樊鵬威，許少奇，王斌，陶文，喻娓，劉建中

(武漢市第七醫(yī)院檢驗(yàn)中心,湖北 武漢)

0 引言

2019 年12 月在我國湖北省武漢市首先被檢測到，隨后施虐全球的冠狀病毒是一種從未在人體中被發(fā)現(xiàn)的冠狀病毒新毒株[1]。世界衛(wèi)生組織已經(jīng)將該病毒的肺炎命名為“COVID-19”[2]，同時(shí)，國際病毒分類委員會(huì)聲明，將新型冠狀病毒命名為“SARA-CoV-2”.在疫情暴發(fā)流行以來，隨著對病毒研究的深入，我們對SARS-CoV-2 病毒的認(rèn)識也越來越清楚，但仍會(huì)有一些未解之處。例如新型冠狀病毒病人出院隔離結(jié)束后，復(fù)查核酸結(jié)果為陽性的原因分析。本文針對這類病人進(jìn)行了初步的研究分析，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

采集2020 年4 月至5 月到武漢市第七醫(yī)院新冠康復(fù)門診復(fù)診的新冠出院隔離結(jié)束病例1628 例，其中男779 人，女849 人，年齡為9-92 歲，平均(57.4±14.4)歲。所有確診患者均符合國家衛(wèi)生健康委員會(huì)印發(fā)的《新型冠狀病毒肺炎診療方案(試行第七版)》出院標(biāo)準(zhǔn)，即連續(xù)兩次痰、鼻咽拭子等呼吸道標(biāo)本核酸檢測陰性(采樣時(shí)間至少中間間隔24 小時(shí))。

1.2 對所有病例采集咽拭子進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光RT-PCR 檢測SARS-CoV-2 核酸，檢測試劑由上海之江生物科技股份有限公司提供。

1.3 試劑新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)特異性IgM/IgG 抗體(膠體金免疫層析法)，由英諾特(唐山)生物科技有限公司研制。

1.4 方法

1.4.1 SARS-CoV-2 病毒核酸檢測

技術(shù)原理病原體核酸在裂解結(jié)合緩沖液存在的環(huán)境中釋放并與磁珠結(jié)合，然后通過磁力棒將結(jié)合在磁珠上的核酸同磁珠一起分離，再用洗脫液成。

溶解與磁珠結(jié)合的核酸，使樣品的核酸得到提取分離。

1.4.2 SARS-CoV-2 病毒特異性IgM/IgG 抗體檢測

在出院隔離28 天后，采集康復(fù)患者血清標(biāo)本，按試劑盒說明書進(jìn)行SARS-CoV-2 病毒特異性IgM/IgG 抗體檢測，室溫放置15 分鐘內(nèi)觀察結(jié)果。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 16.0 軟件數(shù)據(jù)。

2 結(jié)果

2.1 在COVID-19 患者出院復(fù)診核酸后，大多數(shù)出院病人核酸檢測為陰性，僅20 例核酸檢測為陽性，也就是我們俗稱的“復(fù)陽病人”，復(fù)陽病人占總檢測出院患者比率為1.23%。

表1 疾病康復(fù)期COVID-19 患者中復(fù)查核酸結(jié)果為陽性人數(shù)比例

2.2 在20 例SARS-CoV-2 病毒核酸檢測結(jié)果陽性的COVID-19 出院患者中，檢測其特異性IgM/IgG 抗體情況。

表2 二次檢測核酸為陽性患者的IgM 和IgG 抗體情況分析表

在20 例“復(fù)陽”患者中，抗體檢測僅有2 例IgM 和IgG抗體均為陽性，而其余18 例只要IgG 抗體為陽性。

3 討論

研究表明SARS-CoV-2 病毒的潛伏期為1-14d，多數(shù)為3-7d，該疾病的傳染源為COVID-19 患者及無癥狀攜帶者。雖然處于潛伏期的感染者多數(shù)沒有明顯的臨床癥狀和體征，但具有傳染性，可以作為疾病的傳染源，增加切斷傳染源的難度[3-5]。因此，對出院后患者的追蹤觀察，防止出院患者“復(fù)陽”，對切斷傳染源顯得尤為重要。

