王雪竹，加爾肯，劉建華，胡 月，孫佳琪，王旭蕾，車傳忠，鄭學(xué)功，賈欽瑞，祖力亞江·阿不都熱合曼，冉多良

（新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830052）

馬皰疹病毒l 型（Equineherpes virus 1，EHV-l）引起馬屬動(dòng)物呼吸系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、孕馬流產(chǎn)、新生馬駒死亡等疾病[1-2]。1933 年Dimock 等首次在美國肯塔基州發(fā)現(xiàn)該病毒，至今已在50 多個(gè)國家和地區(qū)馬群中流行，EHV-1 陽性率呈不斷上升趨勢[3]，通常在30%以上，最高可達(dá)90%[4]。馬動(dòng)脈炎病毒（Equine arteritis virus，EAV）引起馬屬動(dòng)物呼吸道和生殖道疾病，病馬表現(xiàn)發(fā)熱，流膿性黏液性鼻液，眼框、軀干及生殖道水腫，妊娠母馬流產(chǎn)[5-6]。1957年Doll 等于美國俄亥俄州的馬流產(chǎn)胎兒中首次分離到該病毒（Bucyrus 株）[3]，我國西北、西南、東北及華南地區(qū)均有該病度的流行[7-8]。馬流感病毒（Equine influenza virus，EIV）是引起馬屬動(dòng)物重要的呼吸道疾病之一，嚴(yán)重時(shí)引起孕馬流產(chǎn)，各年齡、品種和性別的馬均易感[9]，自1956 年Sovinova 等從布拉格分離到甲型流感病毒后，馬流感在歐洲、北美及英國等國家不斷暴發(fā)[10]。近年，該病在我國東北、西北地區(qū)及日本、蒙古、印度等周邊國家均有報(bào)道。這3種馬傳染病在全球范圍呈地方流行性暴發(fā)，給馬業(yè)帶來重大經(jīng)濟(jì)損失[11]，嚴(yán)重的阻礙了我國馬業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。為系統(tǒng)的了解新疆烏魯木齊地區(qū)這3 種馬病的流行現(xiàn)狀，本研究采集該地區(qū)具有代表性馬場的676 份馬血清樣品，進(jìn)行了EHV-1、EAV、EIV 的血清流行病學(xué)調(diào)查，并分析其流行特點(diǎn)和感染因素，為該地區(qū)這3 種馬病的有效防控提供數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 血清、抗原及樣品EHV-1陰性、陽性血清、gD抗原由新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院傳染病實(shí)驗(yàn)室保存；甲型流感病毒感染馬陽性血清、陰性血清、馬流感抗原由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所提供。

本實(shí)驗(yàn)室于2019 年從新疆烏魯木齊市新市區(qū)、高新區(qū)、米東區(qū)、南山景區(qū)、烏魯木齊縣、達(dá)坂城5個(gè)地區(qū)，采用多階段隨機(jī)抽樣法[12]，采集無EHV-1、EAV、EIV 疫苗接種史的馬血清樣品共676 份，分離血清-80 ℃保存。

1.2 主要試劑TMB 顯色液購自北京索萊寶科技有限公司；兔抗馬IgG-HRP 購自Bethyl 公司；馬動(dòng)脈炎病毒ELISA 抗體檢測試劑盒INGEZIM-ARTERITIS購自西班牙雅雷薩INGENASA 公司；ELISA 酶標(biāo)板購自NUNC 公司。

1.3 EHV-1、EAV、EIV 的血清學(xué)檢測方法采用新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院傳染病實(shí)驗(yàn)室建立的間接ELISA 方法檢測樣品中EHV-1 的抗體[13]；結(jié)果判定，樣品OD450nm值>0.319 判為陽性，OD450nm值 0.319 判為陰性；采用INGEZIM-ARTERITIS 試劑盒（間接ELISA 法）檢測樣品中EAV 的抗體；采用中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所建立的血凝抑制試驗(yàn)（HI）檢測樣品中EIV 的HI 抗體[14]。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析采用統(tǒng)計(jì)分析軟件SPSS 20.0對烏魯木齊不同地區(qū)、年齡、性別及品種馬的EHV-1、EAV 和EIV 抗體陽性率進(jìn)行卡方分析。

