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        內(nèi)生菌YN201728的定殖能力及其防治煙草白粉病的效果研究

        2020-12-23 05:31:11何鵬飛吳毅歆王軍偉唐楊煥文何月秋
        核農(nóng)學(xué)報(bào) 2020年4期
        關(guān)鍵詞:生防菌定殖白粉病

        焦 蓉 何鵬飛 王 戈 吳毅歆 王軍偉唐 萍 楊煥文 何月秋

        (1云南農(nóng)業(yè)大學(xué),云南 昆明 650201;2微生物菌種篩選與應(yīng)用國(guó)家地方聯(lián)合工程研究中心,云南 昆明 650201;3紅塔煙草(集團(tuán))有限責(zé)任公司,云南 玉溪 653100)

        內(nèi)生菌指整個(gè)生活史或某個(gè)階段生活于植物體內(nèi)并對(duì)植物無(wú)不利影響的微生物的總稱,其與植物組成一個(gè)穩(wěn)定的自然生態(tài)系統(tǒng),對(duì)植物的生長(zhǎng)發(fā)育和抗病抗逆等過(guò)程產(chǎn)生重要的影響[1-2]。內(nèi)生菌在植物內(nèi)的存活和定殖是其發(fā)揮防病和促生作用的前提條件[3-4]。目前用于檢測(cè)內(nèi)生細(xì)菌在植物體內(nèi)定殖的方法包括抗生素標(biāo)記法、基因標(biāo)記法、同位素示蹤法、DNA和RNA 探針?lè)?、免疫學(xué)方法等[5]。報(bào)告基因技術(shù)的發(fā)展為研究目標(biāo)微生物與寄主間相互作用及其分布定殖規(guī)律創(chuàng)造了非常有利的條件[6]。綠色熒光蛋白(green fluorescence protein,GFP)具有標(biāo)記基因片段小,結(jié)構(gòu)穩(wěn)定,操作簡(jiǎn)單,無(wú)毒無(wú)害,激發(fā)熒光不需要外源底物和能量,在多種生物細(xì)胞中均可表達(dá)應(yīng)用等優(yōu)點(diǎn)[7],是近年來(lái)應(yīng)用最廣泛的標(biāo)記分子之一。

        由二孢白粉菌(Erysiphe cichoracearum)引起的煙草白粉病是煙草生產(chǎn)過(guò)程中一種主要的葉部真菌病害,其分布范圍廣且發(fā)病快速,特別是在育苗期間的溫室大棚內(nèi),相對(duì)高溫高濕環(huán)境使白粉病菌在大棚內(nèi)迅速擴(kuò)展,對(duì)煙草生產(chǎn)構(gòu)成了嚴(yán)重威脅,并在后期影響煙草的產(chǎn)量和品質(zhì)[8]。目前生產(chǎn)上煙草白粉病防治主要以化學(xué)防治為主,化學(xué)防治雖能在一定程度上控制白粉病,但過(guò)多依賴化學(xué)藥劑會(huì)產(chǎn)生病原菌抗藥性、農(nóng)藥殘留和環(huán)境污染等問(wèn)題。而通過(guò)篩選新的生防因子來(lái)防控植物病害不但可以減輕病害,還能促進(jìn)生態(tài)平衡,是目前植物病害防治研究的熱點(diǎn)[9-10]。解淀粉芽孢桿菌YN201728是一株分離自煙草種子的內(nèi)生菌,前期研究證實(shí)此菌株能有效防控?zé)煵莺诿劜『痛龠M(jìn)植株生長(zhǎng),并對(duì)多種真菌病害有較強(qiáng)的拮抗活性[11]。為了充分利用生防菌防治煙草白粉病,本研究采用YN201728 菌液噴施煙草幼苗,以期進(jìn)一步明確其防治效果與定殖量之間關(guān)系,為開(kāi)發(fā)生物農(nóng)藥產(chǎn)品提供理論支持。

        1 材料與方法

        1.1 試驗(yàn)材料

        供試菌株:煙草內(nèi)生解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)YN201728(以下簡(jiǎn)稱YN28),由云南農(nóng)業(yè)大學(xué)植物病蟲(chóng)害生物防治實(shí)驗(yàn)室自煙草種子中分離。其熒光標(biāo)記菌株YN28-P43GFPmut3a(以下簡(jiǎn)稱YN28-GFP)為自然轉(zhuǎn)化[12]所得的菌株。

