董科 劉超 朱慧敏 李慧 孟美辰 張雪濤 何琪

摘 要 萊克多巴胺為瘦肉精的替代品，屬于β-興奮劑類藥物，我國禁止在動物養(yǎng)殖中添加。動物長期食用具有致癌、致畸、致突變的作用，其肉制品被人體食用后會對人體產(chǎn)生嚴(yán)重危害，其尿液、糞便排泄物會污染生態(tài)環(huán)境。綜述萊克多巴胺的危害，分析酶聯(lián)免疫法、免疫傳感器法、膠體金免疫層析法、高效液相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、毛細(xì)管電泳法及化學(xué)發(fā)光免疫分析法等，為畜產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測工作提供參考。

關(guān)鍵詞 萊克多巴胺;殘留;檢測方法

中圖分類號：S859.84 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2021.30.091

萊克多巴胺為醫(yī)藥名詞，主要用于治療人體肌肉萎縮和心力衰竭癥，也是治療支氣管擴(kuò)張的有效試劑。作為一種人體興奮類型的藥劑，其可以減少人體脂肪的合成，增加肌肉的生成。正是由于這一特性，使其被一些生豬養(yǎng)殖企業(yè)所利用，在其他諸如肉雞、火雞等養(yǎng)殖業(yè)中也不同程度地存在這一情況[1]。

1 危害

人食用萊克多巴胺殘留的肉類后，會出現(xiàn)不同程度的肌肉顫動、心率過快等問題，嚴(yán)重的甚至出現(xiàn)輕微中毒反應(yīng)，其癥狀類型與動物中毒癥狀基本相同。如果食用人本身就患有高血壓及心臟病等病癥，更易引發(fā)此類問題，甚至?xí)斐伤劳觥ＨR克多巴胺作為一種醫(yī)藥材料，世界各國對其使用量均有規(guī)定，中國臺灣地區(qū)一律禁止使用萊克多巴胺，我國一些地區(qū)沒有完全禁止萊克多巴胺的使用，但要求養(yǎng)殖業(yè)的用量必須控制在規(guī)定值以內(nèi)，一旦使用過量，在動物的體內(nèi)就會有萊克多巴胺殘留，進(jìn)入人體后會發(fā)生一系列癥狀反應(yīng)。有學(xué)者以成年大鼠為例，研究萊克多巴胺對其的影響，得出的結(jié)論是使用該藥劑后，大鼠的睪丸和體重與對照組相比明顯增加，此試驗再次證明萊克多巴胺可以促進(jìn)人體激素的分泌和生成，造成人體激素分泌紊亂，正常的新陳代謝被打亂[2]。有學(xué)者采用試驗的方法對萊克多巴胺在動物體內(nèi)的殘留進(jìn)行試驗，結(jié)果表明萊克多巴胺屬于腎上腺素受體激動劑類型，其作為添加劑對動物進(jìn)行喂食后，動物生長速度明顯加快，同時飼料的轉(zhuǎn)化率大大提升，瘦肉率也大大提升。

2 檢測方法

2.1 酶聯(lián)免疫法（ELISA）

ELISA是目前市場中比較主流的檢測方法之一，單克隆抗體技術(shù)研發(fā)取得的進(jìn)展，使萊克多巴胺的檢測也逐漸從傳統(tǒng)的多抗體檢測試劑盒中轉(zhuǎn)變過來。采用單克隆抗體技術(shù)具有如下優(yōu)勢：工業(yè)化生產(chǎn)方式較為簡單;選擇性較強(qiáng);靈敏度較強(qiáng)，可達(dá)0.5 ng·mL-1;可測的范圍較廣，不僅僅是動物的內(nèi)臟、肉，包括飼料中、尿液中的萊克多巴胺殘留均可測出。隨著研發(fā)技術(shù)的提升，單克隆抗體技術(shù)又可以區(qū)分為直接競爭和間接競爭2類，一般來說，國內(nèi)生產(chǎn)的大多數(shù)為間接競爭ELISA，而國外生產(chǎn)的大多數(shù)均為直接競爭ELISA。目前，酶聯(lián)免疫法主要采取生物素鏈霉親和素放大酶聯(lián)免疫方法，同時結(jié)合了生物素—鏈霉親和素系統(tǒng)的放大作用，靈敏度進(jìn)一步提升，達(dá)到（0.30±0.05）ng·mL-1。在目前主流的檢測方法中，酶聯(lián)免疫法具有較為明顯的優(yōu)勢，由于其操作便捷，結(jié)果的一致性較高，十分適合對大批量樣品的檢測。

