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        畜產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測中固相萃取技術(shù)常見問題及探討

        2021-01-05 17:34:15袁艷茹
        河南畜牧獸醫(yī) 2021年12期
        關(guān)鍵詞:柱子極性畜產(chǎn)品

        袁艷茹

        (安陽市畜產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)測檢驗(yàn)中心,河南 安陽 455000)

        固相萃?。⊿olid Phase Extraction)簡稱SPE,是基于液固色譜理論,采取選擇性吸附、選擇性洗脫,從而對樣品中目標(biāo)組分進(jìn)行分離、凈化、富集的一個(gè)過程。這個(gè)過程體現(xiàn)了液相與固相之間保留、洗脫作用,可以近似看作一個(gè)色譜過程。SPE技術(shù)是20世紀(jì)70年代提出的一種前處理技術(shù),在20世紀(jì)90年代得到了快速發(fā)展,現(xiàn)在在全球范圍內(nèi)SPE 技術(shù)已經(jīng)成為最流行的樣品前處理方法之一。由于SPE 技術(shù)能降低基本干擾,提高檢測靈敏度,減少試劑消耗,易于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn),已經(jīng)廣泛用于醫(yī)藥、生物、食品安全等領(lǐng)域。SPE 技術(shù)在實(shí)際操作常會(huì)遇到一些問題,本文就是結(jié)合作者實(shí)踐對產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測過程中常見問題進(jìn)行了探討。這對于確保檢測準(zhǔn)確度和提高檢測效率,保證畜產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測順利開展具有重要意義。

        1 SPE分類

        ①正相SPE:采用極性吸附劑如CN、NH2、silica 等,利用物質(zhì)分子間氫鍵、π-π鍵、偶極-偶極及偶極-誘導(dǎo)偶極、極性-極性的相互作用,從非極性樣品溶液中萃取極性目標(biāo)物;②反相SPE:采用非極性固定相如C8、C18、Ph等,利用物質(zhì)分子間德華力或色散力,從極性樣品溶液中萃取非極性、中等極性目標(biāo)物;③離子交換SPE:采用離子物質(zhì)為固定相,利用離子間靜電吸附,從樣品溶液中萃取帶電荷目標(biāo)物;④免疫親和SPE:以免疫學(xué)抗體為固定相如真菌毒素抗體,利用抗原抗體特異性原理,從樣品溶液中萃取分離特異性抗原。

        2 SPE技術(shù)模式

        固相萃取一般有三種模式:①上樣到SPE 柱上,目標(biāo)組分被保留到吸附劑上,之后把目標(biāo)組分洗脫下來,目標(biāo)組分得到分離、凈化和富集;②樣品中目標(biāo)組分直接通過SPE 柱,干擾物被保留在SPE 柱的吸附劑上,目標(biāo)組分得到凈化和分離;③吸附劑粉末加入樣品中,樣品經(jīng)過過濾和離心,收集上清液即可,目標(biāo)組分得到凈化和分離。

        SPE 操作一般有四個(gè)步驟:第一步,活化。先用強(qiáng)溶劑濕潤和凈化SPE 柱填料,再用弱溶劑平衡柱填料,以創(chuàng)造適宜目標(biāo)組分與填料結(jié)合的環(huán)境;第二步,上樣。將樣品加入小柱,樣品溶液通過柱填料時(shí),目標(biāo)組分會(huì)與雜質(zhì)分離;第三步,淋洗。用中等強(qiáng)度溶劑洗掉留在柱填料上少量干擾物;第四步,洗脫。根據(jù)目標(biāo)物性質(zhì),用少量適宜洗脫溶劑把目標(biāo)物洗脫下來。

        3 SPE技術(shù)在畜產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測中常見問題及探討

        SPE 技術(shù)在畜產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測中最常見問題是流速慢和回收率低。對于這兩個(gè)問題的解決思路可以從SPE操作四個(gè)步驟一個(gè)一個(gè)按順序排查。

        SPE出現(xiàn)流速慢問題,可以按解決問題的思路來。①活化平衡時(shí)流速慢。這可能是柱子選擇、溶劑選擇及其他問題。柱子可以換大粒徑、大柱管體積的柱子?;罨胶馊軇┎换ト芑蛘唔樞蚣臃戳?,可以在兩種溶劑間加過渡溶劑或溶劑按正確順序添加。柱子填料進(jìn)入空氣,可以壓實(shí)填料;②上樣時(shí)流速慢。這可能是樣品渾濁或基質(zhì)蛋白的影響,可以在樣品前處理時(shí)注意樣品的過濾離心解決渾濁問題或者通過對樣品加鹽、酸、有機(jī)溶劑等去除基質(zhì)蛋白;③淋洗和洗脫時(shí)流速慢。這可能是空氣進(jìn)入形成氣堵,通過加壓排走空氣即可。

        SPE 出現(xiàn)回收率低問題,也可以按解決問題的思路來。①活化平衡時(shí)回收率低。先排查柱子選擇是否合適,選擇適合柱子。活化平衡后,有些柱子要求不能干涸,有的要求用樣品基質(zhì)溶液平衡;②上樣時(shí)回收率低。可能樣品溶液對目標(biāo)組分親和力大于小柱填料的,可以選擇合適小柱或者調(diào)節(jié)樣品溶液溶劑比例或pH改變樣品溶液對目標(biāo)組分親和力??梢哉{(diào)節(jié)上樣速度,使目標(biāo)組分充分保留;③淋洗和洗脫時(shí)回收率低。選擇合適淋洗溶液,不能使淋洗溶液把目標(biāo)組分帶走。洗脫時(shí)可能是目標(biāo)組分沒有完全洗脫下來,可以加大洗脫液體積或調(diào)節(jié)洗脫時(shí)流速或加強(qiáng)洗脫液洗脫能力,使目標(biāo)組分完全洗脫下來。

        4 小結(jié)

        通過發(fā)現(xiàn)畜產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測中SPE 技術(shù)常見問題并進(jìn)行探討,可以確保畜產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測的可靠性、準(zhǔn)確性,還可以減少檢測時(shí)間,提高檢測速度,也可以節(jié)約成本,為實(shí)驗(yàn)室管理提高效益,同時(shí)為畜產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測順利發(fā)展提供了便利。□

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