唐振利

（北京市垂楊柳醫(yī)院，北京 100021）

子宮頸癌是婦女常見惡性腫瘤，其發(fā)病率在婦科癌癥中居第三位，全球每年有50多萬新發(fā)病例和近30萬死亡病例，發(fā)展中國家占85%以上。高危型人乳頭狀瘤病毒（Human Papilloma Virus，HPV）持續(xù)感染是引起子宮頸癌前病變和子宮頸癌的最主要原因。其發(fā)生要經(jīng)過低級別鱗狀上皮內(nèi)病變（LSIL）、高級別鱗狀上皮內(nèi)病變（HSIL）發(fā)展為浸潤癌[1]，但并不是所有的子宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）都會進展為癌。為防止對患者進行不必要的治療，分析其生物學行為將具有重要意義。HPV Ll蛋白是近年來研究HPV感染狀態(tài)的有效指標[2]，本研究通過檢測HPV L1蛋白在宮頸病變的表達，探討其與CIN的相關(guān)性，結(jié)果如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2013年12月至2015年12月北京市垂楊柳醫(yī)院收治的宮頸檢查發(fā)現(xiàn)HPV病毒感染，病理組織學確診為CIN的76例患者，年齡30～67歲，平均年齡（38.46±0.81） 歲。納入標準：①有性生活史；②既往無惡性腫瘤病史、無盆腔放化療病史；③無子宮手術(shù)史；④非妊娠期婦女，有宮頸液基細胞學結(jié)果。排除標準：①有子宮內(nèi)膜病變病史；②有免疫系統(tǒng)抑制性疾病史；③服用免疫抑制劑史。

1.2 方法

標本采集：①宮頸細胞的采集：采用ThinPrep專用取樣刷及宮頸細胞保存液，于宮頸處順時針旋轉(zhuǎn)3周，采集并保存宮頸脫落細胞標本。樣本放于-20 ℃冰箱長期保存。② 宮頸組織的采集：選取入組患者陰道鏡活檢宮頸組織，蠟塊（病理科提供），切片備用。

L1蛋白的測定：以免疫細胞化學技術(shù)、非同位素標記核酸分子雜交技術(shù)為基礎(chǔ)的免疫水平與核酸水平的雙重檢測。主要試劑： L1蛋白檢測的主要試劑：CytoReact賽泰-細胞/組織人乳頭瘤病毒（Broad SPectrum HPV L1）染色試劑盒。L1殼蛋白為核蛋白質(zhì)，細胞核呈紅色染色為HPV L1蛋白的特異性陽性染色，其他部位的紅染均為非特異性染色。僅有一個被紅染的細胞核即可判斷為L1呈陽性。

1.3 觀察指標

①比較不同宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變HPV L1蛋白表達的陽性率。②分析HPV L1蛋白在預測不同級別宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變的敏感度、特異度、陽性預測值及陰性預測值，并與TCT進行比較。

1.4 統(tǒng)計學分析

采用SPSS 21.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析。計數(shù)L1蛋白的表達情況，用χ2檢驗進行數(shù)據(jù)分析，明確 L1蛋白表達與宮頸癌前病變的關(guān)系，各種率的比較采用Pearsonχ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 L1蛋白與宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變的關(guān)系

HPV L1蛋白LSIL陽性率44.12%（15/34），HSIL陽性率11.90%（5/42），LSIL組HPV L1蛋白陽性率大于HSIL組，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=10.04，P＜0.005），見表1、見圖1。

表1 L1蛋白與宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變的關(guān)系[例（%）]

2.2 HPV L1蛋白檢測與TCT檢測預測組織學診斷HSIL病變價值的比較

在高危型HPV陽性婦女中，宮頸組織HPV L1蛋白預測組織學診斷HSIL病變的特異度顯著低于TCT檢測（P＜0.01），但其敏感度和陰性預測值均顯著高于細胞學檢查（P＜0.01）；兩者的陽性預測值比較無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表2。

