鄭志瑤，王偉軍，陳 波，劉建新，任大喜*

（1 浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院奶業(yè)科學(xué)研究所 杭州310058 2 浙江一鳴食品股份有限公司 浙江溫州325000）

根據(jù)WHO 統(tǒng)計(jì)，心血管疾病（CVD）是目前全球人口的主要死因之一，每年造成1 700 多萬人死亡[1]。近年來國內(nèi)外大量臨床和動(dòng)物研究表明，服用乳酸菌，特別是乳桿菌及其相關(guān)制品具有減少血清膽固醇含量，降低心血管疾病發(fā)病率的功效[2-3]。乳酸菌（LAB）在自然界中廣泛存在，是發(fā)酵工業(yè)中不可缺少的微生物。諸多研究也報(bào)道了其作為益生菌對(duì)人體健康的促進(jìn)作用，包括：免疫調(diào)節(jié)、減輕乳糖不耐受、預(yù)防結(jié)腸癌和減少過敏反應(yīng)[4-6]。1974年，Mann 等[7]最早發(fā)現(xiàn)乳酸菌具有降低人體血清膽固醇的潛力，這引起國內(nèi)外研究人員對(duì)乳酸菌及乳制品在防治CVD 方面的關(guān)注。植物乳桿菌299v[8]能顯著降低高膽固醇血癥患者血清中低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平。肖琳琳等[9]用菌株KM-166 灌胃高脂血癥小鼠，顯著降低了血清中總膽固醇（TC）和甘油三酯（TG）水平。Wang 等[10]分離到1 株植物乳桿菌LIP-1，體外降膽固醇能力為71.47 μg/mL，同時(shí)能顯著降低大鼠血清TC 和LDL-C 水平。

益生菌（Probiotic）是一類在宿主體內(nèi)以一定數(shù)量存活并發(fā)揮有益作用的微生物。人體內(nèi)胃腸道中的酸和膽鹽環(huán)境能抑制微生物的生長，潛在的益生菌應(yīng)具有酸和膽汁的耐受性，這是菌株在小腸中生存及發(fā)揮益生作用不可或缺的因素[11]。微生物的抗生素敏感性測定對(duì)評(píng)價(jià)菌株安全性具有重要意義。只有不具備耐藥性的菌株用于人體才是安全的。此外，部分乳酸菌在生長過程中產(chǎn)生的代謝物，能抑殺腸道中的致病菌，調(diào)節(jié)腸道菌群平衡。對(duì)于體外篩選降膽固醇乳酸菌來說，對(duì)菌株的益生特性評(píng)價(jià)是不可缺少的環(huán)節(jié)。只有具備了益生菌最基本條件的菌株，才能開展體內(nèi)研究。

本研究中在體外篩選高效降膽固醇的乳酸菌，對(duì)其酸耐受性、膽鹽耐受性、抗生素敏感性及代謝產(chǎn)物的抗菌活性進(jìn)行評(píng)估，為后續(xù)體內(nèi)研究及功能性乳制品開發(fā)提供具有益生潛力的菌株。

1 材料和方法

1.1 材料與試劑

樣品來源：從吉林延邊朝鮮族自治州農(nóng)戶采集了8 個(gè)傳統(tǒng)發(fā)酵泡菜樣本；浙江金華地區(qū)金華火腿食品廠采集了4 個(gè)火腿樣品；嬰兒糞便采集自浙江杭州20 個(gè)未滿1 歲的母乳喂養(yǎng)的健康嬰兒。

陽性對(duì)照菌株：嗜酸乳桿菌（Lactobacillus acidophilus）ATCC 43121，購自美國典型培養(yǎng)物保藏中心。

指示菌株：大腸桿菌O157∶H7（Escherichia coli O157∶H7）ATCC 25922和鼠傷寒沙門氏菌（Salmonella typhimurium）ATCC 13311，購自美國典型培養(yǎng)物保藏中心；單核細(xì)胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes）CMCC 54007 和金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）CMCC 26003，購自中國醫(yī)學(xué)細(xì)菌保藏管理中心。

水溶性膽固醇（細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)），美國Sigma-Aldrich 公司；膽鹽（生化試劑）、MRS 肉湯培養(yǎng)基和瓊脂培養(yǎng)基（生化試劑）、抗生素藥敏試紙（生化試劑），均購自杭州微生物試劑有限公司；LB 瓊脂培養(yǎng)基（生化試劑），北京陸橋技術(shù)股份有限公司；細(xì)菌基因組DNA 抽提試劑盒（生化試劑），生工生物工程（上海）有限公司；其余試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

