徐 穎，王 爽，秦婷婷，馬占強(qiáng)，傅 強(qiáng)，馬世平

復(fù)方銀花解毒顆粒對(duì)脂多糖致幼齡大鼠急性肺炎模型的抗炎作用及TLR4/NF-κB/NLRP3信號(hào)通路的影響

徐 穎，王 爽，秦婷婷，馬占強(qiáng)，傅 強(qiáng)，馬世平*

中國藥科大學(xué)中藥學(xué)院，江蘇 南京 211198

研究復(fù)方銀花解毒顆粒（Compound Yinhua Jiedu Granule）對(duì)脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）致幼齡大鼠急性肺炎模型的抗炎作用及Toll樣受體4（Toll like receptor 4，TLR4）/核轉(zhuǎn)錄因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）/NOD樣受體熱蛋白結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白3（NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3，NLRP3）信號(hào)通路的影響。將120只幼齡大鼠隨機(jī)分為6組，分別為對(duì)照組、模型組、布洛芬顆粒組（0.8 g/kg）及復(fù)方銀花解毒顆粒低、中、高劑量（1.25、2.5、5 g/kg）組，ig給藥1周，末次給藥1 h后尾iv LPS（1 mg/kg）制備急性肺炎模型，6 h后采用麻醉后頸椎脫臼處死。采用ELISA試劑盒檢測(cè)各組大鼠肺泡灌洗液及血清中炎癥因子白細(xì)胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、IL-17、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）水平的變化；HE染色觀察肺組織形態(tài)學(xué)變化；運(yùn)用免疫組化染色法檢測(cè)肺組織TLR4，入核NF-κB和NLRP3蛋白的表達(dá)，Western blotting法檢測(cè)肺組織中TLR4、磷酸化NF-κB（p-NF-κB）、磷酸化核轉(zhuǎn)錄因子-κB抑制蛋白α（nuclear factor-κB inhibitor protein α，p-IκBα）和NLRP3蛋白的表達(dá)。復(fù)方銀花解毒顆粒預(yù)處理對(duì)LPS誘導(dǎo)幼齡大鼠急性肺損傷具有較強(qiáng)的保護(hù)作用，可降低模型大鼠肺泡灌洗液及血清中炎癥因子IL-1β、IL-17、TNF-α的水平，減少肺組織中TLR4、NF-κB的激活和NLRP3蛋白的表達(dá)。復(fù)方銀花解毒顆粒對(duì)LPS致幼齡大鼠急性肺炎模型具有抗炎作用，其機(jī)制可能與下調(diào)TLR4/NF-κB/NLRP3炎癥信號(hào)通路有關(guān)。

復(fù)方銀花解毒顆粒；LPS；急性肺炎；炎癥因子；Toll樣受體4；核轉(zhuǎn)錄因子-κB；NOD樣受體熱蛋白結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白3

急性肺炎是一種多發(fā)的呼吸道疾病，患者以0～5歲的嬰幼兒為主，是導(dǎo)致嬰幼兒死亡的重要原因之一。其主要表現(xiàn)為發(fā)病迅速，癥狀重，并發(fā)癥多，容易造成呼吸系統(tǒng)和循環(huán)系統(tǒng)衰竭，一旦發(fā)展為重癥肺炎，會(huì)嚴(yán)重危害患兒的生命，甚至造成死亡[1]。臨床上，常用抗生素治療小兒急性肺炎，然而，長期濫用抗生素產(chǎn)生的病毒抗性使其治療效果不佳，并導(dǎo)致了抗生素的耐藥性的發(fā)展[2]。因此，探索更加安全、有效的防治途徑成為臨床上亟待解決的問題。復(fù)方銀花解毒顆粒是由山銀花、連翹、荊芥、薄荷、青蒿等中藥提取加工制成的顆粒劑，具有疏風(fēng)解表、清熱解毒之功效，善治溫病發(fā)熱等病證。臨床常用于上呼吸系統(tǒng)感染及流行性感冒的治療[3]，目前尚未有涉及復(fù)方銀花解毒顆粒治療急性肺炎的研究。故本研究建立了脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）誘導(dǎo)的幼齡大鼠急性肺炎模型，旨在考察復(fù)方銀花解毒顆粒對(duì)幼齡大鼠急性肺炎模型的抗炎作用、量效關(guān)系及作用機(jī)制。

