王宇卿 耿榕徽 張須學(xué)

摘要 目的：以艾葉中桉油精、樟腦、龍腦3種有效成分為指標(biāo)，評價(jià)“宛艾”及其他產(chǎn)地艾葉的質(zhì)量，為艾葉質(zhì)量控制及道地藥材基地建設(shè)提供技術(shù)支持。方法：采用安捷倫HP-5毛細(xì)管色譜柱（30 m×0.32 mm×0.25 μm）和氫火焰離子化檢測器（FID檢測器），氣相色譜程序升溫法測定。結(jié)果：32個(gè)產(chǎn)地艾葉中3種成分含量差異顯著，南陽桐柏艾葉桉油精含量較高，南陽鎮(zhèn)平艾葉樟腦含量較高，河北安國艾葉龍腦含量較高。結(jié)論：“宛艾”尤其是桐柏艾葉含量較高，本方法快捷簡便，重復(fù)性好。

關(guān)鍵詞 艾葉;桉油精;樟腦;龍腦;含量測定;氣相色譜;質(zhì)量控制;揮發(fā)性成分

Abstract Objective：To use 3 components of eucalyptus，camphor and borneol to evaluate Artemisia argyi from “wan ai” and other producing areas，providing technical support for the quality control of Artemisia argyi and the construction of genuine medicinal materials base.Methods：Agilent HP-5 capillary column（30 m×0.32 mm×0.25 μm）and FID detector（hydrogen flame ionization detector）were used.Determination was by Gas Chromatography Temperature Program.Results：There were significant differences in the content of the 3 components in the 32 producing areas.The content of eucalyptus in Nanyang Tongbai Artemisia argyi leaves was higher，the content of camphor in Nanyang Zhenping Artemisia argyi leaves was higher，and the content of borneol in Hebei Anguo Artemisia argyi leaves was higher.Conclusion：The method is simple and reproducible，it can be used for quality evaluation of Artemisia argyi leaves.Quality research of Artemisia argyi leaves provides technical support for the production base of genuine medicinal materials in Nanyang area.

Keywords Artemisia argyi leaves; Eucalyptol; Camphor; Borneol; Content determination; Gas chromatography; Quality control; Volatile components

中圖分類號：R282.6 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A doi：10.3969/j.issn.1673-7202.2020.22.005

艾葉為菊科植物艾Artemisia argyi Levl.et Vant.的干燥葉，具有溫經(jīng)止血、散寒止痛，祛濕止癢之功效[1]。臨床常用于婦科疾病、呼吸系統(tǒng)疾病、消化系統(tǒng)疾病以及外科疾病[2-5]。艾草在我國各地均有分布，南陽處于亞熱帶向暖溫帶的過渡地帶，氣候溫暖濕潤，適宜艾草生長，特別是南陽下轄的幾個(gè)主產(chǎn)區(qū)：桐柏、唐河等地，產(chǎn)出的艾草質(zhì)優(yōu)量大，目前已成為全國最大的艾草輸出基地，外界稱南陽地區(qū)所產(chǎn)的艾草為“宛艾”。艾草主產(chǎn)地除南陽外還有蘄春、寧波、安國等地[2，5]。由于產(chǎn)地廣泛、品種及氣候差異造成了各地艾葉質(zhì)量良莠不齊，因此對艾葉中主要有效成分的含量進(jìn)行比較研究顯得尤為重要。為了科學(xué)評價(jià)艾葉質(zhì)量及開發(fā)道地艾葉生產(chǎn)基地，本實(shí)驗(yàn)采集了全國32個(gè)產(chǎn)地的艾葉樣品，進(jìn)行其主要有效成分的比較研究。考慮到艾葉中化學(xué)成分復(fù)雜，中華人民共和國藥典僅測定桉油精[1]，不能全面評價(jià)艾葉質(zhì)量，本研究以其含量普遍較高的主要活性成分桉油精、樟腦、龍腦為指標(biāo)[7-10]，建立了能夠快速同時(shí)測定這3種成分含量的方法，綜合評價(jià)不同產(chǎn)地艾葉的品質(zhì)，為艾產(chǎn)品質(zhì)量控制和道地藥材生產(chǎn)基地建設(shè)提供技術(shù)支持。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 氣相色譜儀（Agilent公司，美國，型號：7890A），分析天平（梅特勒-托利多有限公司，瑞士，型號：XS-105）。

1.2 試劑 桉油精對照品（批號：110788-201105），樟腦對照品（批號：111749-200601），龍腦對照品（批號：110881-201107），均購于中國食品藥品檢定研究院;正己烷（分析純，購于天津市福晨化學(xué)試劑廠）。

