周莉媛 ，陳斌，裴超信，邵靚，王強(qiáng)，車從成，丁夢(mèng)蝶

（1.四川省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，四川 成都 610041；2.四川省綿陽(yáng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，四川 綿陽(yáng) 621000；3.四川省三臺(tái)縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，四川 三臺(tái) 621100）

牛結(jié)節(jié)性皮膚病又稱牛結(jié)節(jié)疹、牛結(jié)節(jié)性皮炎，是由痘病毒科、脊椎動(dòng)物痘病毒亞科、山羊痘病毒屬的牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒（LSDV）引起的一種急性、亞急性傳染病。牛是LSDV的天然宿主，各年齡和品種的牛均易感，發(fā)病率在2%～45%，死亡率一般在10%以下。節(jié)肢動(dòng)物的機(jī)械性間接傳播被認(rèn)為是LSDV傳播的主要途徑。病牛臨床特征是發(fā)熱、消瘦，淋巴結(jié)腫大，皮膚水腫，局部形成堅(jiān)硬的結(jié)節(jié)或潰瘍，其皮張鞣制后具有凹陷或孔洞，利用價(jià)值大大降低。

1 臨床癥狀

患牛頭、頸、軀干、四肢皮膚有散在的直徑約1～2 cm的硬結(jié)節(jié)，結(jié)節(jié)處皮溫較高，觸之牛痛感明顯。病牛精神、食欲無(wú)明顯變化。

2 實(shí)驗(yàn)室診斷

2.1 實(shí)驗(yàn)材料 采集病牛血樣及口、鼻拭子和結(jié)節(jié)創(chuàng)口拭子。

檢測(cè)試劑：牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)試劑盒。

2.2 病毒DNA提取 樣品處理后使用核酸提取試劑盒（磁珠法）和核酸自動(dòng)提取儀進(jìn)行核酸提取。

2.3 實(shí)時(shí)熒光PCR反應(yīng) 嚴(yán)格按照檢測(cè)試劑說(shuō)明書(shū)操作。反應(yīng)體系：無(wú)菌無(wú)核酸酶水5.9 μL，PCR 反應(yīng)液10 μL，熒光探針2.1 μL，模板DNA 2 μL，總反應(yīng)體積20 μL。反應(yīng)條件：95 ℃2 min，循環(huán)95 ℃5 s，60 ℃35 s，共40次，每次循環(huán)的第二步（60 ℃ 35 s）收集熒光信號(hào)（報(bào)告基團(tuán)“FAM”，淬滅基團(tuán)“None”）。

2.4 結(jié)果判定 陽(yáng)性對(duì)照Ct 值≤30 并出現(xiàn)特定的擴(kuò)增曲線，陰性對(duì)照無(wú)Ct值并且無(wú)特定擴(kuò)增曲線，實(shí)驗(yàn)結(jié)果成立。被檢樣品Ct值≤36并出現(xiàn)特定的擴(kuò)增曲線，為牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒陽(yáng)性。被檢樣品均呈陽(yáng)性。

3 小結(jié)

牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒與山羊痘病毒、綿羊痘病毒同屬山羊痘病毒屬，三者基因組的同源性高，羊痘病毒屬的病毒可產(chǎn)生共同的中和抗體，故依賴血清學(xué)方法較難鑒別該屬病毒，常規(guī)檢測(cè)方法不能對(duì)早期發(fā)病動(dòng)物進(jìn)行快速準(zhǔn)確的診斷。采用實(shí)時(shí)熒光PCR 方法檢測(cè)牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒是既快速又準(zhǔn)確的檢測(cè)方法。

為防止該病擴(kuò)散，應(yīng)嚴(yán)格按照《牛結(jié)節(jié)性皮膚病防治技術(shù)規(guī)范》的要求撲殺病牛并做好無(wú)害化處理，同群牛進(jìn)行隔離，限制牛只、牛產(chǎn)品和飼料及相關(guān)用具的移動(dòng)，圈舍和隔離環(huán)境徹底消毒，做好蚊蟲(chóng)的消殺工作，同時(shí)對(duì)周邊養(yǎng)牛場(chǎng)（戶）開(kāi)展排查，限制周邊牛只移動(dòng)交易。必要時(shí)，?？刹捎蒙窖蚨灰呙纾ò凑丈窖虻? 倍劑量）緊急免疫。