        供試煙草:供試煙草品種為云煙87,種子由云南省煙草農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院提供,煙苗在育苗基質(zhì)中培育至4~5片真葉備用。

        培養(yǎng)基:細(xì)菌培養(yǎng)采用LB 培養(yǎng)基。

        1.2 試驗(yàn)方法

        1.2.1 YN28-GFP 標(biāo)記菌在煙草組織及根際土壤的定殖能力測(cè)定

        1.2.1.1 浸種對(duì)YN28-GFP 標(biāo)記菌在煙草幼苗植株內(nèi)定殖數(shù)量的影響 將煙草種子置于75%(v/v)酒精浸泡2 min 作表面消毒處理,無(wú)菌水漂洗3次以去除殘余酒精。隨后轉(zhuǎn)入熒光標(biāo)記菌的細(xì)胞懸浮液(1.0×107CFU·mL-1)內(nèi)浸種24 h,最后全部移入含有無(wú)菌濕潤(rùn)濾紙的培養(yǎng)皿(9.0 cm)內(nèi),28℃光照培養(yǎng)箱黑暗萌發(fā)。待種子萌發(fā)后,將培養(yǎng)箱的光照條件改為16 h光培養(yǎng)和8 h 暗培養(yǎng)。

        浸種處理15 d后,稱取0.1 g 煙草幼苗組織并置于5 mL 滅菌離心管中,用滅菌玻璃棒搗碎成勻漿狀,10倍梯度稀釋,取適合的梯度倍數(shù)稀釋液均勻涂布于含氯霉素(10 μg·mL-1)的LB 培養(yǎng)平板,37℃倒置黑暗培養(yǎng)24~36 h,隨后在WD-9403F型紫外分析儀(北京六一儀器廠)照射下統(tǒng)計(jì)平板上發(fā)綠色熒光的菌落數(shù),計(jì)算熒光菌在幼苗中的定殖量。試驗(yàn)設(shè)3次重復(fù)。

        1.2.1.2 澆灌對(duì)YN28-GFP 標(biāo)記菌在煙草組織及根際土壤定殖數(shù)量的影響 將育苗基質(zhì)中培育至4~5片真葉的煙草幼苗移栽至裝有自然土200 g/盆的盆缽(10 cm×10 cm×12 cm)中,1株/盆。移栽10 d后,向每株煙草根基部澆施10 mL YN28-GFP 標(biāo)記菌的菌液(1.0×107CFU·mL-1),分別在澆施接種后的第1、第5、第10、第15、第25、第30、第40、第50天從煙草組織和根際土壤處取樣,每個(gè)處理取3個(gè)重復(fù)。具體取樣及后續(xù)稀釋涂布等細(xì)節(jié)參考何鵬飛[13]的方法。取樣后測(cè)定標(biāo)記菌在煙草組織及根系周圍土壤中的定殖情況。

        1.2.1.3 YN28-GFP 標(biāo)記菌在煙草組織的定殖情況 在澆施熒光標(biāo)記菌后的第5天取煙草組織并對(duì)其作表面消毒,無(wú)菌水沖洗組織表面3~4次,切取煙草種子、根、莖、葉等組織并用壓片法制片,以未澆施標(biāo)記菌的煙草植株為對(duì)照,在激光共聚焦顯微鏡(Leica SP5Ⅱ,德國(guó)萊卡)下觀察YN28-GFP 標(biāo)記菌株的定殖情況。激光共聚焦顯微鏡的激發(fā)波長(zhǎng)設(shè)置為488~633 nm,在510~560 nm 波長(zhǎng)處收集發(fā)射光以觀測(cè)YN28-GFP,在620~660 nm 波長(zhǎng)處收集發(fā)射光以獲取熒光背景。

        1.2.2 菌株對(duì)溫室煙草白粉病的防效測(cè)定 試驗(yàn)在云南農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院溫室中進(jìn)行,煙草植株的育苗及移栽同1.2.1.2。

