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        13株柔嫩艾美耳球蟲分離株對(duì)地克珠利及鹽霉素耐藥情況分析

        2021-01-08 12:31:22黃杰代幸如殷邵杰黃俊杰劉明江伯若楠李金貴
        畜牧與獸醫(yī) 2021年1期
        關(guān)鍵詞:藥組盲腸球蟲病

        黃杰,代幸如,殷邵杰,黃俊杰,劉明江,伯若楠,李金貴

        (揚(yáng)州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院,江蘇 揚(yáng)州 225009)

        柔嫩艾美耳球蟲(Eimeriatenella)是一種細(xì)胞內(nèi)頂復(fù)門寄生蟲[1],臨床感染可引起雞的球蟲病,易造成死亡率高、耐過雞生長(zhǎng)遲緩或繼發(fā)其他感染,對(duì)現(xiàn)代養(yǎng)雞業(yè)危害十分嚴(yán)重[2]。該球蟲寄生于雞盲腸腸道上皮細(xì)胞內(nèi),可引起雞腹瀉、血便、生長(zhǎng)遲緩、飼料轉(zhuǎn)化率降低,雛雞感染可致大量死亡。目前,抗球蟲藥的使用是預(yù)防和治療球蟲病的常用手段之一。然而,大規(guī)模和長(zhǎng)期使用導(dǎo)致雞肉等產(chǎn)品中殘留藥物并引起球蟲產(chǎn)生耐藥性,進(jìn)而影響公共健康和食品安全[3]。為更好地利用藥物,及時(shí)了解和評(píng)價(jià)抗球蟲藥對(duì)當(dāng)?shù)厍蛳x的治療效果以便指導(dǎo)生產(chǎn),對(duì)雞球蟲病及球蟲抗藥性的調(diào)查、診斷、研究和分析是保護(hù)養(yǎng)雞業(yè)健康發(fā)展的必要前提。本試驗(yàn)對(duì)不同地區(qū)臨床分離的13株柔嫩艾美耳球蟲進(jìn)行了地克珠利(DIC)以及鹽霉素(SAL)的藥物敏感性檢測(cè),以期為這些地區(qū)防治雞球蟲病的用藥策略提供參考。

        1 材料與方法

        1.1 試驗(yàn)蟲珠

        柔嫩艾美耳球蟲敏感株或標(biāo)準(zhǔn)株(SE),由中國(guó)農(nóng)科院上海獸醫(yī)研究所贈(zèng)送;來自江蘇、山東、福建、安徽、河南分離株共13株,具體情況見表1。

        表1 各分離株分離情況

        1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

        1日齡黃羽肉雞購(gòu)自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所,試驗(yàn)雞飼養(yǎng)于經(jīng)甲醛熏蒸消毒無球蟲雞舍中,飼喂飼料中不添加抗球蟲藥,飲水使用高壓滅菌水。

        1.3 主要儀器及試劑

        渦旋機(jī)WH-1;高速離心機(jī)(AnKe公司);麥克馬斯特計(jì)數(shù)板(中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所);光學(xué)顯微鏡 (上海萊卡顯微鏡有限公司)。

        胰蛋白酶,購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司;地克珠利溶液,購(gòu)自天津市保靈動(dòng)物保健品有限公司,批號(hào)20181003;12.96% 鹽霉素鈉預(yù)混劑,購(gòu)自內(nèi)蒙古拜克生物有限公司,批號(hào)201705018。

        1.4 耐藥性檢測(cè)試驗(yàn)

        試驗(yàn)雞飼養(yǎng)至12日齡后稱重,并使用SPSS進(jìn)行隨機(jī)分組,體重記為試驗(yàn)前體重。每個(gè)蟲株設(shè)DIC給藥組、SAL給藥組、感染不給藥對(duì)照組和不感染不給藥對(duì)照組,每組10只。除不感染不給藥組外,其他各組于14日齡分別接種各球蟲分離株孢子化卵囊105個(gè)。DIC給藥組1 mg/kg飲水給藥,SAL給藥組60 mg/kg拌料給藥,各給藥組均于13日齡時(shí)給藥。于接種后168 h將所有雞稱重后撲殺,體重記為試驗(yàn)?zāi)w重。

        1.5 盲腸病變計(jì)分及卵囊計(jì)數(shù)

        感染后168 h將試驗(yàn)雞剖殺,采取盲腸組織觀察其病變情況并記分,按Johnson等1970年的盲腸病變記分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)定,組內(nèi)平均病變記分乘以10為該組病變值。收集各組盲腸組織,剪碎至1 mm3左右,加入1%胰酶置于37 ℃消化2 h,對(duì)各組盲腸勻漿中卵囊個(gè)數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù),得到相應(yīng)卵囊值[4]。