2 結(jié) 果

2.1 不同地區(qū)馬EHV-1、EAV、EIV 血清抗體檢測結(jié)果對2019 年新疆烏魯木齊地區(qū)采集的676份馬血清樣品進(jìn)行3種馬病毒抗體的檢測。結(jié)果顯示，EHV-1、EAV、EIV 及EHV-1+EIV 平均抗體陽性率分別為39.35%（266/676）、 0、 40.53%（274/676）、 24.85%（167/676）；其中，南山景區(qū)、烏魯木齊縣、達(dá)坂城區(qū)馬EHV-1 的抗體陽性率分別為44.44%（72/162）、57.89%（88/152）、66.67%（52/78），顯著高于新市區(qū)16.00%（32/200） 和米東區(qū)26.19%（22/84）（p<0.05）；米東區(qū)、南山景區(qū)、烏魯木齊縣、達(dá)坂城區(qū)馬EIV 的抗體陽性率分別為58.00%（58/84）、57.00%（57/162）、47.37%（95/152）、41.03%（32/78），顯著高于新市區(qū)16.00%（32/200）（p<0.05）；新市區(qū)、米東區(qū)馬EHV-1+EIV 抗體陽性率分別為11.00%（22/200）、19.05%（16/84），顯著低于其它3 個(gè)地區(qū)（p<0.05）（表1）。表明馬群感染EHV-1、EIV 存在地區(qū)差異，縣城（南山景區(qū)、烏魯木齊縣、達(dá)坂城區(qū)）與市區(qū)馬群（新市區(qū)、米東區(qū)）抗體陽性率差異顯著。

表1 烏魯木齊不同區(qū)域馬血清抗體檢測結(jié)果Table 1 Antibody test results of horse serum samples in different regions of Urumuqi

2.2 不同年齡馬EHV-1、EIV 血清抗體檢測結(jié)果

對676份不同年齡的馬血清抗體水平進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果顯示，不同年齡馬EHV-1 抗體陽性率在26.05%～50%，EIV抗體陽性率在33.61%～77.50%，EHV-1+EIV抗體陽性率在14.29%～32.50%。其中1 歲以內(nèi)馬駒EHV-1、EIV 及EHV-1EIV 抗體陽性率最高，分別為50.00%（20/40）、77.50%（31/40）、32.50%（13/40），顯著高于其它年齡的馬（p<0.05）；10 歲以上馬EHV-1、EIV 及EHV-1+EIV 抗體陽性率最低，分別為26.05%（31/119）、33.61%（40/119）、14.29%（17/119）（表2）。表明馬群感染EHV-1 和EIV 存在年齡差異，1 歲以內(nèi)馬駒與其它年齡馬抗體陽性率差異顯著。

表2 不同年齡馬血清抗體檢測結(jié)果Table 2 Antibody test result of horse serum at different ages

2.3 不同性別馬EHV-1、EIV血清抗體檢測結(jié)果對676份不同性別的馬血清抗體水平統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示，母馬EHV-1、EIV 的抗體陽性率分別為54.21%（58/107）、67.29%（72/107），顯著高于公馬36.56%（208/569）、35.50%（202/569）（p<0.05）；母馬EHV-1+EIV抗體陽性率為14.02%（15/107），顯著低于公馬26.89%（153/569）（表3）。表明馬感染EHV-1和EIV 存在性別差異，母馬與公馬EHV-1、EIV抗體陽性率差異顯著。

2.4 不同品種馬EHV-1、EIV 血清抗體檢測結(jié)果

對676 份不同品種的馬血清抗體水平統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示，哈薩克馬EHV-1、EIV 及EHV-1+EIV 抗體陽性率最高，分別為54.95%（200/364）、54.67%（199/364）、35.71%（130/364），顯著高于其他品種的馬（p<0.05）；除混血馬外其余品種的馬均有不同程度的EIV 感染；其中伊犁馬EIV 和EHV-1+EIV 抗體陽性率最低，均為9.09%（2/22），顯著低于其它品種的馬（p<0.05）；混血馬無EIV 感染，其余品種的馬均有不同程度的EIV 感染（表4）。表明馬感染EHV-1 存在品種差異，本土馬（哈薩克馬、伊犁馬）與純血馬、混血馬抗體陽性率差異顯著。

表3 不同性別的馬血清抗體檢測結(jié)果Table 3 Antibody test result of horse serum for different genders

表4 不同品種的馬血清抗體檢測結(jié)果Table 4 Serum antibody test results of different breeds of horses

