李陽(yáng)超

(簡(jiǎn)陽(yáng)市人民醫(yī)院 檢驗(yàn)科，四川 簡(jiǎn)陽(yáng))

0 引言

自身免疫性肝病 (autoimmune liver diseases， AILD) 是指由于自身免疫系統(tǒng)功能紊亂而引發(fā)的肝細(xì)胞或膽管上皮細(xì)胞炎癥性病變[1]， 包括自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis，AIH)、原發(fā)膽汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis， PBC)、原發(fā)硬化性膽管炎(primary sclerosing cholangitis， PSC)及重疊綜合征[2]。近年來(lái)，隨著診療水平的逐漸提高，AILD 患者檢出率不斷上升。目前已知與AILD 相關(guān)的自身抗體包括抗核抗體(autinu- clear antibodies，ANA)、抗肝腎微粒體抗體(antibody to liver/kidney microsome，抗-LKM)、抗1 型肝細(xì)胞溶質(zhì)抗原抗體(anti-liver cytolol antgen type 1，抗-LC1)、抗可溶性肝抗原抗體(antibody against the solube liver antigen，抗-SLA)/抗肝胰抗原抗體(antibody anainst the liver-pancreas antigen，抗-LP) 和抗線粒體抗體(antimitochondrial antibody，AMA)等[3]。本研究旨在探討血清自身抗體檢測(cè)在AILD 患者的臨床應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

從醫(yī)院HIS 和LIS 收集患者資料，選取2018 年3 月到2019 年3 月簡(jiǎn)陽(yáng)市人民醫(yī)院檢查就診的AILD 患者82 例，并選擇同期入院就診的82 例病毒性肝炎患者作為對(duì)照組。AILD 患者的臨床診斷及分型均符合《自身免疫性肝病診斷和治療指南》中的診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]；病毒性肝炎患者的臨床診斷符合《病毒性肝炎防治方案 (試行)》中的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]。試驗(yàn)組患者中男性18 例，女性64 例，年齡26-68 歲，平均(44.3±8.5)歲；對(duì)照組患者中男性20 例，女性62 例，年齡25-70 歲，平均(45.1±9.1)歲。兩組患者性別構(gòu)成比和年齡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 方法

所有患者均空腹8-12 小時(shí)，清晨于患者肘靜脈抽取空腹靜脈血5mL，每位患者各抽取2 個(gè)紅管，孵育30min 后，使用離心機(jī)(3000r/min)離心10min 分離血漿待測(cè)。1、ANA采用間接熒光免疫法(IIF)檢測(cè)，使用德國(guó)歐蒙公司試劑盒，將待測(cè)血清用0.01mol/L PH 值7.2 的磷酸鹽緩沖液(PBS)作1：100 稀釋，滴加25ul 于抗原基質(zhì)片上，反應(yīng)30min，洗滌浸泡并放置搖床上震蕩5min，加入20ul 采用異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記羊抗人IgG 抗體的熒光二抗避光室溫溫浴30min，洗滌浸泡并放置搖床上震蕩5min，加入緩沖甘油封片后熒光顯微鏡下判讀結(jié)果，檢測(cè)結(jié)果以陽(yáng)性或陰性表示。2、采用免疫印跡條帶法檢測(cè)AMA-M2、SLA/LP、LKM-1、LC1、Sp100、gp210 六種抗體，試劑盒為深圳市亞輝龍生物科技股份有限公司原裝試劑，嚴(yán)格按照使用說(shuō)明書要求操作檢測(cè)和判斷結(jié)果，檢測(cè)結(jié)果以陽(yáng)性或陰性表示。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 19.0 軟件分析，計(jì)量資料采用(Mean±SD)表示，計(jì)數(shù)資料采用N(%)表示；兩樣本均數(shù)比較采用t 檢驗(yàn)，率的比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 試驗(yàn)組和對(duì)照組患者抗體檢出率對(duì)比分

試驗(yàn)組患者自身免疫性抗體ANA、AMA-M2、SLA/LP、LKM-1、LC1、Sp100、gp210 陽(yáng)性率均顯著高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表1。