7980A 氣相色譜儀，美國Agilent 公司；3-30K低溫高速離心機(jī)，德國Christ 公司；MD200-2 氮吹儀，鄭州南北儀器公司；ES-315 高壓滅菌鍋，日本Tomy 公司；JEM-1230 透射電子顯微鏡，日本電子株式會(huì)社；SW-CJ-IF 超凈工作臺(tái)，蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司。

1.3 方法

1.3.1 乳酸菌的分離 取1 g 樣品放入9 mL 的MRS 液體培養(yǎng)基中，渦旋混勻后于37 ℃下富集培養(yǎng)48 h。然后吸取富集液1 mL，用無菌生理鹽水進(jìn)行10 倍梯度稀釋，選取合適的3 個(gè)稀釋梯度，每個(gè)梯度取菌液100 μL 涂于MRS 固體培養(yǎng)基上，37 ℃培養(yǎng)48 h。培養(yǎng)結(jié)束后，選擇生長有50～150 個(gè)單菌落的平板，從中挑取典型菌落，繼續(xù)在MRS 平板上多次劃線純化，直至整個(gè)平板上的菌落形態(tài)一致。根據(jù)菌落的形態(tài)，革蘭氏染色結(jié)果和過氧化氫酶活性對(duì)其進(jìn)行初步的判定。最初鑒定為乳酸菌的菌株在含40%（體積分?jǐn)?shù)）甘油的MRS 液體培養(yǎng)基中于-80 ℃冷凍保存。所有菌株在試驗(yàn)前都在MRS 平板上劃線活化2～3 次。

1.3.2 高效降膽固醇乳酸菌的篩選 將1.3.1 節(jié)篩選的菌株在MRS 肉湯中培養(yǎng)18 h 后，通過離心（8 000 r/min，5 min，4 ℃）收獲菌體細(xì)胞，并重懸于無菌生理鹽水中使?jié)舛冗_(dá)到約109CFU/mL。將菌懸液以2%（體積分?jǐn)?shù)）的接種量接種到水溶性膽固醇含量為0.1 g/L 的MRS 肉湯（含0.3%的膽鹽）中，37 ℃培養(yǎng)48 h。同時(shí)，以不接菌的培養(yǎng)基作為空白對(duì)照，以菌株ATCC 43121 作為陽性對(duì)照。

取發(fā)酵液于8 000 r/min 離心5 min，用無菌注射器取1 mL 發(fā)酵上清液，并通過0.22 μm 過濾器過濾到氣相色譜樣品瓶（2 mL）中。使用Agilent 7890A 氣相色譜系統(tǒng)進(jìn)行分析[12]。色譜條件：色譜柱（HP-5 彈性石英毛細(xì)管柱：30 m×0.32 mm×0.25 μm）；升溫程序?yàn)?00 ℃升至340 ℃（以20 ℃/min升溫12 min）；進(jìn)樣口溫度為250 ℃，檢測口溫度為300 ℃；載氣（He）流速1.5 mL/min；進(jìn)樣量為0.5 μL；分流比5∶1。菌株的降膽固醇能力按式（1）進(jìn)行計(jì)算。

菌株的降膽固醇能力（%）=（S0－S1）/S0×100

式中，S0——空白對(duì)照樣品中膽固醇對(duì)應(yīng)色譜峰的面積；S1——測試樣品中膽固醇對(duì)應(yīng)色譜峰的面積。

1.3.3 菌株的鑒定 將1.3.2 節(jié)中得到的高效降膽固醇的菌株在MRS 平板上進(jìn)行劃線培養(yǎng)，記錄平板上的菌落大小、顏色、形態(tài)。用革蘭氏染色法觀察菌體形態(tài)，并通過JEM-1230 透射電子顯微鏡對(duì)菌體進(jìn)一步觀察。

采用細(xì)菌基因組DNA 抽提試劑盒，根據(jù)說明書提取目標(biāo)菌株基因組DNA。將提取的乳酸菌基因組DNA 作為PCR 擴(kuò)增的模板，采用細(xì)菌通用引 物 （27f：AGTTTGATCMTGGCTCAG，1492r：GGTTACCTTGTTACGACTT）進(jìn) 行16S rDNA 的PCR 試驗(yàn)，對(duì)PCR 產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳。將PCR 產(chǎn)物送至生工生物工程（上海）有限公司進(jìn)行測序。

