嚴(yán)啟航，陳睿，黃漢飛，曾仲

(昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院器官移植中心，云南 昆明 650032)

0 引言

缺血再灌注損傷(ischemiareperfusioninjury，IRI)是指由于各種原因?qū)е碌慕M織和器官供血供氧減少，從而造成組織和器官損傷，但當(dāng)供血供氧恢復(fù)后損傷反而進(jìn)一步加重的病理生理過程。肝臟缺血再灌注損傷(hepaticischemiareperfusio ninjury，HIRI)多發(fā)生在休克、肝切除、肝移植等過程中，目前認(rèn)為，IRI與肝移植后的早期移植物功能障礙密切相關(guān)[1]，輕度IRI可能導(dǎo)致17.4%的移植肝發(fā)生早期移植物功能障礙，經(jīng)歷重度IRI的肝臟發(fā)生早期移植物功能障礙的比例可能高達(dá)88.9%[2]，IRI亦是肝移植術(shù)后膽道狹窄的主要原因[3]。對(duì)于如何減輕IRI以保護(hù)肝臟，成為目前器官移植領(lǐng)域亟需解決的問題。近年來，隨著對(duì)微小RNA(microRNA，miRNA)研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)其在HIRI過程中起著重要的調(diào)控作用，本文就以miRNA在HIRI中的研究作用進(jìn)展作一綜述。

1 缺血再灌注損傷機(jī)制概述

1.1 缺血階段

在細(xì)胞水平上，缺血引發(fā)多種病理改變：一方面，由于血流供應(yīng)的中斷導(dǎo)致細(xì)胞缺氧，從而破壞了線粒體氧化呼吸鏈的傳遞[4]；另一方面，缺氧致使線粒體低效率利用ATP進(jìn)行無氧代謝，從而產(chǎn)生乳酸堆積、降低線粒體pH[5]。當(dāng)ATP耗竭，Na+-K+泵無法通過主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)平衡細(xì)胞內(nèi)外Na+、K+離子濃度時(shí)，大量Na+會(huì)通過Na+-H+通道從細(xì)胞外進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)[6]；同時(shí)，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的Ca2+泵失活，限制了胞內(nèi)Ca2+攝入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。以上使得細(xì)胞內(nèi)H+、Na+和Ca2+大量累積，細(xì)胞內(nèi)滲透壓升高，胞內(nèi)高滲透壓驅(qū)使水分子從胞外進(jìn)入胞內(nèi)，導(dǎo)致肝內(nèi)肝細(xì)胞、Kupffer細(xì)胞、竇內(nèi)皮細(xì)胞等腫脹[7]。

1.2 再灌注階段

在再灌注早期，由于電子傳輸鏈的破壞，大量電子泄漏導(dǎo)致活性氧(reactive oxygen species，ROS)大量生成，并引誘導(dǎo)Kupffer細(xì)胞激活，產(chǎn)生更多的ROS，并且釋放TNF-α、IFN-β、IL-1、IL-12等促炎因子[8,9]。當(dāng)大量的ROS聚集，體內(nèi)超氧化物歧化酶不足及時(shí)將其降解，則會(huì)引起內(nèi)皮細(xì)胞DNA損傷和氧化應(yīng)激功能障礙，由此產(chǎn)生更多的羥自由基，破壞跨質(zhì)膜離子梯度，造成細(xì)胞內(nèi)外水電解質(zhì)失衡，導(dǎo)致質(zhì)膜破壞，胞內(nèi)細(xì)胞器被釋放到周圍，引發(fā)細(xì)胞壞死和局部炎癥反應(yīng)[10]。