1 材料與儀器

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)雄性SD幼齡大鼠（3～5周），體質(zhì)量50～70 g，購自浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證號(hào)SCXK（浙）2019-0002。動(dòng)物飼養(yǎng)于中國藥科大學(xué)藥學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，許可證號(hào)SYXK（蘇）2018-0019，自由攝食和飲水，室溫（25±2）℃，相對(duì)濕度50%～60%，晝夜12 h交替。適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理法規(guī)的規(guī)定和總則建議進(jìn)行（倫理審批號(hào)2020-12-001）。

1.2 藥品及試劑

LPS（批號(hào)078M4039V，美國Sigma公司），復(fù)方銀花解毒顆粒（批號(hào)180911，天長億帆制藥有限公司），布洛芬顆粒（批號(hào)29180412，葵花藥業(yè)集團(tuán)有限公司）。白細(xì)胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）ELISA試劑盒（貨號(hào)E-EL-R0012c）、IL-17 ELISA試劑盒（貨號(hào)E-EL-R0566c）、TNF-α ELISA試劑盒（貨號(hào)E-EL-R2856c），均為Elabscience公司產(chǎn)品。Toll樣受體4（Toll like receptor 4，TLR4）一抗（貨號(hào)19811-1-AP）、NOD樣受體熱蛋白結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白3（NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3，NLRP3）一抗（貨號(hào)19771-1-AP）均為Proteintech公司產(chǎn)品；核轉(zhuǎn)錄因子-κB（Nuclear factor-κB，NF-κB）一抗（貨號(hào)8242S）、磷酸化NF-κB（p-NF-κB）一抗（貨號(hào)3033S）、核轉(zhuǎn)錄因子-κB抑制蛋白（Nuclear factor-κB inhibitor protein， IκBα）一抗（貨號(hào)4812S）、磷酸化IκBα（p-IκBα）一抗（貨號(hào)9246S）均為Cell Signaling Technology公司產(chǎn)品；兔二抗（批號(hào)AA01201，Bioworld公司）。BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒（批號(hào)P0010，碧云天生物技術(shù)研究所），RIPA裂解液（批號(hào)P0013B，碧云天生物技術(shù)有限公司），ECL發(fā)光試劑盒（批號(hào)36208ES60，上海翊圣生物科技有限公司）、PVDF膜（貨號(hào)ISEQ00010，美國Millipore公司）。其余試劑均為國產(chǎn)分析純?cè)噭?/p>

1.3 儀器

5430R冷凍離心機(jī)（Eppendorf公司）；?80 ℃超低溫冰箱、SN3001全波長多功能酶標(biāo)儀、Milli-Q純水儀（美國Thermo公司）；TE124S電子分析天平（北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）；EPS 600電泳轉(zhuǎn)膜儀（上海天能科技有限公司）、Chemidoc XRS+高靈敏度化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)（美國Bio-Rad公司）；GL-5250C磁力攪拌器（海門市其林貝爾儀器制造有限公司）。

2 方法

2.1 動(dòng)物分組、給藥及急性肺炎模型建立

按質(zhì)量將幼齡大鼠隨機(jī)分為6組，每組20只，分別為對(duì)照組、模型組、布洛芬顆粒（0.8 g/kg）組及復(fù)方銀花解毒顆粒低、中、高劑量（1.25、2.50、5.00 g/kg）組。各組連續(xù)ig給藥1周，對(duì)照組和模型組給予相同體積的生理鹽水。末次給藥1 h后尾iv LPS（1 mg/kg）制備幼齡大鼠急性肺炎模型，對(duì)照組注射等量的生理鹽水，注射6 h后采用10%水合氯醛麻醉后進(jìn)行后續(xù)操作。