        1.6 耐藥性判定方法及標(biāo)準(zhǔn)

        按照黃兵等[5]介紹的方法,以病變計(jì)分減少率(reduction of lesion scores, RLS)、相對(duì)卵囊產(chǎn)量(relative oocysts production, ROP)、最適抗球蟲活性百分率(percent of optimum anti-coccidial activity, POAA) 、抗球蟲指數(shù)(anti-coccidial index, ACI)等 4項(xiàng)指標(biāo)綜合判定不同蟲株對(duì)藥物的耐藥程度。計(jì)算公式如下:

        ACI= (相對(duì)增重率+存活率)-(病變值+卵囊值),ACI ≥160 判為陰性,ACI <160判為陽性,其中:增重=試驗(yàn)?zāi)w重-試驗(yàn)前體重,相對(duì)增重率=感染(不)給藥組增重/不感染不給藥組增重×100%。

        RLS=(感染不用藥組平均病變計(jì)分-感染用藥組平均病變計(jì)分)/感染不用藥組平均病變計(jì)分×100%,RLS≥50% 判為陰性,RLS<50% 判為陽性。

        ROP=感染用藥組平均卵囊百萬數(shù)/感染不用藥組平均卵囊百萬數(shù)×100%,其中ROP≥15% 判為陽性,ROP<15% 判為陰性。

        POAA= (感染用藥組GSR-感染不用藥組GSR)/(不感染不用藥組GSR -感染不用藥組GSR)×100%,其中:GSR=籠末重/籠初重,POAA >50% 判為陰性,POAA≤50% 判為陽性。

        在全部4項(xiàng)指標(biāo)中,全部為陰性判定為無耐藥性,1項(xiàng)為陽性判定為輕度耐藥,2項(xiàng)為陽性判定為中度耐藥,3~4項(xiàng)為陽性判定則為完全耐藥。

        2 結(jié)果

        2.1 DIC給藥組的各項(xiàng)指標(biāo)

        2.1.1 不同地區(qū)球蟲分離株的ACI比較

        根據(jù)表2可知,DIC對(duì)NT1、NT2、NT3、NT4、NT5、NT7以及HN球蟲株的ACI均小于160,耐藥性呈陽性,即在使用DIC治療的情況下,病雞臨床仍出現(xiàn)較為嚴(yán)重的血便癥狀,同時(shí)表現(xiàn)精神沉郁、閉眼縮頸、呆立不動(dòng)等癥狀。對(duì)其余分離株的ACI均在170以上,臨床未見明顯球蟲病癥狀,剖檢可見盲腸僅有少量出血點(diǎn),判為陰性。

        表2 DIC對(duì)不同地區(qū)球蟲分離株的ACI

        2.1.2 綜合耐藥性判定

        根據(jù)表3可知,13株蟲株的綜合判定指標(biāo)中,NT1、NT2、NT3、NT4、NT5、HN株的4項(xiàng)指標(biāo)均為陽性,表現(xiàn)為完全耐藥;NT7株的4項(xiàng)指標(biāo)中有2項(xiàng)表現(xiàn)為陽性,判定為中等耐藥;SD3株的4項(xiàng)指標(biāo)中,有一項(xiàng)表現(xiàn)為陽性,判定為輕度耐藥;其余各株的4項(xiàng)指標(biāo)均表現(xiàn)為陰性,判定為無耐藥性。

        表3 各地區(qū)蟲株對(duì)DIC綜合耐藥性的判定

        2.2 SAL給藥組各項(xiàng)指標(biāo)

        2.2.1 不同地區(qū)球蟲分離株的ACI比較

        根據(jù)表4可知,使用SAL治療后,NT1、NT2、NT3、NT4、NT5、NT6、NT7、HN株的ACI均小于160,各組感染雞剖檢均可見盲腸顯著縮短,腸壁增厚,有明顯盲腸芯,判定為陽性;其余蟲株ACI均在160以上,感染雞臨床未見明顯球蟲病感染癥狀,判定為陰性。

        表4 SAL對(duì)不同地區(qū)球蟲分離株的抗球蟲指數(shù)

        2.2.2 綜合耐藥性判定

        根據(jù)表5可知,在所收集并測(cè)試13株蟲株的指標(biāo)綜合判定中,NT1、NT2、NT4、NT5、NT6、NT7、HN株有3項(xiàng)指標(biāo)及以上均為陽性,表現(xiàn)為完全耐藥;NT3的4項(xiàng)指標(biāo)中有2項(xiàng)表現(xiàn)為陽性,判定為中等耐藥;其余各株的4項(xiàng)指標(biāo)均表現(xiàn)為陰性,判定為無耐藥性。