2 miRNA功能概述

miRNA是一類由21-23個(gè)核苷酸組成的小分子單鏈RNA，不具備編碼蛋白的功能。在RNA聚合酶Ⅱ或RNA聚合酶Ⅲ的作用下于細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)錄相關(guān)miRNA基因得到初級(jí)miRNA(primarymicroRNA，pri-miRNA)，pri-miRNA是 長(zhǎng) 度在數(shù)百到數(shù)千個(gè)堿基雙鏈RNA，具有5`帽結(jié)構(gòu)和3`多聚腺苷酸尾，并形成一個(gè)到多個(gè)發(fā)夾莖環(huán)結(jié)構(gòu)。當(dāng)雙鏈RNA結(jié)合蛋白DGCR8識(shí)別pri-miRNA后形成Drosha-DGCR8微處理復(fù)合物，在核酸酶Drosha作用下水解pri-miRNA，將其剪切為大約70個(gè)核苷酸的前體miRNA(precursormicroRNA，pre-miRNA)。pre-miRNA通過轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白exportin5從胞核轉(zhuǎn)運(yùn)至胞漿內(nèi)，在胞漿中pre-miRNA末端的莖環(huán)結(jié)構(gòu)被核酸內(nèi)切酶Dicer水解切割，形成為21-23個(gè)堿基對(duì)的雙鏈RNA(doublestrandRNA，dsRNA)，dsRNA與Argonaute2蛋白結(jié)合形成RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合物(RNA-induced silencing complex，RISC)，dsRNA在Argonaute2作 用 下 解 開 雙 鏈，將其中一條鏈從RISC釋放并迅速降解，剩余的一條鏈則保存在RISC中成為成熟miRNA[11,12]。當(dāng)miRNA與信使RNA(messengerRNA，mRNA)的3`非編碼區(qū)(3` untranslated region，3`UTR)：①完全互補(bǔ)配對(duì)，RISC則可以降解mRNA；②不完全互補(bǔ)配對(duì)，RISC則抑制mRNA的翻譯，從以上兩種機(jī)制抑制靶基因mRNA的翻譯功能，從而達(dá)到基因表達(dá)調(diào)控的作用[13,14]，miRNA通過在轉(zhuǎn)錄后水平對(duì)mRNA的抑制功能，實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞分化、凋亡、增殖、自噬等多方面的功能調(diào)控，以發(fā)揮其生物學(xué)功能[15]。

3 miRNA與凋亡

3.1 凋亡概述

凋亡是指機(jī)體在生理或病理?xiàng)l件下，為了維持自身內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)態(tài)，發(fā)生的基因調(diào)控下單個(gè)細(xì)胞主動(dòng)、有序的死亡，同時(shí)伴有細(xì)胞皺縮、核固縮、細(xì)胞膜重塑、凋亡小體形成等一系列細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變[16]，以及半胱氨酸-天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)、Ca2+/Mg2+依賴的核酸內(nèi)切酶以及需Ca2+蛋白酶活化等一系列生化改變，最后凋亡細(xì)胞被巨噬細(xì)胞吞噬而消亡，其發(fā)生途徑可分為內(nèi)源性線粒體途徑和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)途徑，以及外源性死亡受體途徑三條[17]。

3.2 miRNA通過線粒體途徑調(diào)控HIRI中的細(xì)胞凋亡

細(xì)胞凋亡的線粒體途徑主要是由于凋亡信號(hào)的傳導(dǎo)使線粒體膜通透性轉(zhuǎn)換孔道(mitochondrialpermeabilitytransiti onpore，MPTP)開放，從而改變線粒體膜的通透性，釋放細(xì)胞色素c(cytochrome c，Cytc)到細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，激活caspase，形成凋亡小體并發(fā)生一系列的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，最終導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生程序性死亡[18,19]。

在缺氧、應(yīng)激等細(xì)胞外信號(hào)的刺激下，可以激活磷脂酰肌 醇3-激 酶(phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K)，Akt是PI3K重要的下游分子，由PI3K激活的Akt能促使Bcl-2與Bad分離，游離的Bcl-2通過阻止Cytc從線粒體釋放到胞質(zhì)中，避免caspase的激活，發(fā)揮抗凋亡的生物學(xué)功能[20]。研究顯示，在HIRI模型中，miR-124能通過靶向抑制Rab38從而激活PI3K/Akt，上調(diào)Bcl-2，進(jìn)而抑制caspase-3的活化，以抑制細(xì)胞發(fā)生凋亡[21]；miR-494通過磷酸酶與張力 蛋 白 同 源 物(phosphatase and tensin homolog，PTEN)激活PI3K/Akt，抑制多聚ADP核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase，PARP)和caspase-3，減 輕 肝 損 傷[22]；miR-21能通過PTEN激活PI3K/Akt信號(hào)通路，抑制糖原合成酶激 酶-3b(glycogen synthase kinase-3 beta，GSK-3b)，減 少caspase-3和caspase-9的表達(dá)，從而抑制線粒體途徑細(xì)胞凋亡的啟動(dòng)[23]；miR-142-3p通過MARCKS/PI3K/Akt信號(hào)途徑上調(diào)Bcl-2，下調(diào)caspase-3，減輕凋亡以保護(hù)HIRI后的肝功能；miR-494升高能激活PI3K/Akt，誘導(dǎo)下游低氧誘導(dǎo)因子-1a(hypoxia inducible factor-1 alpha，HIF-1a)和 血 紅 素氧合酶-1(hemeoxygenase-1，HO-1)表達(dá)上調(diào)，caspase-3和caspase-7表達(dá)下調(diào)，減輕細(xì)胞在缺氧應(yīng)激情況下的凋亡[24]；miR-27a-5p通過靶向Bach1增加HO-1的表達(dá)，上調(diào)Bcl-2發(fā)揮抗凋亡功能[25]。

