湯博藝

（西藏大學(xué)理學(xué)院，西藏拉薩 850012）

1976年，Sanger等[1]提出一種“共價(jià)閉合環(huán)狀單鏈RNA”的類病毒，這是人類首次證明環(huán)狀RNA（Circular RNAs，CircRNA）的存在。隨后人們相繼在酵母細(xì)胞、小鼠睪丸、人體成纖維細(xì)胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)CircRNA。自90年代末起，更多的CircRNA證明與人類的細(xì)胞色素P450基因、人類抗?fàn)I養(yǎng)不良基因、人類細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4（INK4/ARF）等基因有關(guān)。這些早期的研究清楚地證明了環(huán)狀RNA分子的存在，但其潛在價(jià)值尚未發(fā)掘。

自2010年起，隨著RNA測(cè)序技術(shù)和生物信息學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，關(guān)于CircRNA的研究開始高速發(fā)展。使用RNase R（一種來源于大腸桿菌RNR超家族的3'～5'核糖核酸外切酶）[2]預(yù)處理，分析無聚腺苷酸富集的CircRNA文庫(kù)，不僅可以富集CircRNA，還可以將真實(shí)的CircRNA與帶有折疊錯(cuò)誤的mRNA區(qū)分開來。目前，多項(xiàng)研究揭示了CircRNA在人類、小鼠和果蠅中以組織和發(fā)育階段特異性的方式進(jìn)行表達(dá)，并與免疫應(yīng)答、癌癥發(fā)生等生理病理過程相關(guān)，可以作為疾病診斷的生物靶標(biāo)。

1 CircRNA的分子結(jié)構(gòu)

CircRNA不具5'末端帽和3'末端poly（A）尾，是一類共價(jià)環(huán)狀內(nèi)源ncRNA，主要具有以下特征：（1）在真核生物的組織細(xì)胞中表達(dá)相當(dāng)豐富，且表達(dá)具有組織特異性和時(shí)空選擇性，CircRNA在某些人體組織中的分子總量甚至達(dá)線性RNA的10倍以上；（2）CircRNA對(duì)核酸酶具有抗性，穩(wěn)定性較ncRNA更強(qiáng)，并且大多CircRNA的進(jìn)化十分保守；（3）CircRNA通常包含完整的外顯子，位于細(xì)胞質(zhì)中，只有少數(shù)CircRNA由內(nèi)含子環(huán)化而成，位于細(xì)胞核中。

2 CircRNA的生物起源

CircRNA由前體mRNA（pre-mRNA）產(chǎn)生，并由RNA聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄。目前，發(fā)現(xiàn)的CircRNA可以根據(jù)其不同的組成和循環(huán)機(jī)制簡(jiǎn)單地分為3種類型：外顯子CircRNA（EcircRNA）、內(nèi)含子CircRNA（CiRNA）和外顯子-內(nèi)含子CircRNA（EIciRNA）。

2.1 EcircRNA

EcircRNA通過外顯子的反向剪接形成。目前，有3種假設(shè)模型解釋EcircRNA的發(fā)生：外顯子跳讀、內(nèi)含子配對(duì)驅(qū)動(dòng)環(huán)化和RNA結(jié)合蛋白（RBP）介導(dǎo)的環(huán)化。如圖1所示，在形成EcircRNA時(shí)，premRNA在轉(zhuǎn)錄過程中發(fā)生部分折疊，外顯子隨RNA折疊而跳躍，形成“套索結(jié)構(gòu)”，在套索結(jié)構(gòu)內(nèi)通過剪接去除內(nèi)含子序列后形成CircRNA，這種方式稱為“外顯子跳讀”；由pre-mRNA兩側(cè)內(nèi)含子上的反向互補(bǔ)序列配對(duì)形成CircRNA稱為內(nèi)含子配對(duì)驅(qū)動(dòng)環(huán)化；此外，一些RNA結(jié)合蛋白被發(fā)現(xiàn)在環(huán)狀RNA的形成中起關(guān)鍵作用[2]。ADAR1是一種RNA編輯修飾酶，不僅能編輯修飾RNA，還可以通過靶向定位人類細(xì)胞中的雙鏈Alu重復(fù)序列結(jié)合雙鏈RNA，從而具有RBP（視黃醇結(jié)合蛋白）功能，因此ADAR1可通過干擾RNA配對(duì)抑制CircRNA形成。DHX9是一種豐富的核RNA解旋酶，具有一個(gè)類似于ADAR的特殊結(jié)構(gòu)域。沉默DHX9通常通過解開環(huán)狀外顯子側(cè)面的RNA雙鏈來增加環(huán)狀RNA的產(chǎn)量。

2.2 CiRNA

多數(shù)內(nèi)含子形成套索結(jié)構(gòu)時(shí)迅速被去分支酶降解。然而，在Hela細(xì)胞和人胚胎干細(xì)胞中有一些包含位于5'端的GU重復(fù)序列和位于分支點(diǎn)的CC重復(fù)序列的內(nèi)含子能逃避去分支酶的降解，形成ciRNA。

