王曉娜

（沈陽沈化院測(cè)試技術(shù)有限公司，遼寧沈陽 110000）

1 嚙齒類動(dòng)物骨髓涂片的過程

1.1 骨髓標(biāo)本的采集

（1）在載玻片上注明動(dòng)物號(hào)，在其一端滴一滴（約50μl）的胎牛血清，用于稀釋骨髓。

（2）將試驗(yàn)動(dòng)物充分放血后，立即剪去其胸骨或者股骨，剃去多余的肌肉并處理好血污。

（3）當(dāng)取胸骨骨髓時(shí)；取第一節(jié)或者第二節(jié)胸骨，擠出骨髓，點(diǎn)在已經(jīng)滴了胎牛血清的載玻片上，充分混勻后進(jìn)行推片。

（4）當(dāng)取股骨骨髓時(shí)：取出股骨內(nèi)骨髓，點(diǎn)在已經(jīng)滴了胎牛血清的載玻片上，充分混勻后進(jìn)行推片。

1.2 制片

常規(guī)推片：每次根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求推相應(yīng)張數(shù)，涂片要迅速，以防止其凝固。

1.3 染色

選取一張推片良好的進(jìn)行染色。將玻片置于染色架上，滴加染液3～5滴（約0.5～1.0ml），使其迅速蓋滿血膜。約1min后，滴加緩沖液5～10滴（1.0～2.0ml），輕輕搖動(dòng)玻片或者對(duì)準(zhǔn)玻片吹氣，與染液充分混勻。1h后用水沖去染液，待干。

注意事項(xiàng)：切勿將染液混入水，以免產(chǎn)生沉淀。染色時(shí)間視染料濃度、室溫及其他一些條件有所增減。染色過淺的時(shí)候可復(fù)染，染色過深，可用甲醇脫色后進(jìn)行復(fù)染。

1.4 鏡檢

（1）用低倍顯微鏡判斷骨髓增生深度，估計(jì)巨核細(xì)胞系統(tǒng)增生情況，觀察涂片邊緣、尾部、骨髓小粒周圍，有無體積較大或者成堆分布的異常細(xì)胞。

（2）選擇細(xì)胞分布均勻、染色良好的片段，在油鏡下觀察500個(gè)細(xì)胞，按照細(xì)胞種類，發(fā)育的階段分別計(jì)數(shù)，并計(jì)算它們各自的百分率。然后計(jì)算出粒紅比例（各階段細(xì)胞百分率總和與各階段有核紅細(xì)胞百分率總和的比例）。

（3）需要時(shí)用骨髓直接作染色體分析，骨髓涂片或血液涂片作組織化學(xué)染色檢查，協(xié)助診斷或排除某些疾病。

2 大實(shí)驗(yàn)動(dòng)物骨髓涂片的過程

2.1 活體骨髓采集法

采集骨髓樣本之前，首先要計(jì)算好麻醉藥的量，以保證動(dòng)物的麻醉深度；將麻醉后的動(dòng)物放倒平臥后，在髂骨部位剃毛，充分消毒。操作者以左手拇指和食指將穿刺部位兩側(cè)皮膚按緊固定，右手持穿刺針與骨棘面垂直，旋刺入髂后上棘，達(dá)骨髓腔時(shí)有空松感，深度約為針尖達(dá)骨膜后再刺入1cm左右。拔出針芯，接10ml干燥注射器，輕輕負(fù)壓抽取，抽取骨髓液不超過0.3ml，立即置玻片上，并進(jìn)行涂片，拔出穿刺針，壓迫傷口，敷以消毒紗布。

2.2 解剖時(shí)骨髓采集法

將動(dòng)物充分放血后，立即剪取其胸骨或股骨，剃去多余肌肉并處理好血污，鋸開胸骨或股骨，擠出骨髓，點(diǎn)在載玻片一端（必要時(shí)用胎牛血清稀釋），其余步驟同嚙齒類動(dòng)物操作一致。

3 嚙齒類動(dòng)物及大實(shí)驗(yàn)動(dòng)物骨髓涂片的及意義

通過骨髓涂片可以分析骨髓中的細(xì)胞數(shù)目及其性質(zhì)，不僅可得出多種血液病的病變情況，而且能夠?qū)ρ杭膊〉男再|(zhì)進(jìn)行一定的鑒別診斷。骨髓作為動(dòng)物最重要的造血器官，多種血液病往往將導(dǎo)致血細(xì)胞發(fā)生數(shù)量與質(zhì)量的變化。血小板是由骨髓中的巨核細(xì)胞生成，通過對(duì)其各項(xiàng)參數(shù)分析也能夠間接反映出機(jī)體骨髓狀態(tài)，對(duì)血液病的診斷具有一定的指示意義，因此骨髓涂片檢查對(duì)動(dòng)物白血病、貧血、多發(fā)性骨髓病、原發(fā)性血小板減少性紫癜等的診斷及病情觀察都有決定性意義。此外，某些長(zhǎng)毒試驗(yàn)動(dòng)物在其骨髓中也可以發(fā)現(xiàn)瘤細(xì)胞（如肺癌、胃癌、前列腺癌等）；某些寄生蟲病（如瘧疾、黑熱病）可在其骨髓中找到寄生蟲，而且將骨髓涂片檢查與血常規(guī)測(cè)試結(jié)合，更提高了診斷的準(zhǔn)確性，這對(duì)于動(dòng)物試驗(yàn)有十分重要的意義。