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        四川省生豬屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測實(shí)驗(yàn)室建設(shè)及生物安全技術(shù)要求

        2020-12-30 03:42:05
        四川畜牧獸醫(yī) 2020年5期
        關(guān)鍵詞:防護(hù)用品注射器耗材

        1 檢測實(shí)驗(yàn)室建設(shè)要求

        1.1 實(shí)驗(yàn)室布局 遠(yuǎn)離生產(chǎn)區(qū),處于相對封閉區(qū)域。實(shí)驗(yàn)室面積需滿足工作需要,原則上不低于30 m2,至少包括獨(dú)立的前處理室和檢測室。前處理室面積原則上不低于20 m2,檢測室面積原則上不低于10 m2。前處理室應(yīng)分為樣品處理區(qū)、配液區(qū)等,嚴(yán)格分區(qū)操作。

        1.2 主要儀器設(shè)備及耗材配置

        1.2.1 前處理室主要儀器設(shè)備 配置離心機(jī)、高壓滅菌鍋、渦旋振蕩器、水浴鍋(金屬?。?、移動(dòng)紫外燈、移液器及其配套吸頭(樣品處理區(qū)和配液區(qū)各一套移液器,不能混用),配備冷藏冷凍冰箱(存放檢測試劑、檢測樣品、滅菌后廢棄物)、儲(chǔ)物柜(存放EP管、PCR管、槍頭等耗材)、垃圾桶2個(gè)(1個(gè)配黑色垃圾袋,用于盛放普通垃圾;1個(gè)配黃色廢棄物專用垃圾袋,用于盛放廢棄物)。

        1.2.2 檢測室儀器設(shè)備 熒光定量PCR 儀或其他檢測設(shè)備。

        1.2.3 實(shí)驗(yàn)耗材 采血器(或注射器)、真空采血管(EDTA 抗凝劑)、1.5 mL EP 管及其管架、PCR八聯(lián)管(與熒光PCR 儀配套)及其管架、剪刀、鑷子、搪瓷托盤、酒精燈等。

        1.2.4 其他器材 實(shí)驗(yàn)臺(tái)、操作椅、試劑架、器皿櫥等。

        1.2.5 個(gè)人防護(hù)用品 實(shí)驗(yàn)服、一次性乳膠手套、一次性口罩、一次性鞋套。

        1.3 實(shí)驗(yàn)室檢測人員 屠宰企業(yè)應(yīng)配備專職檢測技術(shù)人員,并接受實(shí)驗(yàn)室分子生物學(xué)檢測技術(shù)及生物安全相關(guān)知識培訓(xùn),熟悉非洲豬瘟檢測要求。

        2 檢測實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范

        2.1 樣品采集 生豬屠宰企業(yè)應(yīng)安排專人負(fù)責(zé)樣品采集,并填好采樣記錄表。樣品為生豬抗凝血(5 mL,0.5%EDTA 抗凝,不能使用肝素鈉作為抗凝劑)或全血樣品。

        2.2 樣品保存 樣品采集后,按要求進(jìn)行混血,混血待檢樣品需在60 ℃下進(jìn)行30 min 的滅活處理,在12 h 內(nèi)檢測的待檢樣品應(yīng)在冰箱冷藏(4 ℃)保存,超過12 h 不能檢測的樣品和留樣需冷凍保存。留樣應(yīng)至少保存3個(gè)月,以備復(fù)查。

        樣品需轉(zhuǎn)運(yùn)的,應(yīng)按農(nóng)業(yè)農(nóng)村部《高致病性動(dòng)物病原微生物菌(毒)或者樣本運(yùn)輸包裝規(guī)范》要求進(jìn)行包裝,并由專人將樣品送至實(shí)驗(yàn)室,禁止使用公共交通工具運(yùn)送。

        2.3 樣品檢測

        2.3.1 嚴(yán)格按照試劑說明書的操作步驟進(jìn)行檢測。

        2.3.2 采集的血液樣品,可按照生豬批次(車次)或一定的生豬數(shù)量進(jìn)行混樣,具體混樣數(shù)量根據(jù)所使用的檢測試劑盒的技術(shù)指標(biāo)科學(xué)確定。

        2.3.3 待檢血樣必須充分混勻,使用經(jīng)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部批準(zhǔn)或中國動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心對比符合要求的檢測試劑盒進(jìn)行檢測。