Bax作為主要的促凋亡蛋白之一，在凋亡信號(hào)的刺激下，Bax可轉(zhuǎn)位至線粒體膜并形成聚合物，開放MPTP并釋放Cytc，在dATP存在條件下，Cytc與凋亡蛋白酶激活因子-1(apoptotic protease activating factor-1，Apaf-1)結(jié)合，招募caspase-9在其上形成寡聚物，進(jìn)而激活caspase-3，啟動(dòng)級(jí)聯(lián)反應(yīng)，促使細(xì)胞凋亡[26]。研究顯示，通過干擾鋅指E-盒結(jié)合同源異型盒蛋白1(zinc finger E-box-binding homeobox 1，ZEB1)能上調(diào)Bax的表達(dá)[27]，Wu，Y等[28]證實(shí)miR-200c可以靶向干擾ZEB1的表達(dá)，并在H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞模型以及動(dòng)物HIRI模型中通過抑制和過表達(dá)miR-200c，揭示了miR-200c能通過抑制ZEB1上調(diào)PARP和caspase-3的表達(dá)，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡發(fā)生。另一項(xiàng)研究中，Xiao，Y等[29]通過miR-219a-5p抑制腫瘤蛋白p53結(jié)合蛋白2(tumorproteinp53 bindingprotein 2，TP53BP2)，抑制TP53轉(zhuǎn)錄活性，下調(diào)Bax和p21表達(dá)，減輕凋亡，從而減輕HIRI中肝細(xì)胞損傷。

轉(zhuǎn)錄因子Nfib的抗凋亡作用在多種腫瘤中均有報(bào)道[30-32]，Roy，S等[33]通過小鼠HIRI模型和細(xì)胞氧化應(yīng)激模型，并結(jié)合急性肝衰竭患者的資料，充分證實(shí)了miR-1224在IRI過程能夠靶向Nfib從而抑制其抗凋亡功能，增加肝損傷，同時(shí)還發(fā)現(xiàn)miR-1224特異性來自肝細(xì)胞，血清含量變化與ALT、AST變化水平一致，可以作為反映肝細(xì)胞損傷的生物標(biāo)志物。

凋亡蛋白酶激活因子-1(apoptotic protease activating factor-1，Apaf-1)可以和釋放的Cytc結(jié)合發(fā)生寡聚化，并與caspase-9結(jié)合形成凋亡小體，介導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡。miR-183可以通過靶向Apaf-1從而抑制下游caspase-9和caspase-3的活化，下調(diào)ALT、AST活性，發(fā)揮護(hù)肝功能[34]。

3.3 miRNA通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)途徑調(diào)控HIRI中的細(xì)胞凋亡

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)合成、加工、修飾并折疊成熟的主要場(chǎng)所，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)作為細(xì)胞內(nèi)重要的Ca2+儲(chǔ)存細(xì)胞器，在維持細(xì)胞Ca2+離子穩(wěn)定方面起到重要的作用。如果內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔內(nèi)Ca2+離子發(fā)生失衡、錯(cuò)誤折疊或未折疊蛋白增多，均會(huì)引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endoplasmicreticulumstress，ERS)，過度的ERS會(huì)觸發(fā)細(xì)胞內(nèi)的凋亡信號(hào)，促使細(xì)胞凋亡。ERS主要由肌醇需求酶1(inositolrequiringenzyme 1，IRE1)、蛋白激酶R樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶(PRKR-like endoplasmic reticulum kinase，PERK)和活化轉(zhuǎn)錄因子6(activatingtranscriptionfactor 6，ATF6)介導(dǎo)[35]。當(dāng)發(fā)生ERS時(shí)，非折疊蛋白或錯(cuò)誤折疊蛋白與IRE1、PERK、ATF6競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(glucose regulated protein78kD，GRP78)，使IRE1、PERK、ATF6解離從而激活下游信號(hào)通路。過度的ERS可以激活CCAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白同源蛋白(CCATenhancerbindingproteinhomologousprotein，CHOP)和caspase-12，從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的發(fā)生[36]。

