王善輝

（徐州生物工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院動物工程系，江蘇 徐州 221006）

鴨坦布蘇病毒病是由鴨坦布蘇病毒(Duck tembusu virus，DTMUV)引起一種給全國養(yǎng)鴨場均帶來嚴(yán)重危害的傳染病。本文將實驗室于2020年3月接診的一起櫻桃谷種鴨感染鴨坦布蘇病毒的病例，從鴨場的發(fā)病情況、臨床癥狀、病理變化、病毒分離鑒定、RT-PCR 檢測對該病進(jìn)行診斷，并對該病的防控措施進(jìn)行了闡述，以期為生產(chǎn)實踐中該病的診斷與防制提供依據(jù)與參考。

鴨坦布蘇病毒病是2010在我國養(yǎng)鴨場大面積暴發(fā)的一種傳染病，由鴨坦布蘇病毒(Duck tem busu virus，DTMUV)引起，主要導(dǎo)致產(chǎn)蛋鴨卵巢嚴(yán)重出血、產(chǎn)蛋量大幅下降，肉鴨感染表現(xiàn)共濟失調(diào)、癱瘓、雛鴨發(fā)生神經(jīng)癥狀甚至死亡[1,2]。DTMUV為單股正鏈RNA病毒，長約10990nt，編碼一個多聚蛋白，3個結(jié)構(gòu)蛋白和7個非結(jié)構(gòu)蛋白，經(jīng)研究人員鑒定DTMUV屬于黃病毒科、黃病毒屬[3,4]。產(chǎn)蛋期櫻桃谷種鴨感染鴨坦布蘇病毒的癥狀往往與禽副黏病毒、禽流感等癥狀相似[5]，一般養(yǎng)殖戶缺乏防治經(jīng)驗。

1 方法

1.1 發(fā)病情況 豐縣某鴨場，據(jù)養(yǎng)殖戶介紹，種鴨最初采食突然下降，產(chǎn)蛋量急劇下降。排綠色稀糞，大群鴨站立不穩(wěn)，行走時雙腳叉開，關(guān)部震顫，有癱瘓癥狀，每天有3～5只病鴨死亡。鴨場免疫過鴨瘟、禽流感、新流疫苗，沒有免疫過鴨坦布蘇病毒病疫苗。

1.2 癥狀及病變觀察 對送檢的發(fā)病種鴨先進(jìn)行詳細(xì)的精神、體表觀察，剖檢檢察內(nèi)臟器官的病理變化。

1.3 病理組織學(xué)檢查 取發(fā)病種鴨各組織器官，剪成小塊，浸泡于10%的福爾馬林中固定，48h后包埋制作石蠟切片，并進(jìn)行HE染色、鏡檢。

1.4 病毒分離鑒定 取發(fā)病鴨的脾臟、卵泡膜、腦和肝臟等組織料進(jìn)行研磨，按1:5～10的比例加入滅菌PBS緩沖液后過濾除菌，勻漿后反復(fù)凍融3次，8000g/min離心5min，吸取上清液，用0.22μm一次性濾器過濾除菌后將濾液裝于凍存管中備用。將凍存管中備用濾液以0.1ml/胚，經(jīng)尿囊腔或絨毛尿囊膜途徑平行接種于3枚9～11日齡鴨胚、鴨胚成纖維細(xì)胞單層培養(yǎng)物分離毒37℃進(jìn)行孵育，每隔8h進(jìn)行觀察，棄掉24h以內(nèi)死亡胚，72h后將接種鴨胚放入4℃，1h后無菌收獲尿囊液。對分離病毒進(jìn)行血凝試驗。

1.5 RT-PCR鑒定 根據(jù)GenBank登錄的DTMUV(登錄號：KP096415.1)序列設(shè)計合成1對擴增E基因的引物F1、F2，序列如下：F1:5'-ATAATGGC AGAACCGAGACTTTGTTG-3'；F2:5'-GATCTTA CTGCCAGGAAGACCAAGATTC-3'；將收取的尿囊液進(jìn)行病毒總RNA提取，利用引物F1/F2通過RT-PCR擴增E基因，預(yù)擴增片段為1500bp。

2 結(jié)果

2.1 癥狀觀察 患病鴨表現(xiàn)出腳麻痹、頭頸歪斜等 運動機能失調(diào)的神經(jīng)癥狀，排便質(zhì)地稀松呈草綠色，鴨群整體產(chǎn)蛋量急劇下降，所產(chǎn)蛋蛋殼薄且無光澤、蛋的重量減小。病鴨初期出現(xiàn)食欲不振、精神沉郁、體溫升高、腹瀉等癥狀，后期表現(xiàn)為頭頸扭曲、個別翻滾、行走不穩(wěn)、癱瘓、共濟失調(diào)等神經(jīng)癥狀。蛋鴨發(fā)病后產(chǎn)蛋量驟然下降，雛出現(xiàn)死亡。

2.2 剖檢變化 病變主要集中在卵巢，表現(xiàn)為卵泡出血、萎縮、液化、壞死，嚴(yán)重進(jìn)卵泡漠出血，卵黃變稀、卵泡破裂，導(dǎo)致卵黃性腹膜炎；輸卵管有滲出，并輕度萎縮；心肌有白色壞死班點，心包有黃色積液；腦水腫，腦膜充血、出血；脾臟腫大，呈大理石樣；氣囊膜增厚、渾濁，表面有黃色粘液和結(jié)節(jié)；腺胃、腸黏膜出血。