        表5 各地區(qū)分離蟲株對(duì)SAL綜合耐藥性判定

        3 討論

        DIC是我國(guó)1997年批準(zhǔn)上市的抗球蟲藥物,最初投放使用時(shí),臨床上僅需0.5~1 mg/kg的劑量即可達(dá)到非常好的防治效果。趙其平等[6]研究表明,1 mg/kg DIC對(duì)柔嫩艾美耳球蟲等5個(gè)艾美耳蟲種的ACI均達(dá)到180以上,始終在抗球蟲藥高效范圍內(nèi),但應(yīng)用多年后陸續(xù)出現(xiàn)耐藥性的報(bào)道。在本試驗(yàn)中,南通地區(qū)不同雞場(chǎng)有6株分離株對(duì)DIC均表現(xiàn)出強(qiáng)耐藥性,河南開封地區(qū)1株分離株表現(xiàn)完全耐藥,提示這些地區(qū)短時(shí)間內(nèi)不宜使用該藥物對(duì)球蟲進(jìn)行防治,應(yīng)采用其他藥物。

        SAL是聚醚類離子載體抗生素的一種,有著較廣的抗球蟲譜,人們?cè)?jīng)一度認(rèn)為離子載體類抗球蟲藥并不會(huì)使球蟲產(chǎn)生耐藥性,但是,由于離子載體類抗球蟲藥長(zhǎng)期而又廣泛的使用,球蟲抗藥株的出現(xiàn)已很普遍[7]。本試驗(yàn)中,南通分離株以及開封分離株均對(duì)SAL表現(xiàn)出較強(qiáng)的耐藥性,提示該地區(qū)不適合使用SAL作為球蟲防治藥物,由于離子載體類抗生素作用機(jī)制類似,容易產(chǎn)生交叉耐藥性,所以同類藥物也不建議使用,可以選用其他種類藥物進(jìn)行防治。而其余地區(qū)分離株并沒有對(duì)本次檢測(cè)的2種藥物表現(xiàn)嚴(yán)重的耐藥性,仍可以選用DIC或SAL對(duì)球蟲病進(jìn)行防治。

        據(jù)流行病學(xué)調(diào)查顯示,當(dāng)前球蟲感染情況依舊嚴(yán)峻[8]。而臨床養(yǎng)殖業(yè)對(duì)雞球蟲病的預(yù)防與治療基本依靠抗球蟲藥物的添加,但雞球蟲對(duì)幾乎所有的抗球蟲藥物都有對(duì)應(yīng)的耐藥蟲株出現(xiàn)。據(jù)黃儀娟等[9]報(bào)道,四川部分地區(qū)的球蟲分離株對(duì)多種常用抗球蟲藥,如:癸氧喹酯、莫能菌素、復(fù)方磺胺氯達(dá)嗪鈉等有著不同程度的耐藥性。劉瑞良[10]對(duì)湖南醴陵分離株進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn),結(jié)果顯示,鹽霉素、莫能菌素、二硝托胺等藥物對(duì)其無治療效果,表明分離株對(duì)多種藥物產(chǎn)生了耐藥性。大量文獻(xiàn)表明,雞球蟲耐藥性問題在我國(guó)普遍存在[11-14]。本試驗(yàn)采集了來自不同地區(qū)共13株柔嫩艾美耳球蟲,各分離株均有使用過如磺胺氯吡氫鈉等磺胺類藥物進(jìn)行治療的用藥史,但臨床仍有發(fā)病表現(xiàn),提示分離株可能對(duì)磺胺類藥物均有一定程度的耐藥性;而且南通分離株以及開封分離株均表現(xiàn)出對(duì)DIC以及SAL的耐藥性,說明部分臨床分離株有多重耐藥性,這可能與臨床長(zhǎng)期使用同種藥物進(jìn)行防治有關(guān)。故臨床使用抗球蟲藥物時(shí),應(yīng)注意藥物的交替使用以及聯(lián)合使用,保證治療效果同時(shí)有利于避免耐藥性的產(chǎn)生。崔怡等[15]研究表明,包膜丁酸鈉與癸氧喹酯聯(lián)用可以有效預(yù)防球蟲病,并對(duì)腸道有一定保護(hù)作用。另外,中藥由于其副作用相對(duì)較小,成分復(fù)雜不容易產(chǎn)生耐藥性,所以臨床利用中草藥對(duì)球蟲病進(jìn)行防治也有著良好的前景。

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