蘇 峰，汪 萍，魯勝男，劉為中，何廣衛(wèi)

(1 合肥醫(yī)工醫(yī)藥股份有限公司，安徽 合肥 230088；2 藥物一致性評價及高端制劑安徽省重點實驗室，安徽 合肥 230088；3 中國藥科大學，江蘇 南京 211198)

羥苯磺酸鈣是一種新型的血管保護藥，自問世以來，已在臨床上獲得了廣泛的應用，于1997年載入《歐洲藥典》，1998年載入《英國藥典》，國內于2001年投入市場。羥苯磺酸鈣臨床最早用于糖尿病視網膜病變的治療，現(xiàn)已可用于糖尿病腎病、各種病因所致的慢性腎功能不全、冠心病等疾病的治療[1-2]。目前，進口和國內生產的羥苯磺酸鈣制劑分別為膠囊劑和片劑，根據(jù)CDE公布的仿制藥參比制劑目錄公布，其膠囊劑和片劑的參比制劑均已明確(膠囊劑參比制劑序號為8-110，片劑參比制劑序號為23-76)，羥苯磺酸鈣膠囊參比制劑是由奧地利依比威大藥廠(Ebewe Pharma)進口，進口注冊證號為H20140641，商品名為導升明(DOXIUM?)，為《中國藥典》2015版二部收載品種[3-4]。國內文獻已有羥苯磺酸鈣制劑的耐受性、藥動學研究報道，但尚未有市售羥苯磺酸鈣膠囊溶出曲線相似性研究的報道。

本研究的主要目的是對參比制劑和國內不同廠家羥苯磺酸鈣膠囊在多種不同pH溶出介質中的體外溶出特性進行評價，采用f2相似因子法和溶出效率(DE)對試驗藥品與參比制劑的體外溶出度進行比較，為仿制藥一致性評價體外溶出分析提供基礎數(shù)據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器與材料

AL104電子天平，梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司；XS105電子天平，梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司；FE-20型pH計，梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司；FAVD-25真空脫氣機，上海富科思分析儀器有限公司；708-DS自動取樣溶出儀，安捷倫科技有限公司；UV-2700紫外可見分光光度計，島津儀器(蘇州)有限公司；0.45 μm微孔濾膜，上海半島實業(yè)有限公司凈化器材廠。

1.2 藥品與試劑

羥苯磺酸鈣對照品，中國藥品生物制品檢定所；羥苯磺酸鈣膠囊參比制劑(500 mg)，依比威大藥廠；國產羥苯磺酸鈣制劑(250 mg，A制劑)；國產羥苯磺酸鈣制劑(250 mg，B制劑)；國產羥苯磺酸鈣制劑(500 mg，C制劑)；乙酸(分析純)，西隴科學股份有限公司；三水合乙酸鈉(分析純)，西隴科學股份有限公司；鹽酸(分析純)，國藥集團化學試劑有限公司；磷酸二氫鉀(分析純)，上海潤捷化學試劑有限公司；氫氧化鈉(分析純)，西隴科學股份有限公司；純化水，合肥醫(yī)工醫(yī)藥股份有限公司。

2 方法與結果

2.1 溶出介質的配制

①水：直接取純化水。②0.1 mol/L鹽酸：按《普通口服固體制劑溶出度試驗技術指導原則》[5]方法配制，取濃鹽酸9 mL，加水稀釋至1000 mL，搖勻，即得。③pH 3.8醋酸鹽緩沖液：按《普通口服固體制劑溶出度試驗技術指導原則》方法配制，稱取0.67 g三水合乙酸鈉及22.6 mL 2 mol/L醋酸溶液(取120.0 g (114 mL)冰醋酸用水稀釋至1000 mL，即得)，加水溶解并稀釋至1000 mL，搖勻，即得。④pH5.5磷酸鹽緩沖液：按《普通口服固體制劑溶出度試驗技術指導原則》方法配制，取250 mL 0.2 mol/L磷酸二氫鉀溶液(取27.22 g磷酸二氫鉀，用水溶解并稀釋至1000 mL)與9.0 mL 0.2 mol/L氫氧化鈉溶液(取8.00 g氫氧化鈉，用水溶解并稀釋至1000 mL)混合后，加水稀釋至1000 mL，搖勻，即得。