1.3 分析樣品 32個(gè)不同產(chǎn)地的艾葉，均采摘于2015年端午節(jié)前后，陰干備用，由本課題組鑒定為菊科植物艾Artemisia argyi Levl.et Vant.。見表1。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：HP-5毛細(xì)管色譜柱（30 m×0.32 mm×0.25 μm），載氣為99.99%高純氮?dú)?，流速?.5 mL/min，分流比為10∶ 1，進(jìn)樣口溫度為250 ℃，進(jìn)樣量為1 μL，檢測器溫度260 ℃，程序升溫：起始溫度80 ℃，然以2 ℃/min升溫至104 ℃，再以20 ℃/min升溫至260 ℃，保持10 min。上述色譜條件下，理論塔板數(shù)以桉油精峰、樟腦峰、龍腦峰計(jì)算均不低于41 000，各成分基線分離良好，分離度>1.5。色譜圖見圖1。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取桉油精對照品12.22 mg，樟腦對照品17.20 mg，龍腦對照品10.46 mg，置于100 mL容量瓶中，用正己烷溶解并定容，即得。

2.3 供試品溶液的制備 取艾葉粉末，約2.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入正己烷25 mL，混勻，稱定重量，加熱回流1 h，放冷，補(bǔ)足減失的重量;搖勻，濾過，取上清液過0.45 μm微孔濾膜，作為供試品溶液。

2.4 專屬性試驗(yàn) 按“2.3”項(xiàng)下方法制備不含艾葉的陰性供試品溶液，按“2.1”色譜條件進(jìn)樣。見圖1。在按油精、樟腦、龍腦色譜峰位置處未見相關(guān)吸收峰，表明正己烷溶液對測定無干擾，方法專屬性良好。

2.5 線性關(guān)系考察 取“2.2”項(xiàng)下混合對照溶液，逐級稀釋，制備桉油精、樟腦、龍腦的系列濃度混合對照溶液。按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定，以峰面積（y）對濃度（x）進(jìn)行線性回歸，得到桉油精、樟腦、龍腦的線性回歸方程分別為：y1=1 192.1x1+0.528 5（r1=0.999 4），y2=1 196.5x2+1.253 2（r2=0.999 9），y3=1 170.6x3-0.797 1（r3=0.999 3），結(jié)果表明桉油精在0.006 1～0.122 2 mg/mL、樟腦在0.008 6～0.172 0 mg/mL、龍腦在0.005 2～0.104 6 mg/mL范圍內(nèi)與各自峰面積的線性關(guān)系良好。

2.6 中間精密度試驗(yàn) 按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，結(jié)果桉油精、樟腦、龍腦的RSD均小于3.08%，表明儀器精密度良好。

2.7 供試品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別于0，1，2，4，8，16，24 h進(jìn)樣，結(jié)果桉油精、樟腦、龍腦的RSD均小于2.43%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 按“2.3”項(xiàng)下方法制備6份供試品溶液，進(jìn)樣測定，結(jié)果桉油精、樟腦、龍腦的RSD均小于2.91%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.9 回收率試驗(yàn) 取已知含量的同一批次桐柏艾葉粉末6份，每份2.5 g，精密稱定，分別精密加入適量的對照品溶液，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣測定。外標(biāo)法計(jì)算桉油精、樟腦、龍腦的加樣回收率分別在96.62% ～104.12%、91.44% ～102.32%、93.29% ～101.78%，且RSD分別為2.50%、4.03%、3.06%。

2.10 樣品測定結(jié)果 取32個(gè)不同產(chǎn)地的艾葉，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，照上述色譜條件進(jìn)樣，外標(biāo)法計(jì)算桉油精、樟腦、龍腦的含量。見表1。將表中不同產(chǎn)地的艾葉分為“宛艾”（編號1～16）和“其他產(chǎn)地”（編號17～32）2組，對艾葉中3種成分的含量高低進(jìn)行比較分析。見圖2～4。

大多數(shù)產(chǎn)地艾葉（79%）的桉油精含量分布在0.5～1.0 mg/g。其中桉油精含量不足0.5 mg/g的艾葉，其他產(chǎn)地占6%，“宛艾”則無;桉油精含量在0.5～1.0 mg/g的艾葉，“宛艾”（41%）多于其他產(chǎn)地（38%）;桉油精含量在1.0～1.5 mg/g的艾葉，“宛艾”（9%）多于其他產(chǎn)地（6%）。總體來看，“宛艾”桉油精含量較高。見表1和圖2。

大多數(shù)產(chǎn)地（76%）艾葉中的樟腦含量分布在0.1～0.3 mg/g。其中樟腦含量不足0.1 mg/g的艾葉，其他產(chǎn)地占3%，“宛艾”則無;樟腦含量在0.1～0.3 mg/g的艾葉，“宛艾”同其他產(chǎn)地均占（38%）;樟腦含量大于0.3 mg/g的艾葉，“宛艾”（13%）多于其他產(chǎn)地（9%）。總體來看，“宛艾”樟腦含量較高。見表1和圖3。