2.2 高效液相色譜法（HPLC）

HPLC測定法主要采用C 18分析柱實施分析，測定的步驟如下：利用乙腈和緩沖溶液配置流動相等溶劑洗脫來進(jìn)行樣品預(yù)處理;采取電化學(xué)和HPLC相結(jié)合的方法實施檢測，檢測主要針對豬血清血漿。利用庫侖檢測器也可以實施對飼料及豬組織器官的檢測，該方法也能進(jìn)一步提升檢測的靈敏度[3]。

2.3 膠體金免疫層析法（GICA）

GICA代表了目前萊克多巴胺檢測方法的研發(fā)方向，其具有的優(yōu)勢有：操作較為簡單;不需要專業(yè)的檢測人員和儀器;基本不受環(huán)境的限制;得出結(jié)果的時間短，一般15 min就可以知道結(jié)果。但該檢測方法的缺陷也是顯而易見的，就是不能實現(xiàn)定量分析。隨著科學(xué)研發(fā)能力的提升，在膠體金免疫層析法的基礎(chǔ)上，目前又發(fā)展了膠乳免疫層析法，膠乳免疫層析法的原理是利用膠乳與標(biāo)記物發(fā)生反應(yīng)，在氨基和羧基之間形成較為穩(wěn)定的化學(xué)結(jié)構(gòu)，相比膠體金免疫層析法，膠乳免疫層析法結(jié)構(gòu)體的穩(wěn)定性更好，表面結(jié)合力更強(qiáng)。此外膠乳免疫層析法還具備較好的靈敏度，且靈敏度可控性好，比膠體金高出10～1 000倍。膠乳的分類主要區(qū)分為3類：熒光膠乳、彩色膠乳及磁膠乳。由于作用原理不同，實現(xiàn)的功能也各不相同，其中磁膠乳和熒光膠乳在實施檢測時，需要專門的儀器（熒光檢測儀和磁膠乳檢測儀），從而實現(xiàn)定性和定量檢測，這2種儀器體積較小，搬移也較為便捷，所以可以滿足即時檢測的需要。彩色膠乳主要通過調(diào)節(jié)pH，產(chǎn)出顏色各異的微球膠乳，從而實現(xiàn)聯(lián)檢產(chǎn)品中不同指標(biāo)的同步呈色，這是目前試驗室實施檢測檢驗的趨勢之一。

2.4 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-MS）

GC-MS主要采用專門的儀器對生豬尿樣及組織器官中的萊克多巴胺殘留進(jìn)行測定，由于其靈敏度較高，被廣泛使用。在此基礎(chǔ)上發(fā)展而來的液質(zhì)聯(lián)用法（LC-MS），優(yōu)點更為顯著：樣品無需進(jìn)行衍生，本身的離子碎片就具有較強(qiáng)的特征性;可以提供較為豐富的信息。GC-MS和LC-MS的檢測，均需要較為昂貴的儀器，樣品也需進(jìn)行復(fù)雜的預(yù)處理環(huán)節(jié)，其檢測缺陷也十分明顯：前期耗費的時間較長，檢測效率不高;不適合進(jìn)行大規(guī)模的檢測。但和酶聯(lián)免疫法（ELISA）相比，也有自身具有的特有優(yōu)勢：準(zhǔn)確性、有效性及敏感性均優(yōu)于ELISA;檢測時，ELISA需要先行使用試劑盒進(jìn)行測定，而氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法則不需要該步驟[4-5]。