2.2 測定方法

取不同廠家羥苯磺酸鈣制劑，照溶出度測定法[6]，取羥苯磺酸鈣膠囊12粒，分別以“2.1”項下的溶出介質各900 mL，采用《中國藥典》2015年版四部0931 溶出度與釋放度測定法第一法(籃法)，設定轉速為100 rpm，分別于15，30，60，90，120，180 min取樣10 mL，并同時補充相同溫度、相同體積的溶出介質，濾過，濾液用相應溶出介質稀釋成每1 mL中約含31 μg的溶液，另取羥苯磺酸鈣對照品適量，加相應介質溶解并稀釋成每1 mL中約含31 μg的溶液，取上述兩種溶液按照紫外-可見分光光度法(《中國藥典》2015年版四部0401紫外-可見分光光度法)，在301 nm波長處分別測定各時間點吸光度，計算累積溶出度。另取羥苯磺酸鈣膠囊參比制劑，平行操作，測定其在不同溶出介質中各對應時間點的累積溶出度，繪制溶出曲線。

2.3 標準曲線的繪制

取羥苯磺酸鈣對照品31 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別移取5 mL、3 mL、2 mL、5 mL、3 mL至100 mL、50 mL、25 mL、50 mL、25 mL，配成濃度分別為15.5 μg/mL、18.6 μg/mL、24.8 μg/mL、31 μg/mL、37.2 μg/mL的溶液，測定其在301 nm處的吸光度，以樣品的濃度(C，mg/mL)為橫坐標，吸光度值(A)為縱坐標，作二次回歸得到回歸方程及相關系數(shù)，回歸方程為A=1.765×10-2C，r=0.9997，表明線性關系良好，線性范圍為15.5～37.2 μg/mL。

2.4 準確度試驗

按照羥苯磺酸鈣標示量的80%、100%、120%，分別精密稱取羥苯磺酸鈣約260 mg、417 mg、521 mg及處方配比量的相應輔料，各平行3份，混勻，分別置200 mL量瓶中，用0.1 mol/L鹽酸溶液超聲溶解，并稀釋至刻度，搖勻，0.45 μm微孔濾膜濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液3 mL至200 mL量瓶中，介質稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另精密稱取羥苯磺酸鈣對照品適量，置容量瓶中，用0.1 mol/L鹽酸溶液超聲溶解后，稀釋至刻度，搖勻，精密量取溶液適量，并用介質稀釋制成每1 mL中約含31 μg的溶液，作為對照溶液；按上述方法測定吸光度，計算平均回收率及RSD值，結果見表1。在高、中、低三個不同濃度下，本品羥苯磺酸鈣的回收率均在98%～102%之間，且各次測得結果間相對標準偏差均小于2%，表明本方法回收率良好。

表1 回收率試驗測定結果(n=9)

2.5 重復性試驗

精密稱取羥苯磺酸鈣膠囊內容物研粉末適量，0.1 mol/L鹽酸溶液超聲溶解，濾過，配制成含羥苯磺酸鈣約低、中、高三種濃度的溶液，精密量取1 mL(各6份)，分別置25 mL量瓶中，0.1 mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，在最大吸收波長處分別測定吸光度，考察重復性，結果見表2。在高、中、低三個不同濃度下，6份樣品測定結果相對標準偏差均不大于2%，表明本方法重復性良好。

表2 重復性試驗結果

2.6 穩(wěn)定性試驗

取重復性試驗高、中、低三個不同濃度項下各一份樣品溶液，于室溫放置0、2、4、8、12、24 h，在最大吸收波長處分別測定吸光度值，計算羥苯磺酸鈣的A的相對標準偏差，考察其穩(wěn)定性，結果見表3。室溫放置24 h，各濃度項下主成分含量的相對標準偏差均不大于2%，可認為室溫放置24 h內樣品溶液穩(wěn)定。