大多數(shù)產(chǎn)地（69%）艾葉中龍腦的含量分布在0.1～0.3 mg/g。其中龍腦含量不足0.1 mg/g的艾葉，其他產(chǎn)地占13%，“宛艾”則無;龍腦含量在0.1～0.3 mg/g的艾葉“宛艾”和其他產(chǎn)地差異不大;含量大于0.3 mg/g的艾葉，“宛艾”（16%）多于其他產(chǎn)地（3%）?？傮w來看，“宛艾”龍腦含量較高。見表1和圖4。

綜合來看，“宛艾”桉油精、樟腦、龍腦整體較優(yōu)。

3 討論

3.1 提取方法的選擇 本研究首先考察了先提油后再比較油中有效成分的方法，該方法需要長時(shí)間提取揮發(fā)油，后將揮發(fā)油轉(zhuǎn)移并且稀釋，再進(jìn)行分析，處理過程復(fù)雜，溶劑及樣品用量大，耗時(shí)長，轉(zhuǎn)移過程損耗大，造成誤差較大，重復(fù)性不好，回收率不高。本實(shí)驗(yàn)嘗試采用有機(jī)試劑提取，結(jié)果顯示該方法操作簡單，溶劑及樣品用量小，操作時(shí)間短，轉(zhuǎn)移無損耗，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性好，回收率高，各項(xiàng)方法學(xué)指標(biāo)均符合標(biāo)準(zhǔn)，故本實(shí)驗(yàn)采用有機(jī)溶劑提取法。本實(shí)驗(yàn)還以桉油精、樟腦、龍腦的提取率為指標(biāo)，進(jìn)一步對比了無水乙醇、石油醚、正己烷、無水乙醚4種溶劑。結(jié)果正己烷提取效率高，分離度好，溶劑較不宜揮發(fā)，測定結(jié)果準(zhǔn)確。故采用正己烷加熱回流法提取。

3.2 色譜條件的選擇 桉油精、樟腦、龍腦屬于單萜類化合物，極性較小，根據(jù)“相似相溶”原理，采用以5%苯基甲基聚硅氧烷為固定相的HP-5弱極性色譜柱，達(dá)到了較好的分離效果及重現(xiàn)性。

由于艾葉提取液中揮發(fā)性成分復(fù)雜，分離難度大，本實(shí)驗(yàn)采用程序升溫法，根據(jù)桉油精、樟腦、龍腦3者之間的極性及沸點(diǎn)差異設(shè)置溫度，將3者較好地分離。

3.3 艾葉的質(zhì)量評價(jià) 桉油精、樟腦、龍腦作為艾葉中的主要有效成分，其含量的高低影響藥材的質(zhì)量和藥用價(jià)值。而產(chǎn)地作為影響藥材中桉油精、樟腦、龍腦等次生代謝產(chǎn)物形成的主要因素，亦是影響藥材質(zhì)量的重要因素;故本實(shí)驗(yàn)以3者的含量作為評價(jià)指標(biāo)，對不同產(chǎn)地的艾葉進(jìn)行對比研究，結(jié)果顯示“宛艾”和其他產(chǎn)地的艾葉相比，整體含量水平較高。

桉油精是艾葉中的關(guān)鍵生物活性成分之一，不同產(chǎn)地的艾葉中桉油精含量水平均顯著高于其他2種成分，中華人民共和國藥典規(guī)定其含量不得少于0.050%（即0.5 mg/g）。而“宛艾”中桉油精的含量在0.5～1.14 mg/g，以桐柏縣、社旗縣、陸營鎮(zhèn)較高?！巴鸢敝姓聊X的含量在0.15～0.41 mg/g，以鎮(zhèn)平縣、社旗縣、桐柏縣3產(chǎn)地較高?！巴鸢敝旋埬X的含量在0.1～0.55 mg/g，以內(nèi)鄉(xiāng)縣、鎮(zhèn)平縣、桐柏縣3產(chǎn)地較高。3種成分的含量綜合對比，桐柏產(chǎn)的艾葉在“宛艾”中表現(xiàn)出顯著優(yōu)勢。而將其與歷史上有名的四大艾草[2]對比，桐柏艾葉中桉油精、樟腦、龍腦的含量均高于北艾（河南湯陰）[11]、海艾（浙江寧波）、蘄艾（湖北蘄州），桉油精、樟腦的含量亦明顯高于祁艾（河北安國）[12]，從這幾種化學(xué)成分含量來看，桐柏艾葉與歷史所記載的幾大道地產(chǎn)地艾葉相比，亦表現(xiàn)出優(yōu)勢。