3 討 論

馬業(yè)是一個(gè)龐大且經(jīng)濟(jì)多樣化的行業(yè)。隨著近幾年賽馬業(yè)的國際化交流日益增多，馬及其產(chǎn)品的流動(dòng)也越來越頻繁，據(jù)聯(lián)合國糧食及農(nóng)業(yè)組織（FAO）統(tǒng)計(jì)，2017 年底全球180 個(gè)國家及地區(qū)養(yǎng)馬總數(shù)達(dá)6056.66 萬匹[15]；2018 年底，新疆馬存欄量73萬匹，居全國之首[16]。而近年來EHV-1、EAV 和EIV 的傳播范圍和速度也在不斷的擴(kuò)大和加快，嚴(yán)重威脅著我國馬業(yè)的健康發(fā)展[17]。

經(jīng)本實(shí)驗(yàn)室統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，采集的676 份馬血清樣品中，未檢測到EAV 抗體；EHV-1、EIV 及EHV-1+EIV 抗體陽性率分別為39.35%（266/676）、40.53%（274/676）、24.85%（168/676），均高于2016 年沙燕等檢測新疆伊犁地區(qū)馬的相應(yīng)抗體陽性率[18]：15.16%（42/277）、24.19%（67/277）、3.61%（10/277）。

烏魯木齊地區(qū)馬存在不同程度的EHV-1 和EIV感染，且流行差異顯著，其中縣城馬的抗體陽性率顯著高于市區(qū)馬。這可能與不同地區(qū)馬場的飼養(yǎng)規(guī)模、管理水平及環(huán)境條件的不同有關(guān)。市區(qū)馬多為規(guī)模化養(yǎng)殖，飼養(yǎng)管理水平相對校高，環(huán)境條件較好，而縣城馬則偏多于散養(yǎng)。表明散養(yǎng)馬比規(guī)模化養(yǎng)殖馬更易感染EHV-1 和EIV，良好的飼養(yǎng)環(huán)境更有利于這2 種馬病的防控[19]，應(yīng)當(dāng)加強(qiáng)和改善縣城地區(qū)對散養(yǎng)馬的飼養(yǎng)管理水平和飼養(yǎng)條件，并根據(jù)這兩種傳染病的疫苗接種特性及免疫周期的不同，因地制宜的制定合理的免疫程序。

不同年齡的馬均可感染EHV-1 和EIV，其中1歲以內(nèi)的馬駒EHV-1、EIV 抗體陽性率最高，與其他研究結(jié)果一致[20-21]。這可能與其體內(nèi)的母源抗體伴隨馬駒斷奶，母源抗體消失有關(guān)。1 歲以內(nèi)馬駒更易感EHV-1、EIV，應(yīng)當(dāng)重視和加強(qiáng)對其的飼養(yǎng)管理和免疫接種工作，對易感幼駒實(shí)時(shí)監(jiān)控，適當(dāng)增強(qiáng)其機(jī)體抵抗力。

不同性別的馬均有EHV-1 和EIV 感染，母馬EHV-1、EIV 抗體陽性率顯著高于公馬。表明母馬比公馬更易于感染這2 種病，可根據(jù)不同性別的馬，制定不同的免疫程序，特別是孕馬，對于抗體陽性率較低的母馬，要定期對其進(jìn)行免疫監(jiān)測并補(bǔ)種疫苗，避免出現(xiàn)流產(chǎn)或死胎等現(xiàn)象。不同品種的馬均存在EHV-1 感染，其中本土品種哈薩克馬EHV-1、EIV及EHV-1+EIV抗體陽性率顯著高于純血馬和混血馬；除混血馬外其余品種的馬均有不同程度的EIV 感染。這可能與不同品種馬的個(gè)體差異有關(guān)，地區(qū)間引進(jìn)不同來源和品種的馬，決定該地區(qū)EHV-1和EIV的流行不同[22]。本土馬比純血馬和混血馬易于感染這2種病，應(yīng)當(dāng)引起重視，并加強(qiáng)對本土馬的免疫監(jiān)控和飼養(yǎng)管理，及出入境馬的EHV-1監(jiān)測工作。

研究結(jié)果表明，新疆烏魯木齊地區(qū)馬存在不同程度的EHV-1、EIV 感染，不同地區(qū)、年齡、性別及品種的馬EHV-1、EIV 感染率差異顯著，應(yīng)當(dāng)引起重視，并加強(qiáng)和完善各馬場的飼養(yǎng)管理和免疫監(jiān)控。通過血清流行病學(xué)調(diào)查，本研究為該地區(qū)這3種馬病的研究和防控提供數(shù)據(jù)參考，對促進(jìn)新疆馬產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展具有重要意義。