2.2 ELISA測(cè)定肺泡灌洗液中炎癥因子的水平

每組取6只幼齡大鼠ip 10%水合氯醛（3 mg/kg）麻醉后，手術(shù)分離頸部氣管插管，用PBS灌洗肺組織，灌洗3次，每次靜止平衡30 s，合并灌洗液，取灌洗液1 mL，3000 r/min離心5 min，取上清，按照ELISA試劑盒說明書操作，測(cè)定其中IL-17、IL-1β和TNF-α的含量。

2.3 ELISA測(cè)定血清中炎癥因子的水平

每組取6只幼齡大鼠經(jīng)眼眶取血后，3000 r/min離心15 min，取上清，按ELISA試劑盒說明書操作，測(cè)定其中IL-17、IL-1β和TNF-α含量。

2.4 肺組織的病理學(xué)觀察

每組取3只大鼠ip 10%水合氯醛麻醉后，暴露胸腔，先用PBS經(jīng)右心室灌注沖血，然后用4%多聚甲醛溶液灌注固定，采用頸椎脫臼處死后迅速摘取右肺，置于10%甲醛溶液中固定，制作石蠟切片，蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染色觀察肺組織病理學(xué)變化，觀察肺泡上皮細(xì)胞的損傷程度以及肺泡壁增厚程度。

2.5 免疫組化檢測(cè)炎癥相關(guān)信號(hào)蛋白水平

每組取3只大鼠ip 10%水合氯醛麻醉后，暴露胸腔，先用PBS經(jīng)右心室灌注沖血，然后用4%的多聚甲醛溶液灌注固定，采用頸椎脫臼處死后迅速摘取右肺，置于10%甲醛溶液中固定，制作石蠟切片，染色，顯微鏡下觀察肺組織TLR4、NF-κB和NLRP3陽性細(xì)胞，分析陽性蛋白含量變化。

2.6 Western blotting檢測(cè)炎癥相關(guān)蛋白水平

取大鼠的肺組織，?80 ℃保存?zhèn)溆?。肺組織加入RIPA裂解液裂解勻漿，提取蛋白，BCA法測(cè)定蛋白濃度，等量蛋白經(jīng)過SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，轉(zhuǎn)移到PVDF膜上，5%脫脂奶粉室溫封閉2 h，一抗4 ℃孵育過夜，TBST漂洗3次，每次10 min，室溫二抗孵育90 min，TBST漂洗3次，每次10 min，ECL反應(yīng)，采集圖像。采用Image J軟件分析灰度值以統(tǒng)計(jì)蛋白表達(dá)量。

2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

3 結(jié)果

3.1 復(fù)方銀花解毒顆粒對(duì)急性肺炎模型幼齡大鼠肺泡灌洗液中炎癥因子表達(dá)的影響

由圖1可知，相比于對(duì)照組，模型組肺泡灌洗液中促炎因子IL-1β、IL-17、TNF-α表達(dá)水平顯著升高（＜0.01），而相比于模型組，布洛芬組與復(fù)方銀花解毒顆粒各劑量組均可顯著降低IL-1β、IL-17、TNF-α的表達(dá)水平（＜0.05、0.01）。提示復(fù)方銀花解毒顆?？娠@著抑制急性肺損傷幼齡大鼠的肺部炎癥。

與對(duì)照組比較：#P＜0.05 ##P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05 **P＜0.01，下圖同