3 討論

HPV L1蛋白是HPV的主要衣殼蛋白，約占衣殼蛋白的90%以上，L1蛋白在所有的HPV類型中均高度保守，是主要的屬特異性抗原。而L1蛋白的表達缺乏不能有效地刺激機體產(chǎn)生免疫反應，即發(fā)生免疫逃逸，也就是說CIN細胞會逃脫機體的細胞免疫系統(tǒng)的監(jiān)視和清除，從而持續(xù)存在，甚至進展到癌[3]。采用免疫組化技術(shù)檢測Ll蛋白的表達，可了解HPV DNA是否被整合到宿主細胞的染色體上，以判斷HPV感染引起的良性或惡性病變。因此，HPV L1蛋白的表達情況可能提示是否存在子宮頸病變。王家建等[4]結(jié)果顯示，HPV L1蛋白結(jié)果陽性婦女的子宮頸病變可自然轉(zhuǎn)歸，而結(jié)果陰性婦女的病變進一步發(fā)展。沈小靜等[5]研究發(fā)現(xiàn)HPV L1蛋白的表達可能與宮頸病變程度相關(guān)，CINⅠ陽性率最高，隨著子宮頸病變程度的增加，其陽性率呈下降趨勢。田智丹等[6]發(fā)現(xiàn)隨著宮頸病變的加重，HPV L1蛋白的表達越來越低。本研究也在高危型HPV初篩陽性婦女中發(fā)現(xiàn)這種現(xiàn)象，經(jīng)組織病理學確診的LSIL組的HPV L1蛋白陽性率高于HSIL組（P＜0.05），隨著宮頸病變的嚴重程度的進展，HPV L1蛋白的表達率逐漸下降。這均表明HPV L1蛋白是否表達與子宮頸病變嚴重程度密切相關(guān)，顯示HPV L1蛋白檢測能在一定程度上分流高危型HPV初篩陽性婦女。本研究選擇病理組織作為檢查標本，防止因細胞丟失降低陽性率，因此結(jié)果更為可靠。

目前，采用子宮頸細胞學檢查對高危型HPV初篩陽性婦女進行分流，它的特異度高，但敏感度較低，其準確率具有主觀性，與細胞病理學醫(yī)師的經(jīng)驗相關(guān)，因此，需要由經(jīng)驗豐富和專業(yè)素養(yǎng)高的細胞病理學醫(yī)師來判斷，而這樣的醫(yī)師我國目前相對缺乏。對此，很多研究者探尋其他檢查方法來分流HPV初篩陽性婦女，并發(fā)現(xiàn)甲基化測定、miRNA檢測基因等標志物臨床價值比較高，但這些方法復雜，限制在臨床上的應用。王富偉等[7]研究發(fā)現(xiàn)子宮頸脫落細胞HPV L1蛋白檢測，其陰性與CINⅠ病變進展的風險增加無關(guān)，能在一定程度上預測LSIL/CIN I的轉(zhuǎn)歸，可用于初次就診的TCT≤LSIL且HPV陽性的LSIL/CIN I患者的分流。李莉等[8]發(fā)現(xiàn)HPV L1在幫助了解子宮頸鱗狀上皮病變嚴重程度，預測子宮頸鱗狀上皮病變的發(fā)展趨勢、轉(zhuǎn)歸、預后及選擇臨床處理方案中有一定參考價值。為探討HPV L1蛋白是否能預測宮頸高級別病變，能否更好地對宮頸高級別病變進行分流，本研究進一步評估了HPV L1蛋白檢測分流處理高危型HPV初篩陽性子宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變婦女的臨床價值，研究結(jié)果顯示雖然HPV L1蛋白檢測在預測組織學診斷HSIL病變時的特異度低于細胞學檢查，但其敏感度和陰性預測值較高，剛好可以彌補細胞學檢查的高特異度和低敏感度。因此宮頸組織HPV L1蛋白檢測與細胞學檢查相結(jié)合能提高HPV初篩陽性婦女的分流效能，減少不必要的有創(chuàng)治療，尤其對于宮頸高級別病變。

綜上所述，HPV L1蛋白可能成為高危型HPV陽性患者的一種合適的分流方法，與細胞學檢查互補，有助于提高宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變的篩查率，在指導宮頸病變的轉(zhuǎn)歸中具有一定的臨床意義。