2.3 病理組織學(xué)檢測 采用發(fā)病種鴨組織器官制作石蠟切片，進(jìn)行HE染色鏡檢發(fā)現(xiàn)，卵泡內(nèi)有大量紅細(xì)胞，同時有淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞浸潤；心肌內(nèi)散在大量的炎性細(xì)胞，心肌纖維壞死；表現(xiàn)神經(jīng)癥狀的病鴨大腦皮質(zhì)部局部壞死，腦膜充血水腫，小腦壞死并伴有神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞增生；肝臟間質(zhì)充滿嗜酸性粒細(xì)胞，有淋巴細(xì)胞浸潤。

2.4 病毒分離與RT-PC鑒定結(jié)果 將處理過的病料接種鴨胚，與正常鴨胚比較接毒鴨胚發(fā)育遲緩。無菌收獲鴨胚尿囊液。可見胚體在頭、頸、背部有明顯出血點，對分離病毒進(jìn)行血凝試驗，無血凝活性。經(jīng)RT-PCR特異性檢測為陽性。片段大小為1500bp，測序結(jié)果表明擴增基因序列來自于DTMUV基因組。

3 診斷結(jié)果

通過綜合診斷，證明該鴨場感染坦布蘇病毒。鴨坦布蘇病毒可自然感染多種品種的蛋鴨、肉種鴨和野鴨等。

4 防制措施

傳染病的控制要以防為主、防治結(jié)合。傳染病傳播的三個基本環(huán)節(jié)是傳染源、傳播途徑、易感動物三個重要環(huán)節(jié)。因此對傳染病進(jìn)行防控也要通過這三個環(huán)節(jié)入手，即消滅傳染源、切斷傳播途徑、保護(hù)易感動物。

4.1 消滅傳染染源 病鴨場的動物尸體一定要生物無害化處理，病鴨接觸過的地方一定要全面消毒，消除其作為傳染源的可能性。使用板藍(lán)根、金銀花等清熱解毒的中草藥等進(jìn)行對癥治療，配以頭孢抗菌素、舒巴坦鈉等抗菌消炎藥防繼發(fā)感染。

4.2 切斷傳播途徑 該病預(yù)防最主要的防鴨坦布蘇病毒病的方式就是加強飼養(yǎng)管理人員對該病毒的認(rèn)識做到提前預(yù)防，搞好飼養(yǎng)人員的生活安排，管理人員與生產(chǎn)人員必須隔離。用衛(wèi)可和聚維酮碘輪換使用對飼養(yǎng)環(huán)境、飼養(yǎng)器具、運輸車輛進(jìn)行嚴(yán)格消毒，杜絕發(fā)病鴨場與健康鴨場間的接觸。對出現(xiàn)典型癥狀的病鴨進(jìn)行隔離，分開圈養(yǎng)。該病的流行病學(xué)特征提示病毒可經(jīng)蚊子等媒介傳播、種蛋垂直傳播，帶毒水禽在不同地區(qū)調(diào)運傳播[6,7]。因此，鴨場要注意避免蚊蟲叮咬以及野鳥與鴨的密切接觸。集蛋筐不可交互使用，對從外面進(jìn)入鴨場的集蛋筐應(yīng)消毒處理后再用，嚴(yán)防帶入病毒。疫病流行期間，做好封棟、封場工作。

4.3 保護(hù)易感動物 預(yù)防免疫接種是對本病的防控關(guān)鍵措施。從該鴨場防疫情況看，由于該養(yǎng)殖場沒有對鴨預(yù)防接種而導(dǎo)致發(fā)病。目前市場上有鴨坦布蘇病活疫苗與滅活疫苗，通過檢測病毒中和抗體，開產(chǎn)前免疫活疫苗優(yōu)于滅活疫苗。首次免疫在5～9日齡進(jìn)行，采用頸部皮下注射免疫途徑，兩周后加強免疫一次，開產(chǎn)前2～4周進(jìn)行第三次免疫，發(fā)病期采用弱毒疫苗對鴨群中未發(fā)病鴨進(jìn)行緊急接種。

5 討論與小結(jié)

（1）該病一年四季均能發(fā)生，尤其是秋冬季節(jié)發(fā)病嚴(yán)重。飼養(yǎng)管不良、氣候突變等也能促使該病的發(fā)生[6,7]。在生產(chǎn)實踐中，感染鴨坦布蘇病毒的種(蛋)鴨臨床表現(xiàn)與某些亞型的禽流感、鴨瘟等病毒感染很相似。病毒分離鑒定是傳統(tǒng)的實驗室檢測方法，取病鴨的腦、卵巢、脾臟和肝臟組織作，接種接種SPF雞胚、鴨胚成纖維細(xì)胞單層培養(yǎng)物分離毒。對分離病毒進(jìn)行血凝試驗，無血凝活性。該病毒初次分離成功率低，初次接種禽胚沒有出現(xiàn)病變和死亡的要收集尿囊液繼續(xù)盲傳3代。（2）結(jié)合流行情況、臨床癥狀、病理變化等，確診需要病毒分禽鑒定及PCR檢測，以免誤診。該病例通過RT-PCR檢測，結(jié)果顯示在1500bp處出現(xiàn)一條與陽性對照大小一致的電泳條帶，樣品PCR產(chǎn)物測序分析顯示該核酸序列來源于DTMUV基因組，表明該鴨場感染了鴨坦布蘇病毒。（3）預(yù)防首先要制定和執(zhí)行切實可行的生物安全控制措施，加強飼養(yǎng)管理，減少應(yīng)激因素，定期消毒；平時做好免疫預(yù)防；鴨群可適當(dāng)添加多維及中藥如清溫敗毒散、黃芪多糖、雙黃連等進(jìn)行藥物預(yù)防，輕瀉肝火、健脾類的中藥制劑在本病的防控上也有積極作用。發(fā)病時及時行緊急免疫接種，采取對癥治療，用抗生素防止繼發(fā)感染。