1.3.4 酸耐受性測定 將待測菌株懸浮于pH 值分別為1.5 和3.0 的MRS 肉湯中，將活細(xì)胞數(shù)校正至約108CFU/mL，在37 ℃下培養(yǎng)。在0，1.5，3和6 h 時(shí)采樣，用平板計(jì)數(shù)法對(duì)培養(yǎng)液進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。菌株ATCC 43121 作為對(duì)照菌株。以時(shí)間為橫坐標(biāo)，活菌數(shù)的對(duì)數(shù)lg（CFU/mL）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行耐酸曲線的繪制。

1.3.5 膽鹽耐受性測定 將待測菌體懸浮于膽鹽含量分別為0.3%，0.5%和1.0%的MRS 肉湯中，將活細(xì)胞數(shù)校正至約108CFU/mL，在37 ℃下培養(yǎng)6 h。在試驗(yàn)的0 h 和6 h 取樣，用平板計(jì)數(shù)法對(duì)培養(yǎng)液進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。菌株ATCC 43121 作為對(duì)照菌株。菌株的膽鹽耐受能力用式（2）表示：

式中N1——菌株在6 h 時(shí)的活菌數(shù)，CFU/mL；N2——菌株在0 h 時(shí)的活菌數(shù)，CFU/mL。

1.3.6 抗生素敏感性研究 根據(jù)臨床和試驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)研究所技術(shù)指南（CLSI）[13]，使用紙片擴(kuò)散法[14]對(duì)菌株的抗生素敏感性進(jìn)行研究。取100 μL 待測菌株的菌懸液（約107CFU/mL）均勻涂布于MRS 平板上。將含有抗生素的試紙用無菌的鑷子平鋪于瓊脂培養(yǎng)基表面，然后將平板在37 ℃下培養(yǎng)24 h。使用游標(biāo)卡尺測量抑制區(qū)的直徑。用抑菌圈的直徑評(píng)估菌株的抗生素敏感性。

1.3.7 植物乳桿菌ZY08 和發(fā)酵乳桿菌I631 代謝產(chǎn)物的抑菌性能 采用國際通用牛津杯法測量植物乳桿菌ZY08 和發(fā)酵乳桿菌I631 代謝產(chǎn)物的抑菌活性。將4 株指示菌的菌懸液（約108CFU/mL）按1%的量加入到LB 瓊脂培養(yǎng)基（45 ℃）中，充分混合，定量加入15 mL/皿。待LB 培養(yǎng)基冷凝后，輕輕拔掉事先放置的無菌牛津杯 （直徑為8.00 mm±0.01 mm）。定量以200 μL/孔加入菌株ZY08和I631 的發(fā)酵上清液樣品，并以未接菌的MRS培養(yǎng)基（pH 6.2）作為空白對(duì)照。將接好發(fā)酵液的平板置于37 ℃，培養(yǎng)24 h。培養(yǎng)結(jié)束后，用游標(biāo)卡尺測量抑菌圈直徑。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

2 結(jié)果與分析

2.1 高效降膽固醇菌株的篩選結(jié)果

從嬰兒糞便、泡菜和金華火腿共計(jì)32 個(gè)樣品中分離得到102 株乳酸菌，這些菌株中有8 株菌的降膽固醇能力大于40.0%，如圖1所示。菌株ZY08 和I631 去除培養(yǎng)基中膽固醇的能力高達(dá)67.45%和63.19%，顯著高于ATCC 43121（P＜0.05）。菌株HT5 的降膽固醇能力為57.64%，與ATCC 43121 相比無顯著差異（P＞0.05）。其余5 株菌的降膽固醇能力為40.31%～55.44%，顯著低于ATCC 43121（P＜0.05）。因此，選取具有較強(qiáng)降膽固醇能力的菌株ZY08 和I631 用于后續(xù)研究。

圖1 降膽固醇菌株篩選結(jié)果（a）及膽固醇的GC分離圖譜（b）Fig.1 Results of cholesterol-lowering LAB strains screening （a）and GC pattern of cholesterol （b）