        保護(hù)性試驗(yàn)流程:向煙草葉片分別噴施野生型菌株和標(biāo)記菌株發(fā)酵液(1.0×107CFU·mL-1),10 mL/株,噴施1次;分別以噴施等體積的無(wú)菌LB 培養(yǎng)基和50%嘧菌酯水分散粒劑10 000倍液為陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照,噴施前各藥劑加入0.1%(v/v)吐溫20。待上述各處理液在煙草葉面上干燥后,再向葉片抖落接種白粉病孢子,然后將煙草幼苗移入溫室,正常水分管理。在接種生防菌后的第3、第7、第14、第21和第30天分別按煙草病蟲(chóng)害分級(jí)及調(diào)查標(biāo)準(zhǔn)[14]調(diào)查各處理白粉病發(fā)病情況,計(jì)算病情指數(shù)和相對(duì)防效;觀察新生葉片的發(fā)病情況,分析各處理對(duì)白粉病的持效期。每處理設(shè)3個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)15株。

        治療性試驗(yàn)流程:先接種白粉病孢子,待煙草葉片初現(xiàn)白粉病斑,調(diào)查病情后,向煙草葉片分別噴施生防菌株及對(duì)照試劑,其他操作步驟同保護(hù)性試驗(yàn)。

        1.2.3 YN28-GFP 標(biāo)記菌在煙草葉際和葉內(nèi)的定殖能力測(cè)定 標(biāo)記菌在煙草葉際的定殖能力:分別從1.2.2 保護(hù)性試驗(yàn)和治療性試驗(yàn)所噴施標(biāo)記菌株處理的煙草幼苗中,在培養(yǎng)第3、第7、第14、第21和第30天時(shí)隨機(jī)采取煙草葉片,每個(gè)重復(fù)取1片煙葉(倒三葉),3次重復(fù)。葉片稱重后用無(wú)菌水沖洗5次(避開(kāi)取樣時(shí)葉片留下的傷口),合并收集洗脫液,4 000 r·min-1離心20 min,保留沉淀,經(jīng)無(wú)菌水梯度稀釋后涂于含氯霉素平板上,37℃培養(yǎng)過(guò)夜后計(jì)數(shù)。根據(jù)每皿中的菌落數(shù)量,計(jì)算每克鮮葉片的葉際所含菌量。

        標(biāo)記菌在煙草葉內(nèi)的定殖能力:取樣方法同上,煙草葉片表面徹底消毒后,研磨稀釋涂布于含氯霉素的LB 平板上,統(tǒng)計(jì)熒光菌的定殖量。根據(jù)標(biāo)記菌的定殖量評(píng)估YN28 菌株在煙草葉片的定殖能力,并結(jié)合生防菌的相對(duì)防效分析拮抗菌的定殖能力與其防治效果的相關(guān)性。

        1.2.4 數(shù)據(jù)分析 采用SPSS 17.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的方差統(tǒng)計(jì)分析,多重比較使用Duncan′s 新復(fù)極差法進(jìn)行多組樣本間的差異顯著性檢驗(yàn),以P<0.05為差異顯著。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 YN28-GFP 標(biāo)記菌在煙草組織及根際土壤的定殖情況

        2.1.1 YN28-GFP 標(biāo)記菌在煙草幼苗中的定殖 從YN28-GFP 菌液處理的種子長(zhǎng)出的煙草幼苗中回收到大量熒光菌落,菌落數(shù)達(dá)到2.18×106CFU·g-1,推測(cè)標(biāo)記菌不但進(jìn)入種子內(nèi)部,而且在種子萌發(fā)生長(zhǎng)過(guò)程中可繁殖。

        2.1.2 YN28-GFP 標(biāo)記菌在煙草根際土、根表土及組織中的定殖 由圖1可知,接種YN28-GFP 1 d后,在煙草根、莖、葉和根表土中回收到的YN28-GFP 標(biāo)記菌菌落數(shù)分別為6.00×105、9.90×105、2.10×104和1.17×106CFU·g-1,且根、莖和根表土的定殖量達(dá)到最大值,說(shuō)明該內(nèi)生菌在煙草體內(nèi)的移動(dòng)速度很快;根際土中YN28-GFP 標(biāo)記菌含量在接種前5 d 處于緩慢增長(zhǎng)狀態(tài),在接種第5天時(shí)達(dá)到最大值,而葉中YN28-GFP標(biāo)記菌含量在接種第10天才達(dá)到最大值。隨著接種時(shí)間的延長(zhǎng),YN28-GFP 標(biāo)記菌株的定殖密度有所下降。從接種第15天開(kāi)始,根際土和根表土中菌落數(shù)開(kāi)始大幅度下降,接種第20天時(shí)莖和葉中的YN28-GFP標(biāo)記菌含量也開(kāi)始下降,而根中YN28-GFP 標(biāo)記菌含量從接種第30天才開(kāi)始以數(shù)量級(jí)形式大幅下降。接種第50天時(shí),煙草根、莖和葉組織中僅分別回收到6.30×103、2.0 ×102、1.0×102CFU·g-1的菌落。根表土中YN28-GFP 標(biāo)記菌的定殖量始終高于根際土,說(shuō)明根系分泌物中的某些成分可能具有引誘細(xì)菌定殖和增殖的作用。

