楊麗， 陸東慶， 馬寒

(中山大學(xué)附屬第五醫(yī)院皮膚科，廣東 珠海 519000)

白癜風(fēng)(vitiligo)是一種常見的獲得性色素脫失性皮膚黏膜病，病因復(fù)雜，確切發(fā)病機(jī)制尚未明確，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為白癜風(fēng)是一種多基因遺傳的自身免疫性疾病[1]。白細(xì)胞介素33(IL-33)是機(jī)體受到內(nèi)外各種應(yīng)激刺激時(shí)發(fā)揮作用的重要炎性細(xì)胞因子，在自身免疫性疾病、炎性疾病及腫瘤等多種疾病中發(fā)揮重要作用[2-3]?？扇苄允荏wST2(sST2)是IL-33的誘騙受體，通過與跨膜受體ST2競爭性結(jié)合IL-33進(jìn)而負(fù)性調(diào)控后者介導(dǎo)的信號通路及炎性反應(yīng)[4]。目前，關(guān)于IL-33和sST2在白癜風(fēng)患者外周血表達(dá)水平的研究報(bào)道較少，本實(shí)驗(yàn)通過檢測白癜風(fēng)患者血清IL-33和sST2的表達(dá)水平，初步探討細(xì)胞因子IL-33和sST2在白癜風(fēng)發(fā)病機(jī)制中的可能作用及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

納入2016年1月—12月我院皮膚科門診確診為白癜風(fēng)[5]的患者62例，入組患者就診前1個(gè)月未進(jìn)行系統(tǒng)性及外用藥物等治療，無伴發(fā)其他自身免疫性疾病、系統(tǒng)性疾病及感染性疾病。其中男34例，女28例，年齡3～68歲，平均(30.74±12.55)歲，發(fā)病年齡1.5歲～60歲，平均(28.19±14.72)歲。病程20天～40年，平均(95.97±72.14)個(gè)月。選取30例健康體檢者作為對照組，其中男17例，女13例，平均年齡(31.18±14.61)歲。兩組性別(2=0.03，P=0.869)、年齡(t=1.39，P=0.168)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，受檢者(或其監(jiān)護(hù)人)均簽署知情同意書。

62例白癜風(fēng)患者按照疾病活動(dòng)度評分(vitiligo disease activity score,VIDA)[6]分為進(jìn)展期48例、穩(wěn)定期14例。白癜風(fēng)皮損嚴(yán)重程度按白斑面積大小進(jìn)行分級， 以手掌占體表面積1%為標(biāo)準(zhǔn)，輕度(<1%)44例、中重度及以上(1%～5%)18例。有家族史者占20.97%，發(fā)病前有精神應(yīng)激誘因者占17.74%，微量元素異常者占24.19%，自身抗體異常者占16.13%(主要為抗甲狀腺過氧化物酶抗體)。

1.2 主要試劑及儀器

人IL-33和sST2定量酶聯(lián)免疫分析試劑盒(上海西塘生物科技有限公司)。酶標(biāo)儀(美國BIO-RAD/IMARK公司)。

1.3 檢測方法

收集白癜風(fēng)患者及對照組患者外周靜脈血4 mL干燥管促凝，分離血清，標(biāo)記編號，-80 ℃冰凍保存待測。用ELISA法檢測血清IL-33和sST2水平，實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格按照試劑盒使用說明操作。用酶標(biāo)儀讀取450 nm吸光度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中IL-33和sST2含量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 白癜風(fēng)患者與對照組血清IL-33、sST2水平比較

白癜風(fēng)患者進(jìn)展期、穩(wěn)定期血清IL-33水平分別為(105.57±40.62) pg/mL和(87.33±38.46) pg/mL，均明顯高于對照組血清IL-33水平[(8.35±3.78) pg/mL]，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t值分別為4.67、2.34，P值分別為0.004、0.031)，而進(jìn)展期與穩(wěn)定期比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.15，P=0.28)；白癜風(fēng)患者進(jìn)展期、穩(wěn)定期血清sST2水平分別為(89.11±31.62) pg/mL和(60.04±35.17) pg/mL，明顯高于對照組血清sST2水平[(15.29±8.04) pg/mL]，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t值分別為3.59、2.09，P值分別為0.027、0.045)，進(jìn)展期與穩(wěn)定期比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.83，P=0.601)。詳見表1。

