徐 娟 謝敏娟▲ 徐石張

1.宜春學(xué)院醫(yī)學(xué)院，江西宜春 336000；2.宜春學(xué)院附屬醫(yī)院腎臟內(nèi)科，江西宜春 336000

Rac1蛋白來(lái)自RhoGTP 酶家族，參與調(diào)控細(xì)胞極性、囊泡的轉(zhuǎn)運(yùn)等過(guò)程，并且在細(xì)胞增殖、基因轉(zhuǎn)錄中起重要作用[1]。Rac1 是一個(gè)原癌基因，近年來(lái)被發(fā)現(xiàn)與多種腫瘤的發(fā)生存在關(guān)聯(lián)，如胃癌、乳腺癌、卵巢癌、白血病等[2-3]。結(jié)直腸癌（colorectal cancer，CRC）是一種常見(jiàn)的惡性腫瘤，雖然近年來(lái)其預(yù)后有所改善，但癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移仍是導(dǎo)致CRC 患者死亡的重要原因[4]。CRC 發(fā)病機(jī)制仍未明確，深入探討Rac1蛋白和CRC侵襲與轉(zhuǎn)移機(jī)制的關(guān)系具有重要意義。本研究在已發(fā)表的相關(guān)文獻(xiàn)基礎(chǔ)上，利用薈萃分析的方法，探討Rac1蛋白在CRC 中的表達(dá)及其生物學(xué)行為。

1 資料與方法

1.1 檢索策略

利用Rac1蛋白、結(jié)直腸癌、Rac1、colorectal cancer作為主題詞、標(biāo)題詞，分別檢索PubMed、Google Scholar、萬(wàn)方數(shù)據(jù)庫(kù)、中國(guó)知網(wǎng)（CNKI）、中國(guó)生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)（CBM）等。以PubMed 數(shù)據(jù)庫(kù)為例，英文檢索式：“Rac1”（MeSH）OR“colorectal cancer”（MeSH）；以萬(wàn)方數(shù)據(jù)庫(kù)為例，中文檢索式：“Rac1”AND“結(jié)直腸癌”。限制檢索時(shí)間均為1990年1月～2019年11月。并同時(shí)檢索納入研究的相關(guān)參考文獻(xiàn)。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①研究?jī)?nèi)容包含Rac1蛋白和CRC 關(guān)系的對(duì)照研究；②疾病診斷CRC 明確；③研究方法采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)Rac1蛋白。排除標(biāo)準(zhǔn)：①重復(fù)數(shù)據(jù)的文獻(xiàn)；②綜述與評(píng)論。

1.3 數(shù)據(jù)提取

設(shè)計(jì)合適的數(shù)據(jù)填報(bào)表，兩位研究員分別提取納入文獻(xiàn)中的相關(guān)資料，如：第一作者、發(fā)表年份、癌細(xì)胞（Rac1 陽(yáng)性數(shù)與總數(shù)）、正常細(xì)胞（Rac1 陽(yáng)性數(shù)與總數(shù)）、淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移標(biāo)本數(shù)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移標(biāo)本數(shù)等。如結(jié)果存在差異時(shí)，經(jīng)兩位研究員討論決定。

1.4 質(zhì)量評(píng)價(jià)

納入文獻(xiàn)的質(zhì)量采用Newcastle-Ottawa scale 量表進(jìn)行評(píng)價(jià)，其評(píng)價(jià)內(nèi)容包含：病例組與對(duì)照組選擇方法（病例的定義與診斷、病理的代表性、對(duì)照的選擇、對(duì)照的定義）、病例組與對(duì)照組的可比性、接觸暴露評(píng)估方法。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

利用Review Manager 5.3 軟件對(duì)納入的研究進(jìn)行薈萃分析，其中分類變量采用相對(duì)危險(xiǎn)度（OR）合并總體效應(yīng)，并對(duì)每個(gè)合并效應(yīng)量行異質(zhì)性檢驗(yàn)。若P＞0.10、I2≤50%，說(shuō)明文獻(xiàn)同質(zhì)性良好，采用固定效應(yīng)模型合并效應(yīng)量；若P≤0.10、I2＞50%，則采用隨機(jī)效應(yīng)模型。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 文獻(xiàn)檢索結(jié)果及納入文獻(xiàn)特征

依照檢索策略進(jìn)行檢索時(shí)，初步獲得68篇文獻(xiàn)，通過(guò)閱讀標(biāo)題與摘要后排除46篇，對(duì)其余22篇文獻(xiàn)進(jìn)行精讀，依照納入與排除標(biāo)準(zhǔn)，最終剩余納入本次研究的6篇文獻(xiàn)[5-10]（圖1）。6項(xiàng)研究的發(fā)表時(shí)間為2007～2018年，其中1篇文獻(xiàn)[5]中缺少癌旁正常標(biāo)本數(shù)據(jù)，因此總共包含研究對(duì)象1011例，一般情況與資料見(jiàn)表1。

圖1 文獻(xiàn)篩選流程及結(jié)果

2.2 Rac1蛋白在CRC 中的表達(dá)

2.2.1 Rac1蛋白與CRC 的關(guān)系

5項(xiàng)研究[6-10]中包含CRC 組織與癌旁正常組織的Rac1蛋白表達(dá)數(shù)據(jù)，對(duì)組織Rac1表達(dá)率進(jìn)行薈萃分析，結(jié)果具有明顯異質(zhì)性（P＜0.000 01，I2=89%），采用隨機(jī)效應(yīng)模型合并效應(yīng)量，結(jié)果顯示，CRC組織中Rac1蛋白表達(dá)率高于癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（OR=79.97，95%CI 4.65～1374.11，P=0.003）（圖2）。