表3 穩(wěn)定性試驗結果

2.7 溶出曲線測定與比較

2.7.1 溶出曲線測定結果

圖1 不同廠家制劑于0.1 mol/L鹽酸溶液中溶出曲線(n=12)

圖2 不同廠家制劑于pH 3.8醋酸鹽緩沖液中溶出曲線(n=12)

圖3 不同廠家制劑于pH 5.5磷酸鹽緩沖液中溶出曲線 (n=12)

圖4 不同廠家制劑于水中溶出曲線 (n=12)

分別在4種介質中，按“2.2”項下方法測定，得不同廠家羥苯磺酸鈣制劑與參比制劑在4種介質中累積溶出度曲線。研究結果見圖1～圖4。

2.7.2 制劑曲線相似性比較

本研究采用f2相似因子法和溶出效率(DE)法對試驗藥品與參比制劑的溶出行為進行比較。比較結果見表4。相似因子f2的數(shù)學表達式為：

式中，Rt為t時間對照藥品平均累積溶出百分數(shù)；Tt為t時間試驗藥品平均累積溶出百分數(shù)；n為取樣點的個數(shù)。如果50≤f2≤100，可認為2種制劑的溶出曲線相似。

溶出效率(DE)定義為時間點t1和t2間溶出曲線下的面積在相同時間100%溶出度的長方形面積中所占的百分比[6]。公式表達如下：時間點t1和t2間溶出曲線下的面積在相同時間100%溶出度的長方形面積中所占的百分比。公式表達如下：

式中y為溶出的百分率。曲線下面積計算方法有梯形法和Simpson法[7]。

從表4可知，A、B、C制劑相似因子f2值遠小于50，進口Doxium膠囊在4種溶出介質中溶出效率DE均低于A、B、C三種不同國產制劑。

從圖1～圖4看出，A、B和C制劑較參比制劑Doxium于4種溶出介質中的溶出快速，對照藥品于0.1 mol/L鹽酸溶液和pH 3.8醋酸鹽溶液中60 min累積溶出量達85%，pH 5.5磷酸鹽溶液和水中180 min累積溶出量達85%。A制劑和B制劑在4種溶出介質中15 min累積溶出量均達85%，C制劑在0.1 mol/L鹽酸和pH 3.8醋酸鹽緩沖液中15 min累積溶出量均達85%，在pH 5.5磷酸鹽緩沖液中60 min累積溶出量達85%，在水中30 min累積溶出量達85%。由此可見，A、B和C制劑與參比制劑Doxium在4種不同溶出介質中溶出曲線有明顯差異。

表4 不同廠家制劑在4種溶出介質中溶出效率(DE)和相似因子(f2)的變化

3 結 論

溶出度試驗技術是評價口服固體制劑內在質量的一種重要手段，溶出度測定作為一種簡便可行的方法，在一定條件下與制劑的生物利用度有一定的相關性，溶出度已作為一種控制藥品內在質量的重要指標，廣泛應用于藥品的研發(fā)、生產和監(jiān)督檢驗中，而f2相似因子法是美國FDA推薦的采用溶出曲線評價產品內在質量的首選方法，可用來推測仿制制劑與原研制劑是否生物等效[8-9]。故在本次研究中采用模擬人體胃腸道的不同pH環(huán)境下的溶出介質，以f2相似因子法考察不同市售羥苯磺酸鈣產品體外溶出曲線的相似性。

研究結果表明，4個不同廠家的羥苯磺酸鈣膠囊在不同pH溶出介質中溶出行為均有顯著差異，這種溶出性能的差異除了和藥物粒度、晶型有關外，與不同廠家間輔料種類、處方配比、生產設備和工藝等差異密切相關[10]。各生產企業(yè)需深入研究原輔料及工藝，提高產品質量的均一性和穩(wěn)定性，生產出不僅與原研制劑溶出曲線有區(qū)分力且質量相當?shù)漠a品，以期為患者提供更好的藥物選擇。