3.2 復(fù)方銀花解毒顆粒對(duì)急性肺炎模型幼齡大鼠血清中炎癥因子表達(dá)的影響

如圖2所示，模型組血清中促炎因子IL-1β、IL-17、TNF-α表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組（＜0.05、0.01）；與模型組相比，布洛芬組血清中IL-1β、IL-17表達(dá)水平有降低趨勢(shì)，但無顯著性差異，復(fù)方銀花解毒顆粒各劑量組均可顯著減少血清中IL-1β表達(dá)水平（＜0.05、0.01）。對(duì)于血清中IL-17水平，僅復(fù)方銀花解毒顆粒高劑量組（5.00 g/kg）可顯著降低（＜0.05）。此外，布洛芬與復(fù)方銀花解毒顆粒中、高劑量組（2.50、5.00 g/kg）均顯著降低血清中TNF-α表達(dá)水平（＜0.05、0.01）。提示復(fù)方銀花解毒顆粒可降低急性肺炎模型幼齡大鼠血清中炎癥因子的含量，抑制炎癥。

圖2 復(fù)方銀花解毒顆粒對(duì)急性肺炎模型幼齡大鼠血清中的炎癥因子表達(dá)的影響()

3.3 復(fù)方銀花解毒顆粒對(duì)急性肺炎模型幼齡大鼠中肺組織病理變化的影響

HE染色結(jié)果顯示，對(duì)照組中肺泡結(jié)構(gòu)完整，基本正常，未見出血及炎性細(xì)胞浸潤。LPS造模后，大鼠肺部發(fā)生組織病變，細(xì)胞核固縮，細(xì)胞膜破壞，肺泡壁變薄，肺泡大小不一，肺泡腔破損，有部分細(xì)胞核釋放到肺泡腔內(nèi)。布洛芬組和復(fù)方銀花解毒顆粒各劑量組均可不同程度地改善這種病變。見圖3。

圖3 復(fù)方銀花解毒顆粒對(duì)急性肺炎模型幼齡大鼠中肺組織病理變化的影響(n = 3, ×200, HE)

3.4 復(fù)方銀花解毒顆粒對(duì)急性肺炎模型幼齡大鼠的肺組織中TLR4、NF-κB及NLRP3蛋白表達(dá)的影響

免疫組化結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，模型組大鼠肺部組織中TLR4的蛋白表達(dá)水平顯著升高（＜0.01）；布洛芬組及復(fù)方銀花解毒顆粒低、高劑量組（1.25、5.00 g/kg）能夠顯著降低模型組TLR4的蛋白表達(dá)水平（＜0.05）。模型組大鼠相比于對(duì)照組肺部組織中入核NF-κB的蛋白表達(dá)水平顯著升高（＜0.01）；布洛芬組及復(fù)方銀花解毒顆粒各劑量組均能夠顯著降低模型組NF-κB的蛋白表達(dá)水平（＜0.01）。與對(duì)照組相比，模型組大鼠肺部組織中NLRP3的蛋白表達(dá)水平顯著升高（＜0.01）；布洛芬組及復(fù)方銀花解毒顆粒高劑量組（5.00 g/kg）能夠顯著降低模型組NLRP3的蛋白表達(dá)水平（＜0.01）。見圖4～6。

3.5 復(fù)方銀花解毒顆粒對(duì)急性肺炎模型幼齡大鼠的肺組織中TLR4/NF-κB/NLRP3信號(hào)通路的影響

上述結(jié)果表明，復(fù)方銀花解毒顆?？上抡{(diào)LPS誘導(dǎo)急性肺炎幼齡大鼠中顯著增加的TLR4、NF-κB和NLRP3的蛋白表達(dá)水平。為了進(jìn)一步揭示復(fù)方銀花解毒顆粒的抗炎作用機(jī)制，采用Western blotting實(shí)驗(yàn)檢測(cè)TLR4/NF-κB/NLRP3信號(hào)通路的相關(guān)蛋白，見圖7。結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，模型組肺組織中TLR4、p-NF-κB、p-IκBα、NLRP3的蛋白表達(dá)水平顯著升高（＜0.05、0.01）。而與模型中相比，布洛芬組及復(fù)方銀花解毒顆粒高劑量組（5.00 g/kg）均顯著降低TLR4、p-NF-κB、p-IκBα和NLRP3的蛋白表達(dá)水平（＜0.05、0.01）。