2.2 菌株的鑒定

菌株ZY08 和I631 的菌落形態(tài)、菌體形態(tài)及細(xì)胞形態(tài)如圖2所示。菌株ZY08 菌落大小0.5～2 mm，呈圓形，邊緣整齊，白色，表面濕潤光滑；菌體為單個(gè)、成對(duì)或短鏈狀。菌株I631 菌落大小0.3～2 mm，呈圓形，乳白色，表面光滑濕潤。采用透射電鏡對(duì)上述2 株乳酸菌的細(xì)胞形態(tài)進(jìn)行觀察，不產(chǎn)芽孢，圓端直桿菌，大小為（0.2～0.4）×（2～5）μm。將菌株的測序結(jié)果在NCBI 網(wǎng)站上進(jìn)行BLAST 序列比對(duì)，結(jié)果顯示菌株ZY08 與植物乳桿菌同源性達(dá)到99%以上，菌株I631 與發(fā)酵乳桿菌同源性達(dá)到99%以上。因此，經(jīng)16S rDNA 鑒定菌株ZY08 為植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum），菌株I631 為發(fā)酵乳桿菌（Lactobacillus fermentum）。

2.3 酸耐受性結(jié)果

圖3呈現(xiàn)了在pH 為1.5 和3.0 的酸性環(huán)境中植物乳桿菌ZY08、發(fā)酵乳桿菌I631 和ATCC 43121 在1.5，3 及6 h 時(shí)的存活情況。從整體來看，菌株I631 和ZY08 的酸耐受性顯著高于ATCC 43121（P＜0.05）。pH 為1.5 時(shí)，3 株菌活菌數(shù)在0～6 h 都呈下降趨勢。在3 h 時(shí)，菌株ZY08和I631 減少的活菌數(shù)小于1 個(gè)數(shù)量級(jí)；在6 h 時(shí)，菌株ZY08 和I631 的活菌數(shù)均大于6 lg（CFU/mL）。pH 為3.0 時(shí)，菌株ZY08 和I631 初始活菌數(shù)與6 h 時(shí)活菌數(shù)相比，分別減少了0.66 lg（CFU/mL）和0.32 lg（CFU/mL），2 株菌的活菌數(shù)均大于7 lg（CFU/mL）。Liong 等[15]報(bào)道了7 株干酪乳桿菌在pH 2.0 中培養(yǎng)2 h，活菌數(shù)由初始的10 lg（CFU/mL）減少為4.0～5.0 lg（CFU/mL）。前人研究發(fā)現(xiàn)一株具有降膽固醇能力的植物乳桿菌Lp45[16]在pH 3.0 條件下處理3 h，活菌數(shù)降低了約4.0 lg（CFU/mL）。與這些菌株相比，菌株ZY08 和I631在模擬胃酸環(huán)境下有較強(qiáng)的耐受性。

2.4 膽鹽耐受性結(jié)果

圖4為植物乳桿菌ZY08、發(fā)酵乳桿菌I631和ATCC 43121 對(duì)3，5 及10 g/L 膽鹽的耐受性。與菌株ATCC 43121 相比，菌株ZY08 的膽鹽耐受能力與其無顯著差異（P＞0.05），菌株I631 的膽鹽耐受能力顯著低于菌株ATCC 43121（P＜0.05）。在膽鹽為3 g/L 時(shí)，3 株菌的膽鹽耐受能力均達(dá)到80%以上，其中菌株ZY08 的膽鹽耐受能力高達(dá)88.32%。隨著膽鹽含量的增加，菌株的耐受能力也有不同程度的下降。但是，菌株ZY08 和I631 在10 g/L 高膽鹽含量下仍具有較高的活性，膽鹽耐受能力分別為47.56%和42.33%。這與Wang 等[17]的報(bào)道類似：1 株瑞士乳桿菌MG9-2 對(duì)0.3%的膽鹽耐受力為87.89%，在10 g/L 的膽鹽環(huán)境下耐受能力高達(dá)52.71%。因此，菌株ZY08 和I631 能耐受膽鹽，滿足了在腸道存活的基本要求。

圖2 菌株ZY08 和I631 的菌落及菌體形態(tài)Fig.2 Colony and cell morphology of strains ZY08 and I631

圖3 植物乳桿菌ZY08、發(fā)酵乳桿菌I631和ATCC 43121 的酸耐受性結(jié)果Fig.3 Acid tolerance of L.plantarum ZY08，L.fermentum I631 and ATCC 43121

圖4 植物乳桿菌ZY08、發(fā)酵乳桿菌I631 和ATCC 43121 的膽鹽受性結(jié)果Fig.4 Bile salt tolerance of L.plantarum ZY08，L.fermentum I631 and ATCC 43121