2.3 EIciRNA

兩個(gè)以上的EcircRNA環(huán)化時(shí)，內(nèi)含子切除不完全可產(chǎn)生EIciRNA。EIciRNA主要位于細(xì)胞核中。

3 CircRNA功能

3.1 CircRNA充當(dāng)microRNA海綿

CeRNA假說表明，microRNA可以結(jié)合在靶基因上，在轉(zhuǎn)錄后水平影響mRNA的穩(wěn)定性和轉(zhuǎn)錄；然而，microRNA自身又受到ceRNA的調(diào)控。許多CircRNA具有不同類型和數(shù)量的microRNA結(jié)合位點(diǎn)，從而具有microRNA海綿效應(yīng)，降低microRNA活性并上調(diào)microRNA相關(guān)靶基因的表達(dá)，發(fā)揮高效ceRNA功能。例如，小腦退行性相關(guān)蛋白基因1（CDR1）的CircRNA分子（CDR1as-ciRS-7）有超過60個(gè)保守的miRNA-7結(jié)合位點(diǎn)。在人類和小鼠腦組織中，ciRS-7作為miR-7的分子海綿，抑制miRNA miR-7與靶基因CDR1的結(jié)合，進(jìn)而正向調(diào)控miR-7靶基因。

圖1 Circ RNA的三種剪切方式

然而，特定CircRNA豐度（除了果蠅的MBL和人類的CDRIas）通常較低，這與經(jīng)典的CircRNA-microRNA海綿假說似乎相矛盾。因?yàn)閙icroRNA的表達(dá)十分豐富，microRNA與靶基因的結(jié)合位點(diǎn)也遠(yuǎn)比與CircRNA結(jié)合的位點(diǎn)更多，這大大降低了CircRNA與microRNA結(jié)合的可能性。因此CircRNA還可能發(fā)揮催化作用，直接激活、降解或滅活microRNAs，但此猜想尚無明顯證據(jù)。

3.2 CircRNA調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄

除充當(dāng)MicroRNA海綿外，一些ciRNAs和EIciRNAs還可以通過轉(zhuǎn)錄或轉(zhuǎn)錄后的方式調(diào)控基因表達(dá)來調(diào)控蛋白質(zhì)的產(chǎn)生。EIciRNAs可與U1小核核糖核蛋白（U1-small nuclear ribonucleo protein，snRNP）相互作用，通過與RNApolⅡ結(jié)合，促進(jìn)親代基因轉(zhuǎn)錄。此外，一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，剪切因子MBL的第2個(gè)外顯子可發(fā)生環(huán)化，以CircMbⅠ的形式與premRNA通過線性剪切競(jìng)爭(zhēng)，影響線性RNA的形成，調(diào)控相關(guān)基因的表達(dá)。

3.3 CircRNA與腫瘤相關(guān)

CircRNA對(duì)腫瘤具有抑制作用。Shang等[3]發(fā)現(xiàn)，hsa_circ_0005075的表達(dá)在肝癌組織和正常組織存在差異，其表達(dá)和腫瘤大小有密切關(guān)系，并展示出良好的診斷潛力。Li等[4]研究發(fā)現(xiàn)，hsa_circ_002059作為一種典型的circRNA在胃癌組織中低表達(dá)，與胃癌轉(zhuǎn)移、TNM分期、性別和年齡等密切相關(guān)。因此，CircRNA有望作為一種新型的生物標(biāo)志應(yīng)用于腫瘤的診斷。

4 CircRNA研究面臨的挑戰(zhàn)

隨著測(cè)序技術(shù)和生物信息學(xué)的發(fā)展，越來越多的CircRNA逐漸被發(fā)現(xiàn)，成為RNA領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。然而，CircRNA的研究仍然面臨許多挑戰(zhàn)。（1）目前國(guó)際上對(duì)于CircRNA并沒有統(tǒng)一的命名約定，極易造成混淆。（2）目前，關(guān)于CircRNA的數(shù)據(jù)庫(kù)還不完善。雖然研究人員可以通過多個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)CircRNA的功能，但是還沒有與腫瘤預(yù)后相關(guān)的CircRNA數(shù)據(jù)庫(kù)，在RNA-seq后功能CircRNA的篩選方面面臨困難。

5 結(jié)語(yǔ)

CircRNA的發(fā)現(xiàn)豐富了人們對(duì)生物進(jìn)化的認(rèn)識(shí)，加深了對(duì)非編碼RNA家族的理解，為研究腫瘤的發(fā)生發(fā)展提供了新的方向。雖然目前對(duì)于CircRNA在腫瘤中形成、轉(zhuǎn)運(yùn)和功能的確切機(jī)制的認(rèn)識(shí)還非常有限，但是隨著新技術(shù)的應(yīng)用和科學(xué)家的不斷努力，相信與CircRNA有關(guān)的未知之謎終將被揭曉答案。