圖4 復(fù)方銀花解毒顆粒對(duì)急性肺炎模型幼齡大鼠的肺組織中TLR4表達(dá)的影響(n = 3, ×400)

圖5 復(fù)方銀花解毒顆粒對(duì)急性肺炎模型幼齡大鼠的肺組織中入核NF-κB表達(dá)的影響(n = 3, ×400)

圖6 復(fù)方銀花解毒顆粒對(duì)急性肺炎模型幼齡大鼠的肺組織中NLRP3表達(dá)的影響(n = 3,×400)

4 討論

急性肺炎是一種主要由病原體引起的下呼吸道疾病，臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、咳嗽、咳痰、喘息等，不僅造成小兒身體的傷害，嚴(yán)重時(shí)還可造成死亡[4]。目前認(rèn)為，多種病原體感染會(huì)導(dǎo)致患兒肺泡出現(xiàn)炎性改變或炎癥細(xì)胞浸潤，進(jìn)而引起肺組織的損害和破壞[5]。研究發(fā)現(xiàn)，包括巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞在內(nèi)的多種免疫細(xì)胞參與了肺部炎癥的過程?；罨木奘杉?xì)胞釋放多種炎癥因子，如活性氧、細(xì)胞因子IL-1β和TNF-α，促進(jìn)炎癥的嚴(yán)重破壞[6]。而急性肺炎常與微生物（如內(nèi)毒素）的炎癥刺激有關(guān)，LPS作為內(nèi)毒素的主要成分，在體內(nèi)外可引起炎癥因子高表達(dá)，且常用于制備小動(dòng)物感染性損傷模型，如肺炎模型被用來研究藥物抗炎作用[7]。

圖7 復(fù)方銀花解毒顆粒對(duì)急性肺炎模型幼齡大鼠的肺組織中TLR4/NF-κB/NLRP3信號(hào)通路的影響(n＝3)

中醫(yī)理論認(rèn)為急性肺炎是由風(fēng)熱病毒引起的肺瘀，屬于風(fēng)溫肺熱型疾病范疇，需利用“透”和“泄”的方式來治療。復(fù)方銀花解毒顆粒是以“銀翹散”為基礎(chǔ)方化裁而來，方中山銀花、連翹為君，二藥合用解表透邪，清熱解毒；以荊芥、豆豉、薄荷為臣，共助君藥疏散解表。山銀花味甘、性寒，氣味芳香，常用于溫病發(fā)熱等證；連翹性涼、味苦，氣味俱薄。荊芥溫而不燥，方中伍入此藥則涼而有辛，可加強(qiáng)解表透邪之力；豆豉味苦、性寒，宜散表邪；薄荷辛涼，可發(fā)汗解熱，利咽喉；佐入青蒿、大青葉、野菊花、鴨跖草、前胡，可起到清熱解毒、涼血、肅肺化痰之效。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，此方中的許多中藥的化學(xué)成分具有抗炎、抗病毒、解熱等作用，如山銀花中主要有效成分綠原酸和咖啡酸具有較好的抗炎、抗病毒、抑菌、抗氧化等作用，并且可通過減少肺部炎癥因子TNF-α、IL-1β的分泌，以治療LPS所致急性肺炎[8]。連翹中連翹酯苷能下調(diào)LPS誘發(fā)炎癥因子TNF-α、環(huán)氧合酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）的釋放，連翹苷能抑制急性肺損傷模型大鼠肺部出血，中性粒細(xì)胞浸潤等病理改變[9]。荊芥的主要藥效成分揮發(fā)油類有抗病毒、抗炎、鎮(zhèn)痛、免疫調(diào)節(jié)等作用，與薄荷揮發(fā)油類配伍時(shí)可減少甲型流感病毒感染小鼠肺部促炎因子的表達(dá)[10-11]。此外，青蒿中青蒿琥酯可通過抑制NF-κB炎癥信號(hào)通路的激活，實(shí)現(xiàn)減輕巨細(xì)胞病毒感染小鼠肺部組織炎癥的作用[12]，故推測(cè)此方對(duì)急性肺炎有一定的療效。