2.5 抗生素敏感性

根據(jù)CLSI 的藥敏試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)菌株的抗生素敏感性進(jìn)行判斷。菌株對(duì)抗生素越敏感，在藥敏紙片周圍的活性越弱，形成的透明圈即抑菌圈（如圖5所示）越大。表1為植物乳桿菌ZY08 和發(fā)酵乳桿菌I631 對(duì)8 種抗生素的敏感性結(jié)果。從表中可以看出，菌株ZY08 比菌株I631 對(duì)試驗(yàn)中的抗生素更敏感。菌株I631 對(duì)慶大霉素的敏感性呈中介，對(duì)其余的抗生素都呈敏感狀態(tài)。菌株ZY08 對(duì)頭孢唑林最敏感，抑菌圈高達(dá)（37.32±0.13）mm。菌株I631 對(duì)青霉素的抑菌圈 （32.12 mm±0.17 mm）最大。2 株菌對(duì)慶大霉素敏感性較弱。因此，菌株ZY08 和I631 都不具備耐藥性，對(duì)人體健康不存在潛在威脅。

表1 植物乳桿菌ZY08 和發(fā)酵乳桿菌I631 的抗生素敏感性Table 1 Antibiotic susceptibility of L.plantarum ZY08 and L.fermentum I631

圖5 植物乳桿菌ZY08 和發(fā)酵乳桿菌I631 抗生素敏感性示例圖Fig.5 Antibiotic susceptibility of L.plantarum ZY08 and L.fermentum I631

2.6 抗菌活性

植物乳桿菌ZY08 和發(fā)酵乳桿菌I631 的發(fā)酵上清液對(duì)4 種腸道致病菌的抑制作用如表2所示。菌株發(fā)酵上清液中代謝產(chǎn)物的抑菌作用越強(qiáng)，則牛津杯周圍致病菌株的生長能力越弱，形成的生長抑制圈即抑菌圈（如圖6所示）越大。整體來看，菌株ZY08 和I631 對(duì)4 種致病菌均有一定的抑制作用，尤其對(duì)G+菌金黃色葡萄球菌和單核細(xì)胞增生李斯特菌的抑制作用最強(qiáng)（P＜0.05）。此外，菌株I631 對(duì)每個(gè)致病菌的抗性均高于菌株ZY08。菌株I631 對(duì)這4 種致病菌的抑制作用由大到小為：單核細(xì)胞增生李斯特菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌O157∶H7、鼠傷寒沙門氏菌。菌株ZY08 的抗菌活性由強(qiáng)到弱為：金黃色葡萄球菌、單核細(xì)胞增生李斯特菌、大腸桿菌O157∶H7、鼠傷寒沙門氏菌。因此，植物乳桿菌ZY08 和發(fā)酵乳桿菌I631 生長過程中產(chǎn)生的代謝物質(zhì)具有一定的抗菌活性，對(duì)人體腸道健康具有促進(jìn)作用。

圖6 植物乳桿菌ZY08 和發(fā)酵乳桿菌I631 抑菌活性示例圖Fig.6 Antibacterial activity of L.plantarum ZY08 and L.fermentum I631

表2 植物乳桿菌ZY08 和發(fā)酵乳桿菌I631 的抑菌活性Table 2 Antibacterial activity of L.plantarum ZY08 and L.fermentum I631

3 討論

迄今為止，篩選益生菌的樣品大多為泡菜、發(fā)酵乳制品、發(fā)酵肉制品、嬰兒的糞便樣品等，其中金華火腿、發(fā)酵酸魚、乳扇、藏靈菇都是我國傳統(tǒng)發(fā)酵食品，受全世界消費(fèi)者的歡迎。傳統(tǒng)發(fā)酵食品在我國具有悠久的歷史，而且資源豐富、種類繁多，其中有一些優(yōu)良的微生物是經(jīng)過幾千年的馴化才相傳至今，這些微生物資源對(duì)于我們開發(fā)功能性益生菌來說具有重要意義。Zeng 等[18]從酸菜汁中分離出了1 株布氏乳桿菌P2，在體外能夠清除43.95%的膽固醇。Jampaphaeng 等[19]從發(fā)酵的豇豆中分離出的植物乳桿菌KJ03 具有53.0%的膽固醇降低率。Ren 等[20]從嬰兒糞便中分離出1 株降膽固醇能力為38.0%的嗜酸乳桿菌1.1854。1 株乳酸乳球菌BO37 的降膽固醇能力為43.7%[21]。與這些結(jié)果相比，本研究中來自嬰兒糞便的植物乳桿菌ZY08 和發(fā)酵乳桿菌I631 表現(xiàn)出優(yōu)異的降膽固醇能力。但是，這2 株菌的降膽固醇機(jī)理還需進(jìn)一步研究。