研究報(bào)道過氧化物酶體增殖劑激活受體g(peroxisome proliferatoractivated receptorgamma，PPARg)可 以 作 為HIRI的一個(gè)治療靶點(diǎn)[37,38]，而miR-27a能夠靶向抑制PPARg[39]，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，在大鼠HIRI模型中通過抑制miR-27a能下調(diào)GRP78和CHOP的表達(dá)，降低血清ALT、AST含量，TUNEL檢測(cè)顯示肝組織凋亡細(xì)胞減少，而進(jìn)一步沉默PPARg，使GRP78和CHOP表達(dá)上調(diào)，發(fā)生ERS，加重細(xì)胞凋亡與壞死程度，說明miR-27a對(duì)大鼠HIRI的保護(hù)作用通過是PPARg調(diào)控內(nèi)質(zhì)網(wǎng)途徑的細(xì)胞凋亡實(shí)現(xiàn)[40]。另一項(xiàng)研究中，用小鼠建立HIRI模型和用巨噬細(xì)胞細(xì)胞系建立細(xì)胞低氧/復(fù)氧(hypoxia reoxygenation，H/R)模型，過表達(dá)miR-199a-5p后ERS相關(guān)GRP78、ATF6、IRE1和CHOP在mRNA水平和蛋白水平表達(dá)量均發(fā)生下調(diào)[41]。

3.4 miRNA通過死亡受體途徑調(diào)控HIRI中的細(xì)胞凋亡

死亡受體是錨定在細(xì)胞膜上的跨膜蛋白，其胞外部分的結(jié)構(gòu)富含半胱氨酸，胞內(nèi)部分則含有具有蛋白水解功能的死亡結(jié)構(gòu)域[42]。當(dāng)死亡受體的胞外部分接受到凋亡刺激信號(hào)后，將信號(hào)傳遞至胞內(nèi)，由死亡受體招募TRADD、TRAF1/2、cIAP1/2、RIP1等銜接蛋白，激活caspase-8，并進(jìn)一步激活caspase-3、caspase-7啟動(dòng)凋亡[43]。

高遷移率族蛋白1(highmobilitygroupbox 1，HMGB1)是晚期炎癥的標(biāo)志物，可以促使核因子活化B細(xì)胞k輕鏈增強(qiáng)子(nuclear factor-kappa B，NF-kB)活化，釋放TNF-a，通過與TNF受體結(jié)合向胞內(nèi)傳遞死亡信號(hào)，啟動(dòng)細(xì)胞凋亡。在大鼠HIRI模型中，miR-449b-5p通過靶向HMGB1抑制其表達(dá)，進(jìn)而通過減少NF-kB的激活，降低caspase-3、caspase-9的表達(dá)，減輕肝損傷[44]。而miR-9-5p能直接通過靶向NF-kB抑制凋亡[45]，miR-214則能抑制傳遞信號(hào)到胞內(nèi)的重要蛋白TRAF1，通過負(fù)調(diào)節(jié)TRAF1/ASK1/JNK通路抑制HIRI后的肝細(xì)胞凋亡[46]。

4 miRNA與自噬

4.1 自噬概述

自噬是以胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)雙層膜結(jié)構(gòu)包裹長(zhǎng)壽命蛋白和細(xì)胞器的自噬小體為特征的細(xì)胞程序性死亡。正常情況下，哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶標(biāo)(mammaliantargetofrapamycin，mTOR)處于活化狀態(tài)，通過磷酸化ULK1蛋白激酶復(fù)合體而抑制自噬的發(fā)生，在饑餓、氧化應(yīng)激、蛋白折疊錯(cuò)誤等情況下，mTOR失活使ULK1發(fā)生去磷酸化，誘導(dǎo)自噬啟動(dòng)[47,48]。激活的ULK1使Beclin1發(fā)生磷酸化，并與Vps34和Vps15結(jié)合形成Vps34-Vps15-Beclin1復(fù)合物，招募Atg12-Atg5-Atg16L復(fù)合物定位至自噬泡外膜。同時(shí)，在誘導(dǎo)自噬以后，胞漿可溶形式的自噬微管相關(guān)蛋白輕鏈3-I(microtubule-associatedprotein 1 lightchain 3-I，LC3-I)在Atg7、Atg3以 及Atg12-Atg5-Atg16L復(fù)合物的作用下與自噬體膜表面的磷脂酰乙醇胺相耦聯(lián)形成LC3-Ⅱ，并錨定在自噬體膜上，其含量隨自噬體膜的增多而增加，是自噬體的重要分子標(biāo)志[49]。LC3-Ⅱ通過與結(jié)合了泛素化寡蛋白的p62相結(jié)合，從而將泛素化寡蛋白包裹進(jìn)自噬泡，自噬泡進(jìn)一步與溶酶體融合成為自噬溶酶體，降解自噬底物[50]。