表1 白癜風(fēng)患者與正常對照組外周血 IL-33 及sST2 的表達(dá)水平Tab.1 The levels of serum IL-33 and sST2 in the patients with vitiligo and healthy group (pg

2.2 白癜風(fēng)患者不同皮損面積分組間血清IL-33、sST2水平比較

不同白斑面積分組間血清IL-33、sST2水平如表2所示，白斑面積<1%組和≥1%組進(jìn)行比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均>0.05)。

表2 白癜風(fēng)患者不同白斑面積間外周血IL-33及sST2 的表達(dá)水平Tab.2 The levels of serum IL-33 and sST2 in different groups in the patients with

2.3 不同臨床亞組間血清IL-33、sST2水平比較

比較不同臨床亞組間血清IL-33、sST2水平，結(jié)果如表3所示，不同性別、家族史、精神應(yīng)激、微量元素亞組間血清IL-33、sST2水平均未見明顯差異(P值均>0.05)，而自身抗體異常組sST2水平與無自身抗體異常組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.46，P=0.015)。

表3 白癜風(fēng)患者不同臨床亞組間血清IL-33與sST2的表達(dá)水平Tab.3 The levels of serum IL-33 and sST2 in different clinical subgroups in the patients with

2.4 年齡、發(fā)病年齡及病程與血清IL-33、sST2水平的相關(guān)性

Pearson相關(guān)分析顯示，白癜風(fēng)患者血清IL-33、sST2水平與年齡(r值分別為-0.29、-0.15)、發(fā)病年齡(r值分別為-0.15、-0.29)及病程(r值分別為0.18、0.14)均無明顯相關(guān)性(P值均>0.05)。

3 討論

白癜風(fēng)的發(fā)病率約為0.1%～2%[7]，病因復(fù)雜，其發(fā)病與多種細(xì)胞因子相關(guān)[8-9]。細(xì)胞因子是一類具有廣泛生物活性的小分子蛋白質(zhì)，本文旨在探討細(xì)胞因子IL-33及其可溶性受體ST2在白癜風(fēng)發(fā)生發(fā)展中的可能作用。

IL-33是IL-1家族的新成員,可參與調(diào)控先天和適應(yīng)性免疫反應(yīng)[2, 10]。其可組成性表達(dá)并“儲存”在細(xì)胞核中參與調(diào)節(jié)基因表達(dá)；當(dāng)膜受損或細(xì)胞凋亡壞死時(shí)則被動(dòng)釋放至胞外作為警報(bào)素發(fā)揮調(diào)節(jié)作用[11]?？缒ば蚐T2和可溶性ST2 (sST2)是IL1RL1基因選擇性剪接產(chǎn)生的兩個(gè)主要轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，胞外游離的IL-33通過與跨膜型ST2和IL-1受體協(xié)同蛋白(IL-1RAcP)結(jié)合，激活受體細(xì)胞下游結(jié)合核因子κB (NF-κB)、氨基末端激酶和胞外信號調(diào)節(jié)激酶等介導(dǎo)的信號通路，誘導(dǎo)機(jī)體局部的炎癥及免疫反應(yīng)[4,12-13]。研究顯示IL-33/ST2信號通路的啟動(dòng)在多種炎癥性和自身免疫性疾病中發(fā)揮作用[12,14]。