人體每天分泌約2.5 L 的胃液，空腹pH 為1.5，進(jìn)食后pH 為3.0～5.0，同時(shí)肝臟每天分泌約1 L 膽汁到小腸中，膽鹽含量為3～5 g/L[22]。因此，研究菌株在模擬腸胃環(huán)境中的存活情況，是益生菌開發(fā)過程中的關(guān)鍵工作。不同來源的乳酸菌對(duì)腸胃環(huán)境的耐受性是不同的，一般來源于人體自身的菌株具有更好的耐受性。本研究結(jié)果表明，植物乳桿菌ZY08 和發(fā)酵乳桿菌I631 具有在低pH 和高膽鹽環(huán)境下存活的潛力。這與植物乳桿菌LH-511、植物乳桿菌10-4、干酪乳桿菌11-6 的酸及膽鹽耐受能力相似[23]。

目前，抗生素耐藥性是全球公共衛(wèi)生問題，人們也越來越關(guān)心益生菌的耐藥性。也有研究[24]表明食物是乳酸菌轉(zhuǎn)移抗生素抗性的潛在渠道。因此，在篩選益生菌時(shí)，評(píng)價(jià)其對(duì)臨床相關(guān)抗生素的耐藥性至關(guān)重要。在挪威乳制品中用作發(fā)酵劑的乳桿菌[25]具有對(duì)環(huán)丙沙星和慶大霉素的耐藥性。1株被認(rèn)為是潛在益生菌的乳桿菌ZDY2013[26]對(duì)青霉素具有中等耐藥性。在這些研究中，菌株對(duì)抗生素的耐藥性被認(rèn)為是固有的，不會(huì)傳遞給其它腸道微生物。然而，Zielińska 等[27]報(bào)道了2 株植物乳桿菌對(duì)四環(huán)素具有耐藥性，由于四環(huán)素耐藥性在乳酸菌中是可轉(zhuǎn)移的，因此這2 株植物乳桿菌并不能用于食品和人體中。本研究的植物乳桿菌ZY08 和發(fā)酵乳桿菌I631 無耐藥性，因此具有作為益生菌的潛力。

病原菌的抑菌作用是評(píng)價(jià)功能性益生菌的重要特性之一。本研究發(fā)現(xiàn)植物乳桿菌ZY08 和發(fā)酵乳桿菌I631 對(duì)金黃色葡萄球菌和單核細(xì)胞增生李斯特菌有很強(qiáng)的抑制作用。前人研究報(bào)道了植物乳桿菌Lp9[28]能抑制單核細(xì)胞增生李斯特菌的生長，Abushelaibi 等[29]發(fā)現(xiàn)9 株乳酸菌對(duì)金黃色葡萄球菌有較強(qiáng)的抑制作用。這些報(bào)道與我們的研究結(jié)果相似。其它研究[30-31]也報(bào)道了乳桿菌可以抑制大腸桿菌和鼠傷寒沙門氏菌。乳酸菌的抗菌活性與其代謝產(chǎn)生的有機(jī)酸（例如乳酸、乙酸）、過氧化氫、細(xì)菌素和胞外多糖（EPS）有關(guān)。

4 結(jié)論

本研究篩選得到了2 株具有較強(qiáng)降膽固醇活性的乳酸菌，植物乳桿菌ZY08 和發(fā)酵乳桿菌I631，體外降膽固醇能力高達(dá)67.45%和63.19%。同時(shí)，在pH 為1.5 和3.0 的條件下培養(yǎng)6 h，2 株菌的活菌數(shù)均大于6 lg（CFU/mL）；對(duì)3，5 及10 g/L 膽鹽具有一定的耐受性，膽鹽耐受能力均達(dá)到80%以上（膽鹽含量為3 g/L）；對(duì)常見的8 種抗生素（青霉素、氨芐青霉素、頭孢唑林、丁胺卡那、慶大霉素、紅霉素、復(fù)方新諾明、氯霉素）都不具備耐藥性，對(duì)人體健康不存在潛在威脅；2 株菌的代謝產(chǎn)物對(duì)4 種腸道致病菌（金黃色葡萄球菌、單核細(xì)胞增生李斯特菌、大腸桿菌O157∶H7、鼠傷寒沙門氏菌）具有一定的抑制作用。本研究所篩選的植物乳桿菌ZY08 和發(fā)酵乳桿菌I631 具有較好的益生潛力，可進(jìn)一步用于功能性乳制品的開發(fā)。