田雪蓮， 周開拓， 蘭承興， 李雪林

(福泉市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，貴州 福泉 550599)

能力驗(yàn)證是評(píng)價(jià)檢驗(yàn)檢測機(jī)構(gòu)檢測水平和檢測能力的依據(jù)，貴州省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳每年都要組織各市(州)、縣級(jí)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測機(jī)構(gòu)參加能力驗(yàn)證考核，2019—2020年連續(xù)2年對(duì)磺胺類獸藥殘留檢測進(jìn)行考核。2020年考核的參數(shù)是磺胺吡啶、磺胺醋酰、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧噠嗪，自領(lǐng)取樣品后必須96小時(shí)完成檢測，上報(bào)檢測結(jié)果及相關(guān)原始記錄。貴州省福泉市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全綜合檢測中心自2017年獲得獸藥殘留檢測資質(zhì)認(rèn)定以來，已連續(xù)3年一次性通過獸藥殘留能力驗(yàn)證，積累了能力驗(yàn)證的相關(guān)經(jīng)驗(yàn)。本文以能力驗(yàn)證采用的《動(dòng)物性食品中13 種磺胺類藥物多殘留的測定 高效液相色譜法》(GB 29694—2013)標(biāo)準(zhǔn)為依據(jù)[1]，分析獸藥殘留檢測能力驗(yàn)證中的影響因素及質(zhì)量控制技巧，為農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測機(jī)構(gòu)提高能力驗(yàn)證水平提供參考。

1 動(dòng)物性食品中磺胺類藥物多殘留檢測能力驗(yàn)證過程

1.1 考核樣品及檢測項(xiàng)目考核樣品為2個(gè)平行雙樣，均為空白添加樣品。考核樣品基質(zhì)是豬肉，每個(gè)樣品重5.00 g。檢測項(xiàng)目為豬肉中磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧噠嗪5種藥物。

1.2 考核樣品前處理按照《動(dòng)物性食品中13 種磺胺類藥物多殘留的測定 高效液相色譜法》(GB 29694—2013)的方法進(jìn)行考核樣品前處理。

1.2.1 提取考核樣品中加入乙酸乙酯20 mL，渦動(dòng)2 min，4 000 r/min離心5 min，取上清液于100 mL雞心瓶中，殘?jiān)屑尤胍宜嵋阴?0 mL，重復(fù)提取1次，合并2次上清液，備用。

1.2.2 凈化雞心瓶中加入0.1 mol/L鹽酸溶液4 mL，于40 ℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至<3 mL，轉(zhuǎn)至10 mL離心管中。用0.1 mol/L鹽酸溶液2 mL洗雞心瓶，轉(zhuǎn)至同一離心管中。再用正己烷3 mL洗雞心瓶，將正己烷轉(zhuǎn)至同一離心管中，渦動(dòng)30 s，3 000 r/min離心5 min，棄去正己烷。再用正己烷3 mL重復(fù)萃取1次，取下層液備用。MCX柱依次用甲醇2 mL和0.1 mol/L鹽酸溶液2 mL活化，取備用液過柱，控制流速約為1 mL/min。依次用0.1 mol/L鹽酸溶液1 mL和50%甲醇乙腈溶液2 mL淋洗，用洗脫液8 mL 洗脫，收集洗脫液，于40 ℃氮?dú)獯蹈桑?.1%甲酸乙腈溶液1.0 mL溶解殘余物，0.45 μm濾膜過濾，用高效液相色譜法測定[2]。

1.3 樣品檢測檢測儀器：液相色譜儀。色譜柱：ODS-C18(250 mm×4.5 mm,粒徑5 μm)。流動(dòng)相：0.1%甲酸+乙腈。梯度洗脫見表1。流速1 mL/min，柱溫30 ℃，檢測波長270 nm，進(jìn)樣體積100 μL。

表1 流動(dòng)相梯度洗脫條件

1.4 檢測結(jié)果考核樣品經(jīng)5種磺胺類混標(biāo)0.25 μg/mL 單點(diǎn)校準(zhǔn)，檢測結(jié)果見表2；5種磺胺標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1；考核樣品檢測圖譜見圖2。經(jīng)貴州省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳能力驗(yàn)證通報(bào)，此次考核結(jié)果合格。

