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        畜產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測中固相萃取技術(shù)常見問題及探討

        2021-01-05 17:34:15袁艷茹
        河南畜牧獸醫(yī) 2021年12期
        關(guān)鍵詞:柱子極性畜產(chǎn)品

        袁艷茹

        (安陽市畜產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)測檢驗中心,河南 安陽 455000)

        固相萃?。⊿olid Phase Extraction)簡稱SPE,是基于液固色譜理論,采取選擇性吸附、選擇性洗脫,從而對樣品中目標(biāo)組分進(jìn)行分離、凈化、富集的一個過程。這個過程體現(xiàn)了液相與固相之間保留、洗脫作用,可以近似看作一個色譜過程。SPE技術(shù)是20世紀(jì)70年代提出的一種前處理技術(shù),在20世紀(jì)90年代得到了快速發(fā)展,現(xiàn)在在全球范圍內(nèi)SPE 技術(shù)已經(jīng)成為最流行的樣品前處理方法之一。由于SPE 技術(shù)能降低基本干擾,提高檢測靈敏度,減少試劑消耗,易于實現(xiàn)自動化等優(yōu)點,已經(jīng)廣泛用于醫(yī)藥、生物、食品安全等領(lǐng)域。SPE 技術(shù)在實際操作常會遇到一些問題,本文就是結(jié)合作者實踐對產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測過程中常見問題進(jìn)行了探討。這對于確保檢測準(zhǔn)確度和提高檢測效率,保證畜產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測順利開展具有重要意義。

        1 SPE分類

        ①正相SPE:采用極性吸附劑如CN、NH2、silica 等,利用物質(zhì)分子間氫鍵、π-π鍵、偶極-偶極及偶極-誘導(dǎo)偶極、極性-極性的相互作用,從非極性樣品溶液中萃取極性目標(biāo)物;②反相SPE:采用非極性固定相如C8、C18、Ph等,利用物質(zhì)分子間德華力或色散力,從極性樣品溶液中萃取非極性、中等極性目標(biāo)物;③離子交換SPE:采用離子物質(zhì)為固定相,利用離子間靜電吸附,從樣品溶液中萃取帶電荷目標(biāo)物;④免疫親和SPE:以免疫學(xué)抗體為固定相如真菌毒素抗體,利用抗原抗體特異性原理,從樣品溶液中萃取分離特異性抗原。

        2 SPE技術(shù)模式

        固相萃取一般有三種模式:①上樣到SPE 柱上,目標(biāo)組分被保留到吸附劑上,之后把目標(biāo)組分洗脫下來,目標(biāo)組分得到分離、凈化和富集;②樣品中目標(biāo)組分直接通過SPE 柱,干擾物被保留在SPE 柱的吸附劑上,目標(biāo)組分得到凈化和分離;③吸附劑粉末加入樣品中,樣品經(jīng)過過濾和離心,收集上清液即可,目標(biāo)組分得到凈化和分離。

        SPE 操作一般有四個步驟:第一步,活化。先用強(qiáng)溶劑濕潤和凈化SPE 柱填料,再用弱溶劑平衡柱填料,以創(chuàng)造適宜目標(biāo)組分與填料結(jié)合的環(huán)境;第二步,上樣。將樣品加入小柱,樣品溶液通過柱填料時,目標(biāo)組分會與雜質(zhì)分離;第三步,淋洗。用中等強(qiáng)度溶劑洗掉留在柱填料上少量干擾物;第四步,洗脫。根據(jù)目標(biāo)物性質(zhì),用少量適宜洗脫溶劑把目標(biāo)物洗脫下來。

        3 SPE技術(shù)在畜產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測中常見問題及探討

        SPE 技術(shù)在畜產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測中最常見問題是流速慢和回收率低。對于這兩個問題的解決思路可以從SPE操作四個步驟一個一個按順序排查。

        SPE出現(xiàn)流速慢問題,可以按解決問題的思路來。①活化平衡時流速慢。這可能是柱子選擇、溶劑選擇及其他問題。柱子可以換大粒徑、大柱管體積的柱子?;罨胶馊軇┎换ト芑蛘唔樞蚣臃戳?,可以在兩種溶劑間加過渡溶劑或溶劑按正確順序添加。柱子填料進(jìn)入空氣,可以壓實填料;②上樣時流速慢。這可能是樣品渾濁或基質(zhì)蛋白的影響,可以在樣品前處理時注意樣品的過濾離心解決渾濁問題或者通過對樣品加鹽、酸、有機(jī)溶劑等去除基質(zhì)蛋白;③淋洗和洗脫時流速慢。這可能是空氣進(jìn)入形成氣堵,通過加壓排走空氣即可。

        SPE 出現(xiàn)回收率低問題,也可以按解決問題的思路來。①活化平衡時回收率低。先排查柱子選擇是否合適,選擇適合柱子?;罨胶夂?,有些柱子要求不能干涸,有的要求用樣品基質(zhì)溶液平衡;②上樣時回收率低。可能樣品溶液對目標(biāo)組分親和力大于小柱填料的,可以選擇合適小柱或者調(diào)節(jié)樣品溶液溶劑比例或pH改變樣品溶液對目標(biāo)組分親和力。可以調(diào)節(jié)上樣速度,使目標(biāo)組分充分保留;③淋洗和洗脫時回收率低。選擇合適淋洗溶液,不能使淋洗溶液把目標(biāo)組分帶走。洗脫時可能是目標(biāo)組分沒有完全洗脫下來,可以加大洗脫液體積或調(diào)節(jié)洗脫時流速或加強(qiáng)洗脫液洗脫能力,使目標(biāo)組分完全洗脫下來。

        4 小結(jié)

        通過發(fā)現(xiàn)畜產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測中SPE 技術(shù)常見問題并進(jìn)行探討,可以確保畜產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測的可靠性、準(zhǔn)確性,還可以減少檢測時間,提高檢測速度,也可以節(jié)約成本,為實驗室管理提高效益,同時為畜產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測順利發(fā)展提供了便利。□

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