表1 納入研究的基本特征（n/N）

圖2 Rac1蛋白與CRC 關(guān)系的薈萃分析

2.2.2 Rac1蛋白與結(jié)直腸癌TNM分期的關(guān)系

6項(xiàng)文獻(xiàn)[5-10]中均包含疾病診斷的國(guó)際TNM分期，以TNM Ⅲ、Ⅳ期與TNMⅠ、Ⅱ期癌標(biāo)本為研究對(duì)象，對(duì)兩類Rac1蛋白表達(dá)率進(jìn)行薈萃分析，總體效應(yīng)具有異質(zhì)性（P＜0.0001，I2=82%），采用隨機(jī)效應(yīng)模型合并效應(yīng)量，結(jié)果顯示，Ⅰ、Ⅱ期CRC 標(biāo)本中Rac1蛋白表達(dá)率低于Ⅲ、Ⅳ期癌標(biāo)本，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（OR=0.26，95%CI 0.10～0.67，P=0.005）（圖3）。

圖3 Rac1蛋白與TNM 關(guān)系的薈萃分析

2.2.3 Rac1蛋白與癌組織分化程度的關(guān)系

對(duì)不同分化程度癌標(biāo)本的Rac1蛋白表達(dá)率行薈萃分析[6-10]，總體效應(yīng)無(wú)明顯異質(zhì)性（P=0.59，I2=0%），采用固定效應(yīng)模型，結(jié)果顯示，低分化癌標(biāo)本中Rac1蛋白表達(dá)率高于中、高分化標(biāo)本，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（OR=2.51，95%CI 1.55～4.06，P=0.0002）（圖4）。

圖4 Rac1蛋白與癌組織分化程度的薈萃分析

2.2.4 Rac1蛋白與CRC 浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

2.2.4.1 Rac1蛋白與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系 將CRC 標(biāo)本分為無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移[5-10]，并對(duì)兩類Rac1蛋白表達(dá)率行異質(zhì)性檢驗(yàn)（P=0.03，I2=59%），有統(tǒng)計(jì)學(xué)異質(zhì)性，采用隨機(jī)效應(yīng)模型合并效應(yīng)量，結(jié)果顯示，伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的癌組織Rac1蛋白表達(dá)率高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（OR=2.56，95%CI 1.36～4.82，P=0.004）（圖5）。

圖5 Rac1蛋白與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系的薈萃分析

2.2.4.2 Rac1蛋白與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的關(guān)系 對(duì)伴有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的癌組織Rac1蛋白表達(dá)率行薈萃分析[5-6，8]，總體效應(yīng)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)異質(zhì)性（P=0.58，I2=0%），采用固定效應(yīng)模型，結(jié)果顯示，伴有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的癌組織Rac1蛋白表達(dá)率高于無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（OR=11.64，95%CI 5.71～23.70，P＜0.000 01）（圖6）。

圖6 Rac1蛋白與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移關(guān)系的薈萃分析

3 討論

Rac1蛋白在腫瘤中高度表達(dá)，而在正常組織中低表達(dá)或不表達(dá)，并且表達(dá)程度與腫瘤的分化程度、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)特征密切相關(guān)[11-14]。在此次薈萃分析中，結(jié)果與先前大部分研究相似[7-10]，證實(shí)CRC 組織中Rac1蛋白表達(dá)率明顯增加，但薈萃結(jié)果存在明顯異質(zhì)性，可能與疾病病程、疾病控制情況、檢測(cè)方法等不同有關(guān)，結(jié)論需要謹(jǐn)慎表述。5項(xiàng)研究[6-10]中涉及癌旁正常組織的Rac1蛋白表達(dá)檢測(cè)，但僅有1項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)癌旁正常組織伴有Rac1蛋白表達(dá)。將此研究與其余文獻(xiàn)對(duì)比發(fā)現(xiàn)，該研究者的免疫組織化學(xué)結(jié)果判斷方法與其余研究者存在部分不同，從而導(dǎo)致了結(jié)果的差異。因此，在將來(lái)需要更大規(guī)模、多中心的研究，同時(shí)研究者的檢測(cè)方法需要規(guī)范統(tǒng)一。

Rac1 調(diào)節(jié)腫瘤生物學(xué)行為的機(jī)制仍未完全明確，有學(xué)者考慮與多重因素有關(guān)，如Rac1 調(diào)節(jié)干擾素、CDC42 等因子表達(dá)促進(jìn)腫瘤血管的形成，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移[15-16]；刺激肌動(dòng)蛋白單體的成核作用，加快細(xì)胞移動(dòng)；活化核轉(zhuǎn)錄因子Snail 誘導(dǎo)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，促進(jìn)腫瘤侵襲的轉(zhuǎn)移[17-19]。Rac1 的活化在大腸癌遷移侵襲中起重要作用，活性程度高的癌組織細(xì)胞遷移與侵襲能力顯著高于對(duì)照組[20]，而在本次Meta 分析中，結(jié)果顯示，Rac1蛋白在低分化與伴有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組的CRC 中高度表達(dá)，且分別與中高分化、無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），總體效應(yīng)值無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)異質(zhì)性；Rac1蛋白在伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與TNM Ⅲ、Ⅳ期中高度表達(dá)，但考慮結(jié)果存在異質(zhì)性，是否存在必然聯(lián)系，需增加樣本數(shù)量證實(shí)。

綜上所述，近年來(lái)，Rac1蛋白表達(dá)與CRC 的研究獲得了較大進(jìn)展，本次研究也證實(shí)Rac1蛋白表達(dá)與CRC 的發(fā)生發(fā)展及其生物學(xué)行為密切相關(guān)，同時(shí)為臨床將來(lái)探討CRC 的發(fā)病機(jī)制和治療措施提供了新的思路。