表2 考核樣品檢測結(jié)果

3 獸藥殘留能力驗(yàn)證質(zhì)量控制技巧分析

3.1 提前練習(xí)做好添加回收按照GB 29694—2013的操作程序或作業(yè)指導(dǎo)書進(jìn)行操作，熟練掌握方法的前處理過程，確保所做樣品添加回收在60%～120%。若實(shí)驗(yàn)的重現(xiàn)性較差，則查找原因進(jìn)行改正，確保方法的靈敏度和準(zhǔn)確度。

3.2 凈化徹底與避免損失

3.2.1按照GB 29694—2013凈化步驟，在雞心瓶中加0.1 mol/L鹽酸溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)時(shí)，蒸發(fā)溫度最好不要超過60 ℃，蒸發(fā)至<3 mL即可。用 0.1 mol/L鹽酸溶液洗雞心瓶要用吸管反復(fù)多次潤洗，再用正已烷3 mL洗雞心瓶，清洗溶液轉(zhuǎn)至同一離心管中，渦旋混合30 s，3 000 r/min離心5 min，棄去正己烷。此時(shí)要用吸管吸去樣品中的油脂，油脂吸取要徹底并避免吸取過多，油脂吸取不徹底會(huì)影響后續(xù)的過柱，導(dǎo)致柱子堵塞；吸取油脂時(shí)若吸取了下層的鹽酸溶液，又會(huì)引起殘留損失，導(dǎo)致回收降低。

3.2.2樣品過MCX柱時(shí)，要控制流速為1 mL/min，不要用外力擠壓柱子，擠壓柱子會(huì)影響柱效，導(dǎo)致回收降低。用洗脫液洗脫時(shí)，最好采用洗脫液8 mL，按照GB 29694—2013方法采用4 mL洗脫時(shí)會(huì)導(dǎo)致磺胺醋?；厥章实?，只能達(dá)到30%～40%，而采用洗脫液8 mL能確保所有磺胺藥品回收達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求。

3.3 嚴(yán)格做好質(zhì)量控制質(zhì)量控制中應(yīng)包括空白對(duì)照和質(zhì)控樣品(檢出限3～10倍加標(biāo))，與考核樣品同時(shí)測定。空白對(duì)照可避免測試過程中的污染和空白基質(zhì)中的干擾，質(zhì)控樣品可確保測試結(jié)果的靈敏度和準(zhǔn)確度，同批次實(shí)驗(yàn)質(zhì)控樣品達(dá)到回收要求則考核樣品一般也會(huì)在允許誤差范圍內(nèi)。

3.4 定性與定量分析在進(jìn)行定性分析時(shí)，對(duì)出峰時(shí)間接近的獸藥要單獨(dú)配制標(biāo)樣，重新調(diào)整流速或流動(dòng)相洗脫比例，讓峰型充分分開。數(shù)據(jù)分析要精準(zhǔn)，建議確定樣品各獸藥的濃度范圍，再配置1個(gè)近似的標(biāo)樣濃度進(jìn)行校準(zhǔn)分析，選取前后2針峰面積平均值作為標(biāo)樣峰面積，校定樣品濃度。

4 小結(jié)

本文通過開展磺胺類藥物檢測能力驗(yàn)證考核，總結(jié)分析了畜產(chǎn)品獸藥殘留檢測能力驗(yàn)證的質(zhì)量控制技巧，通過強(qiáng)化檢測方法中的操作要領(lǐng)和關(guān)鍵點(diǎn)，使檢測人員的實(shí)驗(yàn)操作技能得到提升，有利于提高獸藥殘留檢測水平和能力驗(yàn)證的通過率，保證檢測機(jī)構(gòu)出具準(zhǔn)確、公正、有效的檢測數(shù)據(jù)，提高畜產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)管水平，保障畜禽產(chǎn)品質(zhì)量安全。