        接種第5天,經(jīng)熒光菌處理的根表及木質(zhì)部導(dǎo)管呈現(xiàn)出很強(qiáng)的綠色熒光(圖2-A),而對(duì)照煙草根系中未見(jiàn)熒光(圖2-B);在莖的橫切和縱切切片中,YN28-GFP 主要聚集在莖表皮、韌皮部和維管束組織等部位(圖2-C、E),在葉肉細(xì)胞間隙及表皮中也可觀察到熒光蹤跡(圖2-G);在煙草種子的表皮及種胚內(nèi)同樣可以觀察到熒光菌(圖2-Ⅰ)。由此可見(jiàn),標(biāo)記菌YN28-GFP的定殖主要聚集在煙草的根表皮、木質(zhì)部導(dǎo)管,莖表皮、韌皮部及維管束組織,葉表和葉肉細(xì)胞間隙以及種皮與胚等部位。

        2.2 菌株定殖與煙草白粉病防效間的關(guān)系

        2.2.1 拮抗菌株對(duì)溫室盆栽煙草白粉病的防治效果 保護(hù)性試驗(yàn)結(jié)果顯示(表1),未提前噴施生防菌的陰性對(duì)照組在處理第3天開(kāi)始發(fā)病,而菌液處理組(YN28、YN28-GFP)和陽(yáng)性對(duì)照組均未發(fā)病;處理第7天時(shí),野生型YN-28和標(biāo)記菌株YN28-GFP 組的防效分別達(dá)到81.79%和78.51%,且兩者的防效與陽(yáng)性對(duì)照組無(wú)顯著差異;處理14~21 d時(shí),菌液處理組的防效開(kāi)始下降,但其病情指數(shù)顯著低于陰性對(duì)照,處理第21天時(shí),菌液處理組YN28和YN28-GFP的防效分別降至35.37%和38.69%,此時(shí)生防菌的防效已明顯低于藥劑處理的陽(yáng)性對(duì)照;處理第30天時(shí),菌液處理組煙草的病情指數(shù)與陰性對(duì)照組無(wú)顯著差異,說(shuō)明菌液處理組基本失去防效,菌株YN28和YN28-GFP 對(duì)煙草白粉病的保護(hù)作用持效期約21 d。

        治療性試驗(yàn)結(jié)果顯示(表1),生防菌(YN28和YN28-GFP)處理對(duì)煙草白粉病有明顯的治療作用,野生型菌株YN28和標(biāo)記菌株YN28-GFP處理14 d時(shí)對(duì)煙草白粉病的治療效果最好,防效分別達(dá)到76.97%和74.33%,且與陽(yáng)性對(duì)照組無(wú)顯著差異;處理21 d后菌液處理組(YN28、YN28-GFP)的煙草白粉病防效開(kāi)始降低,但病情指數(shù)仍顯著高于陰性對(duì)照;處理第30天時(shí),菌液處理組的病情指數(shù)與陰性對(duì)照間均無(wú)顯著差異,失去了防效作用。

        綜上所述,野生型菌株YN28和標(biāo)記菌株YN28-GFP 在不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)白粉病的防治效果均無(wú)顯著性差異,因而熒光標(biāo)記對(duì)菌株的生防效果未產(chǎn)生明顯影響。