TLR是介導(dǎo)天然免疫的重要模式識(shí)別受體，其介導(dǎo)的信號(hào)通路在炎癥的發(fā)生和發(fā)展過程中極其重要[13]。研究表明，LPS介導(dǎo)的免疫反應(yīng)完全依賴于TLR4，TLR4在引發(fā)免疫效應(yīng)、吞噬細(xì)菌等方面起主要作用。而TLR4作為識(shí)別LPS的關(guān)鍵上游受體，控制著LPS炎癥信號(hào)的細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)導(dǎo)和NF-κB的激活，以及眾多炎癥因子的釋放。據(jù)報(bào)道，LPS刺激后，肺部巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的TLR4可與不同的適配器分子結(jié)合，導(dǎo)致負(fù)責(zé)生產(chǎn)促炎細(xì)胞因子的下游信號(hào)通路的激活和隨后的炎性細(xì)胞的浸潤[14]。研究表明TLR4/NF-κB信號(hào)通路在LPS大鼠急性肺損傷模型的發(fā)展過程中起重要作用，TLR4的激活可引起NF-κB的活化入核[15]。正常情況下，NF-κB蛋白二聚體在體內(nèi)與IκBα結(jié)合在一起以復(fù)合體形式存在于細(xì)胞質(zhì)中，當(dāng)機(jī)體被LPS或細(xì)胞因子刺激后，IκBα被上游的IκB激酶磷酸化，最終導(dǎo)致NF-κB磷酸化后活化并易位至細(xì)胞核，可以誘導(dǎo)免疫、炎性反應(yīng)等有關(guān)的多種基因轉(zhuǎn)錄后翻譯[16]。如NLRP3炎癥小體的轉(zhuǎn)錄激活[17]，近年來的研究表明，NLRP3炎性小體在急性肺損傷的炎癥和細(xì)胞凋亡中起著非常重要的作用，在調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)和急性感染性肺炎的發(fā)生發(fā)展中具有重要意義，NLRP3可通過NF-κB相關(guān)通路激活而引起肺損傷，可能成為治療肺損傷的新靶點(diǎn)[18-19]。隨著體內(nèi)TNF-α、IL-6、IL-1β和IL-12等促炎因子的增多，NF-κB可以進(jìn)一步被激活，周而復(fù)始，炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)逐漸被放大，這種無法控制的炎癥反應(yīng)最終導(dǎo)致正常肺泡毛細(xì)血管屏障功能的喪失與肺組織結(jié)構(gòu)的嚴(yán)重破壞[20-23]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，LPS激活了幼齡大鼠肺組織的TLR4，促進(jìn)了IκBα磷酸化，與NF-κB的磷酸化活化入核，進(jìn)而激活NLRP3炎癥小體使其表達(dá)增多，導(dǎo)致肺泡灌洗液促炎因子IL-17、IL-1β和TNF-α水平的增加，形成局部炎癥，損傷肺組織結(jié)構(gòu)，使正常肺泡腔結(jié)構(gòu)破裂，最終炎癥級(jí)聯(lián)蔓延至全身，促使循環(huán)血清中的促炎因子（IL-17、IL-1β、TNF-α）水平也顯著增加。給予布洛芬顆粒及不同劑量復(fù)方銀花解毒顆粒后，可減輕LPS引起的肺組織損傷，不同程度地降低肺泡灌洗液及血清炎癥因子（IL-17、IL-1β、TNF-α）水平，其中高劑量組（5.00 g/kg）改善肺組織損傷作用最為明顯。并且復(fù)方銀花解毒顆粒預(yù)給藥可顯著下調(diào)TLR4、p-IκBα、p-NF-κB與NLRP3的表達(dá)，提示其可能通過降低TLR4的表達(dá)，從而抑制NF-κB與NLRP3炎癥小體的激活，而減少促炎因子的表達(dá)而發(fā)揮抗炎作用。