4.2 miRNA在HIRI中對(duì)自噬的調(diào)控

研究報(bào)道，在小鼠HIRI模型中過表達(dá)miR-30b-5p能有效改善IRI后的肝損傷，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)miR-30b-5p可以通過結(jié)合Atg12 mRNA的3`UTR抑制其翻譯，通過建立H/R細(xì)胞模型進(jìn)行機(jī)制研究，發(fā)現(xiàn)過表達(dá)miR-30b-5p后Atg12-Atg5和LC3-Ⅱ表達(dá)降低，細(xì)胞活力增加，而抑制miR-30b-5p后Atg12-Atg5和LC3-Ⅱ表達(dá)則升高，細(xì)胞活力下降，證明miR-30b-5p在HIRI中能抑制自噬保護(hù)肝細(xì)胞[51]。另一項(xiàng)研究揭示了發(fā)生HIRI后，miR-17可以通過靶向Stat3上調(diào)Beclin1和LC3B-Ⅱ，下調(diào)p62，通過激活自噬加重肝細(xì)胞損傷[52]。Sun，X. L等[53]建立HIRI模型小鼠，并在2h、6h、12h、24h取材進(jìn)行檢測(cè)分析，發(fā)現(xiàn)在肝組織損傷最嚴(yán)重的12h時(shí)間點(diǎn)上，LC3-Ⅱ和PGAM5上調(diào)最明顯，而p62和miR-330-3p下調(diào)最明顯，進(jìn)一步在小鼠模型上過表達(dá)miR-330-3p，能明顯減輕IRI后的肝損傷，通過在H/R細(xì)胞模型上進(jìn)行機(jī)制探索，揭示了miR-330-3p能夠靶向PGAM5，通過抑制線粒體自噬減輕IRI后的肝損傷。Song，H等[54]人的研究發(fā)現(xiàn)，HIRI過程中，miR-101可以通過激活mTOR抑制自噬發(fā)生，減輕細(xì)胞損傷。Zhang，L等[55]則揭示了miR-20a通過抑制Beclin-1在自噬體膜成膜延伸階段抑制自噬，減輕HIRI后的肝損傷。

5 miRNA與ceRNA機(jī)制

5.1 ceRNA機(jī)制概述

競(jìng)爭(zhēng)性內(nèi)源RNA(competingendogenousRNA，ceRNA)可以通過競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合miRNA來更精細(xì)的調(diào)節(jié)基因表達(dá)。當(dāng)內(nèi)源性長(zhǎng)鏈非編碼RNA(longnon-codingRNA，lncRNA)、環(huán)狀RNA(circularRNA，circRNA)等RNA存在相關(guān)的miRNA應(yīng)答元件(microRNAresponseelement，MRE)，就可以與相應(yīng)miRNA發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合，從而間接調(diào)控 miRNA對(duì)靶mRNA的負(fù)性調(diào)控作用，這種競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合miRNA又被稱為miRNA海綿作用[56,57]。

