、CyclinB1呈正相關(guān)(r=0.439、0.354,P<0.05)。

        2.3ER與C-erbB-2、CyclinB1表達(dá)的關(guān)系 乳腺癌組織ER表達(dá)水平與C-erbB-2、CyclinB1表達(dá)均呈負(fù)相關(guān)(r=-0.402、-0.376,P<0.05)。

        3 討 論

        HIYAMA等[2]和YASHIMA等[3]認(rèn)為,端粒酶表達(dá)與乳腺癌大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期及腫瘤進(jìn)程有關(guān),可作為判定乳腺癌患者預(yù)后的指標(biāo)。本研究結(jié)果顯示,hTR表達(dá)陽(yáng)性率與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和組織分級(jí)有關(guān),支持hTR可作為判定乳腺癌患者預(yù)后的指標(biāo)。

        乳腺癌是一種雌激素依賴(lài)性腫瘤。近年來(lái),對(duì)ER在乳腺癌中的作用的研究較多。本研究結(jié)果顯示,ER表達(dá)陽(yáng)性率隨組織分級(jí)增加,隨淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移而降低,ER表達(dá)水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。提示ER表達(dá)陰性的腫瘤惡性程度高,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移可能性大,患者預(yù)后不良。所以,對(duì)ER陰性患者即使是未見(jiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移也應(yīng)重視術(shù)后的綜合治療。本研究結(jié)果顯示,乳腺癌組織hTR表達(dá)水平與ER無(wú)關(guān),提示乳腺癌的端粒酶激活可能與乳腺癌的雌激素因素?zé)o關(guān)。

        C-erbB-2基因是表皮生長(zhǎng)因子受體家族成員之一,位于染色體17q21,又稱(chēng)為neu基因。C-erbB-2基因的異常表達(dá)明顯增加了乳腺癌轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn),并降低了乳腺癌患者生存率[4]。C-erbB-2基因被認(rèn)為是腫瘤患者預(yù)后不良相關(guān)的一個(gè)標(biāo)記物,其過(guò)度表達(dá)與腫瘤細(xì)胞侵襲性、抗激素治療及總體低生存率明顯相關(guān)[5]。本研究結(jié)果顯示,C-erbB-2與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān),支持其可作為判斷乳腺癌患者預(yù)后的重要指標(biāo)。C-erbB-2與ER表達(dá)呈負(fù)相關(guān),乳腺癌患者ER陽(yáng)性者內(nèi)分泌治療有效且預(yù)后較好,C-erbB-2的過(guò)度表達(dá)說(shuō)明癌基因激活,使乳腺癌依賴(lài)激素生長(zhǎng)的特性受到抑制,不能對(duì)內(nèi)分泌治療產(chǎn)生反應(yīng)[6]。乳腺癌組織hTR表達(dá)與C-erbB-2呈正相關(guān),提示乳腺癌端粒酶激活可能與C-erbB-2基因有關(guān)。

        人類(lèi)多種腫瘤(如食管癌、非小細(xì)胞性肺癌等)均發(fā)現(xiàn)有CyclinB1的表達(dá)。有研究表明,乳腺癌的發(fā)病與多種細(xì)胞周期調(diào)控因子的異常表達(dá)相關(guān)[7-8]。乳腺癌有絲分裂指數(shù)和增殖指數(shù)與CyclinB1表達(dá)有關(guān)[9-10],表明CyclinB1可干預(yù)G2/M期調(diào)控,促進(jìn)細(xì)胞的異常分裂、增殖。DING等[11]研究發(fā)現(xiàn),CyclinB1可作為判斷ER+乳腺癌患者預(yù)后的標(biāo)志物,其發(fā)現(xiàn)CyclinB1對(duì)ER+乳腺癌患者無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移生存率、無(wú)病生存率、無(wú)復(fù)發(fā)生存率和總生存率均具有顯著的預(yù)測(cè)能力。本研究也發(fā)現(xiàn),CyclinB1表達(dá)水平與hTR呈正相關(guān),與ER呈負(fù)相關(guān)。表明在乳腺癌發(fā)生的過(guò)程中可能存在端粒酶激活與細(xì)胞周期關(guān)鍵調(diào)控因子CyclinB1異常表達(dá)的協(xié)同機(jī)制,但尚需進(jìn)一步研究證實(shí)。

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