河南省平頂山市第一人民醫(yī)院（467000）楊海

急性白血?。ˋL）是一種臨床常見的惡性血液學(xué)疾病，其發(fā)病率位居所有惡性血液系統(tǒng)疾病首位。隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的不斷發(fā)展，AL的診斷、治療亦取得了極大進(jìn)步，準(zhǔn)確了解患者分型對(duì)后續(xù)治療具有重要作用。MICM分型是目前被國(guó)際醫(yī)生廣泛認(rèn)可的一種分型方法，但該分型方法對(duì)醫(yī)療條件要求較高，許多單位并不具備檢測(cè)條件。細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢測(cè)是一種通過了解細(xì)胞比例、數(shù)量、結(jié)構(gòu)來判斷患者是否存在病變的檢測(cè)方式，其具有操作簡(jiǎn)便的有點(diǎn)[1][2]。此次研究分析了細(xì)胞形態(tài)學(xué)分型檢測(cè)在AL診斷中的應(yīng)用價(jià)值，已期為臨床診斷提供參考，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 此次研究納入對(duì)象為2016年6月～2019年6月在我院就診的92例AL患者，其中男性患者49例，女性患者43例，年齡4～72歲，平均年齡（38.15±4.31）歲。

納入及排除標(biāo)準(zhǔn)：符合AL臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)，無其他類型血液系統(tǒng)疾??；無嚴(yán)重免疫功能缺陷；無嚴(yán)重精神障礙；所有患者均了解研究?jī)?nèi)容且簽署知情同意書。該研究已獲得院倫理委員會(huì)許可。

1.2 研究方法

1.2.1 細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查 選取合適的骨髓涂片進(jìn)行瑞氏-姬姆薩染色，100倍油鏡下計(jì)數(shù)200個(gè)均勻分布的有核細(xì)胞，同時(shí)氧化物酶染色（POX）、過碘酸-雪夫反應(yīng)染色（PAS）、醋酸萘酚酯酶+氟化鈉抑制實(shí)驗(yàn)（NAE+NaF），計(jì)數(shù)陽(yáng)性率并觀察酶型，并按FAB標(biāo)準(zhǔn)分型。

1.2.2 免疫學(xué)檢查 采集1～2mL骨髓液（加入肝素抗凝），使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行測(cè)定（24h內(nèi)完成），按CD45/SSC設(shè)門分出幼稚細(xì)胞群和成熟細(xì)胞群，并選擇合適的單克隆抗體進(jìn)行免疫表型檢測(cè)和抗原表達(dá)情況，根據(jù)歐洲白血病免疫分類協(xié)作組（EGIL）積分標(biāo)準(zhǔn)確定類型。

1.2.3 染色體核型檢查 采集2～5mL骨髓液（加入肝素抗凝），按2×106/ml的密度將細(xì)胞接種于培養(yǎng)液中，過夜培養(yǎng)，于培養(yǎng)結(jié)束前1h加入秋水仙胺（終濃度為0.05ul/ml），離心收獲細(xì)胞，用固定液（甲醇和冰醋酸以3∶1的比例配置）固定3次，滴片，采用R顯帶法進(jìn)行分析，參照《人類細(xì)胞遺傳學(xué)國(guó)際命名體制（ISCN2013）》進(jìn)行核型描述。

1.2.4 分子生物學(xué)檢查 采集2～3mL骨髓液（加入肝素抗凝），加入等體積0.9%的NaCl溶液進(jìn)行稀釋，用淋巴細(xì)胞分離液分離單個(gè)核細(xì)胞，裂解細(xì)胞后提取總RNA，測(cè)定RNA濃度。并使用試劑盒獲取cDNA，然后進(jìn)行多重巢式PCR反應(yīng)，凝膠電泳后進(jìn)行結(jié)果分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件Excel和SPSS22.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，定性資料以n%表示，組間比較行χ2檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果

細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查共有71例患者確定為白血病亞型，確診率為77.17%；免疫學(xué)檢查共有73例患者確定白血病亞型，確診率為79.35%；細(xì)胞遺傳學(xué)診斷共有20例患者確診白血病亞型，確診率為21.74%；分子生物學(xué)診斷共有21例確定白血病亞型，確診率為22.83%。MICM聯(lián)合診斷則有90例患者確診，診斷準(zhǔn)確率為97.83%。MICM聯(lián)合診斷的準(zhǔn)確率顯著高于單獨(dú)細(xì)胞形態(tài)學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)和分子生物學(xué)診斷（P＜0.05），單獨(dú)細(xì)胞形態(tài)學(xué)、免疫學(xué)診斷準(zhǔn)確率均高于細(xì)胞遺傳學(xué)和分子生物學(xué)診斷（P＜0.05），但細(xì)胞形態(tài)學(xué)和免疫學(xué)診斷準(zhǔn)確率之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），細(xì)胞遺傳學(xué)和分子生物學(xué)診斷準(zhǔn)確率之間也沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。

3 討論

了解AL患者亞型是臨床治療的基礎(chǔ)，而隨著檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的不斷發(fā)展，形態(tài)學(xué)、免疫學(xué)、分子生物學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)等手段在AL分型診斷中發(fā)揮了重要作用，但受到試劑、儀器等因素影響，分子生物學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)檢測(cè)在醫(yī)院普及較為困難，目前許多三甲醫(yī)院仍不具備該種檢測(cè)手段。此次研究結(jié)果顯示，MICM聯(lián)合診斷仍是目前最為準(zhǔn)確的AL分型檢測(cè)方法，但細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢測(cè)和單純免疫學(xué)檢測(cè)并無顯著差異，而相較于免疫學(xué)檢測(cè)，形態(tài)學(xué)檢測(cè)亦具有一些獨(dú)特優(yōu)勢(shì)：首先形態(tài)學(xué)檢測(cè)具有經(jīng)濟(jì)、方便快捷、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)勢(shì)；對(duì)于存在典型形態(tài)學(xué)變化的AL患者，通過形態(tài)學(xué)檢測(cè)可直接診斷，如AML-M3，可為患者及時(shí)搶救提供基礎(chǔ)[3]；形態(tài)學(xué)檢測(cè)和化學(xué)染色在單核細(xì)胞白血病分型診斷中具有一定優(yōu)勢(shì)；有利于盡早判斷淋巴瘤患者病理分期；通過形態(tài)學(xué)檢測(cè)可為后續(xù)免疫學(xué)檢測(cè)的單克隆抗體選擇提供幫助[4]。

細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查在AL患者分型診斷中具有不可替代的價(jià)值，臨床檢驗(yàn)人員應(yīng)給予高度重視。