雖然病毒核酸檢測(RT-PCR)已成為診斷COVID-19 患者的確診方法，但是PCR 檢測有很多局限性，受各方面條件限制，對實(shí)驗(yàn)室條件要求高、方法檢測陽性率偏低等。ARSCoV-2 的特定S 蛋白和N 蛋白，會(huì)刺激機(jī)體的免疫系統(tǒng)引起抗體應(yīng)答，機(jī)體最早出現(xiàn)的抗體是IgM， SARS-CoV-2 特異性IgM 抗體多在3-5d 后開始出現(xiàn)陽性，IgG 抗體滴度在恢復(fù)期較急性期有4 倍以上升高，若檢測到IgM 和IgG 抗體陽性，可作為COVID-19 的診斷指標(biāo)之一[6]。由此可知抗體的檢測具有極其重要的價(jià)值，抗體檢測可用做新型冠狀病毒核酸檢測陰性疑似病例的補(bǔ)充檢測指標(biāo)或者疑似診斷病例診斷中與核酸檢測協(xié)同使用。

對出院隔離后核酸檢測為陽性患者進(jìn)行分析，我們可以看出，此類患者在全部出院患者所占比率非常低，僅為1.23%，沒有之前研究報(bào)道那么嚴(yán)重，這可能于加強(qiáng)了出院患者的核酸檢測數(shù)量有關(guān)，降低了病人檢測的假陰性，降低復(fù)陽的可能性。在這些病毒核酸檢測為陽性的患者中IgM90%為陰性，只有2 例病毒IgM 為弱陽性，可能是由于IgM 抗體水平還未降到正常水平。這類人群均為隔離觀察，病毒的2 次感染問題可能性極低，病毒核酸復(fù)查為陽性存在主要原因我們分析有下面幾方面的原因：①病人體內(nèi)病毒載量較低，受標(biāo)本采集方式限制，最好采集肺泡灌洗液進(jìn)行核酸檢測，有COVID-19 死亡患者病理解剖顯示SARS-CoV-2 病毒僅殘留在尸體肺細(xì)胞中，由病毒引起了肺部的實(shí)質(zhì)性病理變化；②患者本人具有基礎(chǔ)性疾病，導(dǎo)致免疫功能低下，而機(jī)體病毒沒有真正被清除，引起核酸檢測“復(fù)陽”；③受研發(fā)廠家試劑盒影響，試劑盒有缺陷，檢測特異性較低，不能達(dá)到臨床的要求.應(yīng)該選擇超敏方法可能會(huì)改善復(fù)陽患者樣品中的RNA 陽性檢測，排除假陰性；④在采集標(biāo)本的過程，采集者沒有嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行，導(dǎo)致采集的患者標(biāo)本不合格，檢測結(jié)果呈假陰性。

我國應(yīng)對本次COVID-19 疫情已經(jīng)取得了階段性成果，初步抑制了疫情的發(fā)展，主要的成功經(jīng)驗(yàn)就是需要控制好傳染性疾病的三要素：傳染源、傳播途徑和易感人群。本文主要的目的就是要分析“復(fù)陽”的患者，找出其中規(guī)律性內(nèi)容，進(jìn)一步加深對SARS-CoV-2 病毒的認(rèn)知，切斷傳染源。針對“復(fù)陽”患者可能產(chǎn)生的原因，我們建議一定要延長檢疫時(shí)間，還要增加核酸檢測次數(shù)，并對重點(diǎn)人群如有嚴(yán)重基礎(chǔ)疾病或者老年患者進(jìn)行持續(xù)性的醫(yī)學(xué)觀察，選用符合臨床要求的檢測試劑，只有充分認(rèn)識了SARS-CoV-2 病毒，才能夠有效戰(zhàn)勝該疾病。