5.2 lncRNA在HIRI中對(duì)miRNA的調(diào)控

lncRNA通常定義為長(zhǎng)度在200個(gè)核苷酸以上，且不編碼蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)錄本，能通過參與轉(zhuǎn)錄激活、轉(zhuǎn)錄抑制、染色質(zhì)重塑、RNA剪切等過程發(fā)揮相應(yīng)的生物學(xué)功能[58]。通過RNA下拉實(shí)驗(yàn)，Huang，X等[59]證實(shí)了lncRNAMEG3與miR-34a存在相互作用，并通過過表達(dá)、敲低以及功能回復(fù)實(shí)驗(yàn)，在動(dòng)物模型和細(xì)胞模型上均證明了HIRI過程中，lncRNAMEG3通過負(fù)性調(diào)控miR-34a，從而上調(diào)其靶基因Nrf2的表達(dá)，增加細(xì)胞凋亡，并增加了ALT、AST活性。Dai，B等[41]發(fā)現(xiàn)lncRNAAK054386通過海綿吸附miR-199，在HIRI過程中上調(diào)了GRP78、ATF6、IRE1a和CHOP的表達(dá)，從而發(fā)生ERS，加重肝細(xì)胞損傷。lncRNAHOTAIR通過吸附miR-20b-5p上調(diào)Atg7的表達(dá)，增加細(xì)胞自噬[60]。lncRNAGm4419在HIRI中通過miR-455上調(diào)SOX6，從而促進(jìn)Bax并抑制Bcl-2的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，增加肝損傷[61]。

5.3 circRNA在HIRI中對(duì)miRNA的調(diào)控

circRNA是具有閉合環(huán)狀結(jié)構(gòu)的非編碼RNA，主要由mRNA前體的外顯子經(jīng)反向剪接環(huán)化而成，其在體內(nèi)表達(dá)穩(wěn)定，不易降解，能通過內(nèi)源性競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合miRNA、調(diào)控可變剪切、調(diào)控親本基因表達(dá)等途徑發(fā)揮其生物學(xué)功能[62,63]。Zhang P等[64]通過小鼠HIRI模型，用微陣列雜交找到差異表達(dá)的circRNA，聯(lián)合GO、KEGG富集分析，并進(jìn)一步用qRTPCR擴(kuò)增驗(yàn)證，篩選出6個(gè)circRNA，構(gòu)建circRNA-miRNAmRNA互作網(wǎng)絡(luò)圖，最終預(yù)測(cè)篩選出mmu_circRNA_005186-miR-124-3p-Epha2調(diào)控軸進(jìn)行實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)和qRT-PCR證明mmu_circRNA_005186通過海綿作用miR-124-3p增強(qiáng)了Epha2的表達(dá)水平，用針對(duì)mmu_circRNA_005186的siRNA轉(zhuǎn)染RAW 264.7細(xì)胞系48h再用LSP刺激，檢測(cè)到TNF-α和IL-1β明顯低于對(duì)照組，而miR-124-3p上調(diào)6倍，Epha2表達(dá)水平明顯下降。該研究揭示了mmu_circRNA_005186可以通過海綿吸附miR-124-3p，從而間接促進(jìn)Epha2的功能，減輕HIRI后的細(xì)胞損傷。

6 總結(jié)與展望

目前在HIRI研究領(lǐng)域，有更多的人將目光投向了miRNA，這些研究進(jìn)一步揭示了miRNA在HIRI過程中參與的精密調(diào)控作用。除此之外，miRNA還有作為生物標(biāo)志物極大的潛力，比如在HIRI發(fā)生過程中，有miR-122[65-70]、miR-1224[33]、miR-370[71-73]、miR-155[74-76]、miR-21[23,69,77]、miR-223[69,78]、miR-450b-5p等[79]上調(diào)，而miR-146a[80]、miR-182-3p[81]、miR-24-3p等[82]下調(diào)，其中miR-122和miR-1224，其表達(dá)量不僅與肝細(xì)胞損傷程度一致，而且還是在肝臟特異表達(dá)的miRNA，有極大的作為HIRI分子標(biāo)志物的潛力。而在通過miRNA減輕HIRI的藥物治療方面，七氟烷可以通過上調(diào)miR-9-5p，抑制NF-kB通路而抑制細(xì)胞凋亡[45]，可以通過下調(diào)miR-200c抑制細(xì)胞凋亡[28]；異丙酚通過上調(diào)miR-33a-5p，抑制MAPK6的表達(dá)發(fā)揮抗凋亡作用[83]。生物治療方面，也有關(guān)于使用間充質(zhì)干細(xì)胞通過miR-370[73]、miR-20a[55]、miR-19a[84]改善HIRI。目前miRNA對(duì)HIRI機(jī)制調(diào)控的研究還處于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)階段，對(duì)于在臨床上如何以miRNA為靶點(diǎn)改善HIRI，其有效性和安全性又如何，有待進(jìn)一步深入研究，不過這也為我們?nèi)绾螠p輕HIRI以及能否利用miRNA評(píng)估肝損傷提供了一個(gè)思路。