        2.2.2 YN28-GFP 標(biāo)記菌在煙草葉際和葉內(nèi)的定殖能力與防效關(guān)系 通過(guò)組織分離培養(yǎng)法測(cè)定標(biāo)記菌株YN28-GFP 在煙草葉際和葉內(nèi)的定殖量。由圖3可知,無(wú)論是保護(hù)性試驗(yàn)還是治療性試驗(yàn),處理14 d 內(nèi)煙草葉際和葉內(nèi)菌量均維持在105~106CFU·g-1,煙草葉際菌含量略高于葉內(nèi)。隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng),YN28-GFP 在煙草葉際和葉內(nèi)的總定殖量逐漸降低,結(jié)合2.2.1 中YN28-GFP 標(biāo)記菌對(duì)白粉病的防治效果可知,標(biāo)記菌的防效也隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)相應(yīng)降低;處理第30天時(shí),治療性試驗(yàn)和保護(hù)性試驗(yàn)結(jié)果均顯示,標(biāo)記菌YN28-GFP 基本失去防效,其中,保護(hù)性試驗(yàn)中煙草葉片標(biāo)記菌YN28-GFP的定殖量?jī)H有102~103CFU·g-1,推測(cè)拮抗菌在煙草葉片中的定殖能力與防效密切相關(guān)。

        3 討論

        本研究采用熒光標(biāo)記菌株YN28-GFP 觀察其在根圍土壤中的定殖情況,發(fā)現(xiàn)不同時(shí)間點(diǎn)煙草根表土的標(biāo)記菌含量始終高于根際土,這可能是由于煙草根系可分泌如糖類、有機(jī)酸及氨基酸等小分子物質(zhì),而這些成分既可作為細(xì)菌的營(yíng)養(yǎng)源,又可改變土壤微環(huán)境而觸發(fā)微生物的趨化性,進(jìn)而影響微生物的定殖狀態(tài)[15]。定殖后的內(nèi)生菌并非處于靜止?fàn)顟B(tài),而是在植物的不同部位相互轉(zhuǎn)移,YN28-GFP 發(fā)酵液澆灌煙草植株1 d后,就能在煙草的根、莖、葉等組織中檢測(cè)到標(biāo)記菌,熒光標(biāo)記主要聚集在煙草根表皮和木質(zhì)部導(dǎo)管,莖表皮、韌皮部、維管束組織以及葉肉間隙等部位,與前人發(fā)現(xiàn)的芽孢桿菌在煙草上的定殖規(guī)律相似[16-18],表明菌株澆灌到煙草根系附近后,根系分泌物可以吸引菌株迅速向根表移動(dòng)聚集,定殖于根的分生區(qū)、伸長(zhǎng)區(qū)、成熟區(qū)以及主根和側(cè)根連接處等部位[4],利用植物的吸水動(dòng)力,通過(guò)木質(zhì)部導(dǎo)管的質(zhì)外體轉(zhuǎn)移到植株的莖和葉等其他組織[19]。同時(shí),研究認(rèn)為細(xì)菌在植物根系及其他組織的定殖與細(xì)菌的趨化性、鞭毛運(yùn)動(dòng)、植物細(xì)胞壁降解、活性氧清除能力以及生物膜形成等因素密切相關(guān)[20]。浸種處理的煙草幼苗中標(biāo)記菌定殖量也能達(dá)到106CFU·g-1,種子的種皮和胚中都能檢測(cè)到標(biāo)記菌株,推測(cè)內(nèi)生菌可能通過(guò)自然孔口直接進(jìn)入種子。Coombs 等[21]用egfp基因標(biāo)記的絲狀鏈霉菌檢測(cè)其在萌發(fā)小麥種子中的定殖情況,發(fā)現(xiàn)在小麥種子的胚、胚乳和胚根中就能觀察到內(nèi)生菌的定殖,說(shuō)明內(nèi)生菌定殖種子內(nèi)可能從植物的根、莖、葉、花等部位侵入后轉(zhuǎn)移到種子中,侵入也可能發(fā)生在植物發(fā)育的最早期階段,直接從皮孔等部位進(jìn)入種子長(zhǎng)期定殖[22],也可能在種子的不同世代垂直傳播[23]。