        2.3.4 熟悉操作,縮短檢測過程,以減少各種有害因素對核酸的破壞。

        2.3.5 所有試劑開蓋前都應(yīng)先瞬時(shí)離心,避免液體飛濺;若液體不小心濺到手套或桌面上,應(yīng)立刻更換手套并清潔桌面。

        2.3.6 樣品處理、配液、擴(kuò)增嚴(yán)格分區(qū)操作,儀器、耗材等嚴(yán)禁交叉混用。

        2.3.7 加樣時(shí)嚴(yán)禁反復(fù)吹吸。

        2.3.8 熒光探針應(yīng)避光保存,反應(yīng)液現(xiàn)配現(xiàn)用,加入核酸后應(yīng)盡快上機(jī)。

        2.3.9 不要在熒光定量PCR 管蓋的采光部位做任何標(biāo)記。

        2.4 原始記錄 檢測完成后應(yīng)填寫并保存相關(guān)檢測原始記錄,檢測原始記錄、PCR圖至少保存2年。

        2.5 檢測報(bào)告 根據(jù)《關(guān)于全面開展生豬屠宰環(huán)節(jié)非洲豬瘟檢測工作有關(guān)具體要求的通知》(川動(dòng)監(jiān)〔2019〕5號)要求,屠宰企業(yè)檢測結(jié)果應(yīng)規(guī)范出具《檢測報(bào)告》,載明對應(yīng)的檢疫合格證明編號、檢測方法、檢測日期、檢測結(jié)果。檢測報(bào)告必須經(jīng)由報(bào)告編制人、駐場官方獸醫(yī)和批準(zhǔn)人(場點(diǎn)負(fù)責(zé)人)簽字確認(rèn),加蓋屠宰企業(yè)公章方為有效。檢測報(bào)告一式兩份,一份交駐場官方獸醫(yī)存檔,一份為屠宰企業(yè)自行留存,保存期至少2年。

        2.6 結(jié)果處理

        2.6.1 檢測結(jié)果為陰性,則同批生豬產(chǎn)品可以上市銷售。

        2.6.2 檢測結(jié)果為陽性,應(yīng)立即停止生產(chǎn),將檢測結(jié)果報(bào)告駐場官方獸醫(yī),并及時(shí)將陽性樣品送所在縣級動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,待復(fù)核后再做處理。復(fù)核為陽性的按照《非洲豬瘟疫情應(yīng)急實(shí)施方案(2020年版)》的規(guī)定進(jìn)行應(yīng)急處置。

        3 檢測實(shí)驗(yàn)室生物安全要求

        3.1 采樣生物安全

        3.1.1 正確穿戴好口罩、手套、鞋套、實(shí)驗(yàn)服等個(gè)人防護(hù)用品。

        3.1.2 盡可能使用物理設(shè)備保定動(dòng)物,既保證人的安全,又保證樣品質(zhì)量。

        3.1.3 一頭豬一個(gè)注射器或一個(gè)真空采血管,避免樣品交叉污染。

        3.1.4 采樣結(jié)束,采樣人員脫去個(gè)人防護(hù)用品,并對采樣環(huán)境進(jìn)行清潔消毒。

        3.2 檢測過程中的生物安全

        3.2.1 檢查樣品外包裝有無損壞,并對外包裝進(jìn)行消毒。

        3.2.2 注射器使用完后必須放置于專用廢棄盒中待高壓滅菌處理,高壓滅菌前不得拆卸針頭和注射器。

        3.2.3 盡量使用帶濾芯的移液器吸頭,不用移液器混勻液體。

        3.2.4 對于管壁上沾有懸液的離心管,應(yīng)短暫離心后再打開管蓋。

        3.2.5 核酸提取完成后應(yīng)先更換手套再進(jìn)行配液。

        3.2.6 配液區(qū)和核酸提取區(qū)嚴(yán)格分開,儀器、耗材等嚴(yán)禁交叉混用。

        3.3 檢測后實(shí)驗(yàn)室的消毒

        3.3.1 實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面、桌椅、櫥柜、門把手、水龍頭等物品的表面可用有效氯濃度為0.1%~0.5%的消毒劑噴灑,作用30 min后用清水擦拭。

        3.3.2 實(shí)驗(yàn)室地面可用有效氯濃度為0.1%~0.5%的消毒劑噴霧或拖地,各實(shí)驗(yàn)室拖把應(yīng)專用,不得混用。

        3.3.3 廢液缸、剪刀、鑷子等可回收物,用消毒液浸泡30 min后用清水清洗,可高溫滅菌的用牛皮紙等包好后高壓(121 ℃,20 min)滅菌備用。

        3.3.4 實(shí)驗(yàn)服等可重復(fù)利用的棉織制品,可經(jīng)121 ℃、20 min高壓滅菌、清洗后使用;也可用氯化物、酚化物等消毒劑浸泡30 min,清水清洗后晾干備用。

        3.3.5 離心機(jī)、PCR 儀等儀器設(shè)備的金屬部件使用75%乙醇擦拭消毒,非金屬部件使用含2.3%有效氯的次氯酸鹽消毒30 min,然后清水洗凈或擦拭。

        3.4 廢棄物處理

        3.4.1 以下廢棄物需進(jìn)行高壓滅菌處理:超過留存期的所有樣品;使用后的槍頭、EP 管、采血管等;一次性個(gè)人防護(hù)用品,如口罩、手套、鞋套等;注射器針頭等銳器使用后應(yīng)直接棄置于耐高壓、防穿透的容器內(nèi)。將上述廢棄物放入醫(yī)療廢物袋,并在廢物袋的中心位置放置高壓指示帶或化學(xué)指示卡,袋口應(yīng)稍微扎緊(不能太緊),袋口和外表面噴灑消毒劑,121 ℃高壓滅菌處理20 min,然后將滅菌后的廢棄物存放在指定冰柜中,定期交由有資質(zhì)的無害化處理企業(yè)進(jìn)行無害化處理。

        3.4.2 使用后的PCR 反應(yīng)管(內(nèi)含反應(yīng)產(chǎn)物)直接棄置于醫(yī)療廢物袋中,禁止開蓋(以免造成氣溶膠污染),交由有資質(zhì)的無害化處理企業(yè)進(jìn)行無害化處理。

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