綜上所述，本研究結(jié)果表明復(fù)方銀花解毒顆粒預(yù)處理對(duì)LPS誘導(dǎo)幼齡大鼠急性肺損傷具有較強(qiáng)的保護(hù)作用，其作用機(jī)制可能與減少肺部組織病變，降低肺泡灌洗液和血液中炎癥因子水平，以及下調(diào)TLR4/NF-κB/NLRP3炎癥信號(hào)通路有關(guān)。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Anti-inflammatory effect of Compound Yinhua Jiedu Granules on LPS induced acute pneumonia in juvenile rats and its effect on TLR4/NF-κB/NLRP3 signaling pathway

XU Ying, WANG Shuang, QIN Ting-ting, MA Zhan-qiang, FU Qiang, MA Shi-ping

College of Traditional Chinese Medicine, China Pharmaceutical University, Nanjing 211198, China

To study the anti-inflammatory effect of Compound Yinhua Jiedu Granules (復(fù)方銀花解毒顆粒) and on lipopolysaccharide (LPS) induced acute pneumonia in juvenile rats the effect of TLR4/NF-κB/NLRP3 signaling pathway.A total of 120 juvenile rats were randomly divided into six groups: normal control group, model group, Ibuprofen granule group (0.8 g/kg), and Compound Yinhua Jiedu Granules low-dose group, medium-dose group, high dose group (1.5, 2.5, and 5 g/kg). The drug was ig preadministered for one week, and LPS (1 mg/kg) was injected into the tail vein 1 h after the last administration to prepare the acute pneumonia model, than the animals was sacrificed by cervical dislocation after anesthesia 6 h later. The inflammatory factors interleukin-1β (IL-1β), interleukin-17 (IL-17), tumor necrosis factor-α (TNF-α) level change in alveolar lavage fluid and serum of mice in each group were detected by ELISA kit, at the same time, the changes of lung histopathology were observed by HE staining. The protein expression of TLR4, the nuclear NF-κB and NLRP3 in lung tissues were detected by immunohistochemical staining. The protein expression of TLR4, phosphorylated NF-κB (p-NF-κB), phosphorylated IκBα (p-IκBα), and NLRP3 in lung tissues were detected by Western blotting.The preadministration of Compound Yinhua Jiedu Granules had a strong protective effect on LPS-induced acute lung injury in juvenile rats, reduced the inflammatory factors IL-1β, IL-17, and TNF-α in juvenile rats alveolar lavage fluid and serum, and decreased the avtivation of TLR4, NF-κB and the expression NLRP3 in lung tissues.The anti-inflammatory protective effect of Compound Yinhua Jiedu Granules on LPS-induced acute pneumonia in juvenile rats may be related to the down-regulation of the TLR4/ NF-κB /NLRP3 inflammatory signaling pathway.

Compound YinhuaJiedu Granules; lipopolysaccharide; acute pneumonia; inflammatory factors; TLR4; NF-κB; NLRP3

R285

A

0253 - 2670(2021)01 - 0203 - 08

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.01.024

2020-06-21

徐 穎（1996—），在讀碩士，主要從事中藥藥理學(xué)研究工作。Tel: 19825817002 E-mail: 2429116613@qq.com

馬世平（1956—），教授，博士生導(dǎo)師，主要從事中藥及復(fù)方的藥理、毒理學(xué)研究。E-mail: spma@cpu.edu.cn

[責(zé)任編輯 潘明佳]