本研究結(jié)果顯示，62例白癜風(fēng)患者血清中IL-33水平明顯高于對照組(P<0.05)；比較不同分期、不同皮損面積臨床亞組間血清IL-33水平，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。提示IL-33可能參與白癜風(fēng)發(fā)病，但其血清水平的升高可能主要發(fā)生在白癜風(fēng)發(fā)病前期或起始階段，不隨疾病進(jìn)展改變，與疾病活動(dòng)度及嚴(yán)重程度無明顯相關(guān)性，病情的進(jìn)展或是IL-33激活I(lǐng)L-33/ST2信號通路進(jìn)而引起一系列微環(huán)境及免疫、炎癥反應(yīng)紊亂的結(jié)果。Li等[15]通過體外培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)IL-33可抑制干細(xì)胞因子(stem cell factor,SCF)和堿性成纖維細(xì)胞生長因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)的表達(dá)，而增加IL-6和TNF-α的分泌。SCF和bFGF可刺激黑素細(xì)胞生長，與黑素細(xì)胞的存活密切相關(guān)；IL-6和TNF-α則分別通過活化抗黑素細(xì)胞的免疫應(yīng)答和抑制黑素干細(xì)胞的分化、增殖及降低酪氨酸酶活性等抑制黑素細(xì)胞。這與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析相似，即血清IL-33水平升高后或可引起微環(huán)境中上述細(xì)胞因子的改變，進(jìn)而誘發(fā)黑素細(xì)胞損傷或數(shù)量改變。有研究表明在多發(fā)性硬化及炎癥性腸病中，早期階段IL-33通過介導(dǎo)炎癥細(xì)胞的募集和激活以及Th細(xì)胞反應(yīng)來增強(qiáng)炎癥反應(yīng)導(dǎo)致疾病的發(fā)生；而在后期IL-33作用于Treg和巨噬細(xì)胞，促進(jìn)其免疫調(diào)節(jié)功能而限制和抑制炎癥反應(yīng)的破壞力[12]。本研究結(jié)果顯示進(jìn)展期及穩(wěn)定期IL-33水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，或也提示在早期IL-33介導(dǎo)一系列炎癥反應(yīng)導(dǎo)致黑素細(xì)胞受損，疾病發(fā)生發(fā)展；在疾病后期IL-33可能作用于Treg和巨噬細(xì)胞等啟動(dòng)免疫調(diào)節(jié)功能使疾病進(jìn)入穩(wěn)定期，但I(xiàn)L-33與不同細(xì)胞結(jié)合的時(shí)機(jī)及機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。本研究顯示年齡、發(fā)病年齡及病程與IL-33無明顯相關(guān)性，比較家族史、精神應(yīng)激、微量元素及自身抗體臨床亞組間血清IL-33水平，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示IL-33致病機(jī)制可能相對獨(dú)立于上述因素，但本研究病例數(shù)較少，且僅檢測外周血細(xì)胞因子濃度，具體相關(guān)性可能需要更大樣本量、更多樣性的研究分析。

研究還發(fā)現(xiàn)，白癜風(fēng)患者血清中sST2水平明顯高于對照組(P<0.05)。sST2的表達(dá)具有很強(qiáng)的可誘導(dǎo)性，推測白癜風(fēng)患者血清中IL-33水平升高后啟動(dòng)IL-33/ST2信號通路，引發(fā)局部異常炎癥反應(yīng)，機(jī)體負(fù)反饋性編碼轉(zhuǎn)錄sST2，拮抗過度活化的炎性反應(yīng)。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)體外用sST2處理穩(wěn)定表達(dá)ST2的小鼠胸腺瘤細(xì)胞，由于抑制了IL-33/ST2通路而削弱了NF-κB的活化[16]；此外，與野生型小鼠比較，給sST2轉(zhuǎn)基因小鼠IL-33處理并不伴隨炎癥因子(IL-4、IL-5、IL-6、IL-13)的增加[17]，這與本文結(jié)論相似。比較不同分期、不同皮損面積、不同性別、家族史、精神應(yīng)激、微量元素臨床亞組間血清sST2水平，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，但自身抗體異常組sST2水平明顯高于無自身抗體異常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.015)。提示sST2的高表達(dá)可能與患者機(jī)體過度活化的免疫應(yīng)答也有關(guān)，這與文獻(xiàn)[18-19]報(bào)道系統(tǒng)性紅斑狼瘡和干燥綜合征等自身免疫性疾病患者血液中sST2表達(dá)較對照組明顯升高的結(jié)論相似。但sST2參與白癜風(fēng)發(fā)病的確切機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。

IL-33的多效性提示了IL-33/ST2信號通路在體內(nèi)平衡和疾病中的關(guān)鍵作用。本研究顯示IL-33和sST2血清水平的失衡可能是白癜風(fēng)的發(fā)病原因之一。關(guān)于IL-33和sST2參與白癜風(fēng)發(fā)病的具體機(jī)制的進(jìn)一步研究或可為白癜風(fēng)免疫學(xué)治療的新目標(biāo)靶點(diǎn)提供思路。