        煙草白粉病是一種嚴(yán)重的真菌性氣傳病害,擴(kuò)增迅速且極難防治和根除。本試驗(yàn)研究了噴施生防菌YN28 對(duì)溫室盆栽煙草白粉病的防治效果,發(fā)現(xiàn)YN28-GFP 對(duì)煙草白粉病有較好的保護(hù)和治療效果,處理14 d時(shí),保護(hù)性試驗(yàn)和治療性試驗(yàn)中YN28-GFP的防效分別達(dá)到66.96%和76.97%。彭志榮等[24]、劉郵洲等[25]研究發(fā)現(xiàn)生防菌對(duì)病原菌的保護(hù)效果好于治療效果,即提前接種拮抗菌株定殖能力強(qiáng)、防效好。本研究中治療性試驗(yàn)的防效稍優(yōu)于保護(hù)性試驗(yàn),可能是治療性試驗(yàn)中陰性對(duì)照起始病情指數(shù)偏高(21.73)的原因;處理30 d時(shí),保護(hù)性試驗(yàn)和治療性試驗(yàn)中陽(yáng)性對(duì)照的相對(duì)防效仍分別高達(dá)84.55%和77.88%,可能是因?yàn)楸驹囼?yàn)設(shè)計(jì)的農(nóng)藥濃度高于一般使用濃度。無(wú)論是保護(hù)性試驗(yàn)還是治療性試驗(yàn),50%嘧菌酯水分散粒劑的持效期都顯著優(yōu)于生防菌(YN28、YN28-GFP)處理,而生防菌在無(wú)保護(hù)的條件下,在處理30 d時(shí)已基本失去防效。但生防菌研制成為制劑時(shí),一般要加入不同保護(hù)功能的助劑,避免菌體數(shù)量過(guò)早衰減,從而延長(zhǎng)其防效。在實(shí)際田間應(yīng)用中YN28 制劑的持效時(shí)長(zhǎng)還有待進(jìn)一步深入研究。

        定殖能力強(qiáng)弱直接關(guān)系到生防菌能否適應(yīng)自然環(huán)境條件,能否發(fā)揮促生防病作用,能否被開(kāi)發(fā)為生物農(nóng)藥,是生防菌發(fā)揮生防能力最重要的因子之一[26]。內(nèi)生菌YN28 在煙草體內(nèi)具有良好的定殖能力,白粉病溫室盆栽試驗(yàn)前21 d,標(biāo)記菌在葉際和葉內(nèi)定殖量達(dá)到105~106CFU·g-1,說(shuō)明YN28 具有作為生防菌的基本特征。定殖是生防菌發(fā)揮防效的關(guān)鍵步驟,Chin-AWoeng 等[27]構(gòu)建了綠針假單胞菌PCL1391 菌株運(yùn)動(dòng)基因的突變體,與野生型相比,定殖能力缺失的突變體菌株徹底失去了防治番茄猝倒病的能力。Cao 等[28]將枯草芽孢桿菌SQR9 制成生物有機(jī)肥可有效防控黃瓜枯萎病,GFP 標(biāo)記菌可在黃瓜根的分化區(qū)和伸長(zhǎng)區(qū)、根毛和側(cè)根連接處穩(wěn)定定殖,保護(hù)宿主免受病原體侵害。本研究發(fā)現(xiàn),隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng),標(biāo)記菌YN28-GFP 在煙草葉際和葉內(nèi)的定殖量逐漸減少,白粉病的防治效果也逐漸降低,定殖量與生物防治效果呈密切正相關(guān)。為更好的發(fā)揮生防菌的防病作用,在實(shí)際應(yīng)用中,可以將菌株制備成含生防菌的有機(jī)肥或土壤改良劑等制劑[29],保護(hù)好菌株的生存環(huán)境,同時(shí)可根據(jù)大田發(fā)病情況適當(dāng)補(bǔ)施。

        4 結(jié)論

        本研究利用綠色熒光標(biāo)記的內(nèi)生菌開(kāi)展定殖與防治白粉病研究,結(jié)果表明,標(biāo)記菌YN28-GFP 在煙草根圍及幼苗中的定殖密度表現(xiàn)為根表土>根際土>根>莖>葉;激光共聚焦顯微鏡觀察顯示,標(biāo)記菌YN28-GFP主要聚集在煙草根表皮、木質(zhì)部導(dǎo)管、莖表皮、韌皮部及維管束組織、葉片表面和葉肉細(xì)胞間隙以及種子的種皮與胚等部位。野生型YN28和標(biāo)記菌株YN28-GFP 對(duì)煙草白粉病有較好的保護(hù)和治療效果,煙草葉片中內(nèi)生菌的定殖量與其防效密切相關(guān)。總之,內(nèi)生菌YN28可在煙草體內(nèi)有效定殖并在葉際及葉內(nèi)維持一定濃度,為進(jìn)一步利用該菌株開(kāi)展煙草白粉病的防控提供了理論基礎(chǔ)。

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