2.5 毛細(xì)管電泳法（CE）

毛細(xì)管電泳法所采用的原理是采用加有S-α-CD緩沖液的毛細(xì)管電泳法可以較好地實現(xiàn)相關(guān)物質(zhì)的分離。這一方法對生豬預(yù)混料中的萊克多巴胺進(jìn)行測定，具有顯著的優(yōu)勢：具有較好的精確度;具有較好的回收率，一般能達(dá)到（92.6±4.6）%。與前文所闡述的方法相比，優(yōu)勢更為明顯：對生豬尿樣的處理簡單;分析過程較短，檢測所需的成本大大降低;檢測過程比較穩(wěn)定，干擾因素少，所以檢測的結(jié)果也較為可靠。毛細(xì)管電泳法（CE）的缺陷也較為明顯：使用樣品的量較少，因此對低濃度樣品的檢測具有較大難度;方法不具備可復(fù)制性。這類型缺陷可以采取等速電泳、電堆積技術(shù)加以改善。

2.6 化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA）

該方法主要利用的原理是在抗體上以酶或化學(xué)發(fā)光物質(zhì)實施標(biāo)記，在免疫反應(yīng)結(jié)束后，加入發(fā)光的底物，從而測定發(fā)光信號的光強(qiáng)，再根據(jù)一定的計算公式計算出物質(zhì)中萊克多巴胺的含量。該方法主要利用一定的化學(xué)原理實施分析，具備的優(yōu)勢十分顯著：靈敏度較高;見效較快;成本較低;樣品的預(yù)處理較為便捷;有著較強(qiáng)的選擇性。由于該技術(shù)具有的比較優(yōu)勢十分顯著，也是未來重點發(fā)展的主要趨勢之一。

2.7 免疫傳感器法

該方法的主要原理是利用免疫測定法和傳感技術(shù)結(jié)合使用。作為一種新型的生物傳感器技術(shù)，其主要利用抗體特異性、抗原原理實施。免疫傳感器法主要將抗原或抗體固定在傳感器基體上，致其發(fā)生化學(xué)、物理反應(yīng)，同時通過傳感技術(shù)將化學(xué)反應(yīng)轉(zhuǎn)變?yōu)榭蓹z測的信號，以測定分子的濃度。實踐中，傳感器可以區(qū)分為2類，標(biāo)記型免疫傳感器和非標(biāo)記型免疫傳感器。使用該技術(shù)的優(yōu)勢有：穩(wěn)定性較好，具有一定的可重復(fù)性;靈敏度較高。其使用劣勢主要是抗原抗體反應(yīng)具有良好的可逆性。

3 結(jié)語

隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，養(yǎng)殖業(yè)中萊克多巴胺殘留的測定可使用的方法越來越多，檢測的精確度也越來越高。但由于養(yǎng)殖業(yè)環(huán)境、生產(chǎn)條件及養(yǎng)殖方法的不同，使用一種檢測方法往往不能適用所有的檢測環(huán)境和條件。目前市場中成本低、操作便捷、適用性好及結(jié)果穩(wěn)定的測定方法得到推廣應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)：

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[3] 金雁，姜莉，劉寧，等.高效液相色譜法同時測定豬肉中克倫特羅、沙丁胺醇、土霉素、四環(huán)素殘留量的研究[J].分析測試，2007（2）：64-67.

[4] 王重洋.基質(zhì)固相分散—色譜法分析食品中磺胺類獸藥殘留、蘇丹紅染料及揮發(fā)性成分[D].長春：吉林大學(xué)，2014.

[5] 韓德娟，高艾英，高大山.液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜內(nèi)標(biāo)法測定豬肉中沙丁胺醇及萊克多巴胺殘留量的不確定度分析[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報，2020，11（1）：223-230.

（責(zé)任編輯：劉寧寧）