表1 試驗(yàn)組和對(duì)照組患者抗體檢出率對(duì)比分析[n(%)]

2.2 不同類型自身免疫性肝病抗體檢出率對(duì)比分析

AIH 患者以自身免疫性抗體ANA、AMA-M2、SLA/LP、LKM-1、LC1 陽(yáng)性為主，PBC 患者以自身免疫性抗體ANA、AMA-M2、Sp100、gp210 陽(yáng)性為主，見表2。

表2 不同類型自身免疫性肝病抗體檢出率對(duì)比分析[n(%)]

3 討論

目前國(guó)內(nèi)外尚未闡明AILD 發(fā)病的機(jī)制，但相關(guān)研究顯示AILD 的發(fā)病率存在明顯的性別差異，文獻(xiàn)報(bào)道女性AILD 發(fā)病率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于男性。本研究中AILD 患者中男女比例為9:32，與其他文獻(xiàn)報(bào)道基本相符。查閱相關(guān)文獻(xiàn)資料發(fā)現(xiàn)[6]，女性由于絕經(jīng)后雌激素水平的改變和性染色的不同加之懷孕期間母體與胎兒之間不斷發(fā)生物質(zhì)交換等原因，自身免疫系統(tǒng)容易發(fā)生紊亂，容易比男性更容易患自身免疫性疾病。但相關(guān)的理論研究和實(shí)驗(yàn)研究還在不斷的探索之中。

本研究顯示，AILD 患者自身免疫性抗體陽(yáng)性率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于病毒性肝炎患者，提示自身免疫性抗體的檢查對(duì)于臨床對(duì)AILD 的診斷和輔助診斷具有一定意義。在AIH 患者中，抗體陽(yáng)性率最高的是ANA，高達(dá)86.57%，其次是AMA-M2 和SLA/LP。ANA 是抗各種細(xì)胞核成分抗體的泛指，雖然其在AIH 患者陽(yáng)性率最高，但缺乏特異性，ANA 不僅存在于PBC和PSC 等自身免疫性肝病患者血清中，同樣也存在于其他自身免疫性疾病患者(如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、SLE 等)血清中，甚至存在于各種病毒性、酒精性肝炎等患者血清中。但有研究表示，高滴度的ANA 對(duì)AIH 的診斷價(jià)值較大[7]。AMA 是以線粒體內(nèi)膜上某些物質(zhì)作為靶抗原的一類抗體，根據(jù)靶抗原的不同，可分為1-9 個(gè)亞型，其中AMA-M2 是診斷PBC 最為特異的一種抗體，陽(yáng)性率可高達(dá)80%以上。目前與PSC 相關(guān)的自身抗體研究較少，最新一項(xiàng)研究表明IgA 型抗-GP2 在PSC 患者中持續(xù)檢出，其對(duì)于PSC 風(fēng)險(xiǎn)分層具有一定的臨床應(yīng)用價(jià)值[8]。本研究顯示，雖然AIH 患者以自身免疫性抗體ANA、AMA-M2、SLA/LP、LKM-1、LC1 陽(yáng)性為主，PBC 患者以自身免疫性抗體ANA、AMA-M2、Sp100、gp210 陽(yáng)性為主，但PSC 患者并未發(fā)現(xiàn)特異性的抗體。對(duì)不同類型的AILD，自身免疫性抗體類型和陽(yáng)性率有很大差別。這就為臨床醫(yī)生在自身抗體譜的選擇帶來(lái)了挑戰(zhàn)，如何有針對(duì)性的為患者開展特異性強(qiáng)，靈敏度高的自身抗體檢測(cè)，將是檢驗(yàn)人員和臨床醫(yī)生共同努力的方向。

終上所述，自身免疫抗體檢測(cè)對(duì)AILD 的診斷有一定的應(yīng)用價(jià)值，不同疾病類型具有不同類型的自身免疫性抗體譜。針對(duì)不同類型疾病，臨床醫(yī)生有針對(duì)性地開展具有特征性的抗體檢測(cè)很有必要。