周艷波　陳丕茂　馮雪　袁華榮

摘要 通過模擬廣東主要海洋經濟物種種苗在增殖放流的運輸過程和放流初期機械損傷、環(huán)境突變和敵害生物捕食等因素的影響，掌握其放流初期存活率，并結合放流初期其生理生化指標分析，探討放流運輸對其生理狀況的影響。結果表明，在降溫桶裝運輸、抄網撈取投放、模擬敵害生物捕食條件下，紫紅笛鯛（Lutianu sargentimaculatus）、紅笛鯛（Lutjanus sanguineus）、黑鯛（Sparus macrocephlus）和斑節(jié)對蝦（Penaeus monodonsudden）的初期存活率分別為85.4%、83.1%、75.5%和91.1%。在蝦苗袋充氧密封運輸、模擬敵害生物捕食條件下，斑節(jié)對蝦的放流初期存活率為91.9%;紫紅笛鯛種苗降溫桶運輸放流3 h后，種苗體內肝、鰓組織的SOD活性、MDA含量均升至最高，肝組織的SOD活性和MDA含量分別為對照組的2.6和2.9倍;鰓組織的SOD活性和MDA含量分別為對照組的1.77和2.36倍;AChE活性則無顯著性差異，說明降溫桶運輸放流3 h前后對紫紅笛鯛種苗產生的脅迫作用最強。

關鍵詞 海洋經濟物種;增殖放流;運輸;存活率

中圖分類號 S931.5文獻標識碼 A

文章編號 0517-6611（2020）22-0103-04

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2020.22.027

Study on the Survival Rate of Main Marine Economic Species during Initial Enhancement and Releasing Stages in Guangdong Province

ZHOU Yan-bo，CHEN Pi-mao，FENG Xue et al （South China Sea Fisheries Research Institute， Chinese Academy of Fishery Sciences， Key Laboratory of Marine Ranch Technology of CAFS， Scientific Observing and Experimental Station of South China Sea Fishery Resources and Environment of? Ministry of Agriculture and Rural Affairs，Key Laboratory of Fishery Ecology Environment in Guangdong Province，Guangzhou， Guangdong? 510300）

Abstract This experiment simulated the transportation of main marine economic species during the proliferation-releasing process and the influences of the mechanical damage， environmental mutation and predator predators during the initial releasing period， in order to study the survival rate during the initial releasing period. Based on the physiological and biochemical indices analysis of marine economic species， the influences of releasing and transportation on the physiological condition of marine economic species were discussed. The results showed that the initial survival rate of Lutianu sargentimaculatus， Lutjanus sanguineus， Sparus macrocephlus and Penaeus monodons were 85.4%，83.1%，75.5% and 91.1% respectively under the conditions of cooling barrel transport， dip net for delivery，? predating by simulating hostile organisms. Under the conditions of oxygenation and sealed transport in shrimp bags and predating by simulating hostile organisms， the initial releasing survival rate of Penaeus monodonsudden was 91.9%. After? the cooling barrel transport and releasing 3 h， SOD activity and MDA content in the? liver and gill tissues reached the highest values. SOD activity and MDA content in liver tissues were 2.6 and 2.9 times as that of control group， SOD activity and MDA content in gill tissues were 1.77 and 2.36 times as that of control group. But AChE activity had no significant difference with control group. The results indicated that the stress on L.sargentimaculatus seedlings was the strongest after the cooling barrel transport and releasing 3 hours.

Key words Marine economic species;Enhancement and releasing;Transport;Survival rate

基金項目 國家科技支撐計劃課題（2012BAD18B02）;國家公益性行業(yè)（農業(yè)）科研專項經費項目（201003068）;中央級公益性科研院所基本科研業(yè)務費專項（2015TS05，2012TS09）。

作者簡介 周艷波（1983—），男，河南周口人，助理研究員，碩士，從事海洋牧場與資源增殖研究。*通信作者，研究員，從事漁業(yè)資源保護與利用等方面研究。

收稿日期 2020-04-12

增殖放流是指用人工方法向天然水域投放魚、蝦、貝和藻等水生生物的幼體（或成體或卵等）以增加種群數量、改善和優(yōu)化水域的漁業(yè)資源群落結構，從而達到增殖漁業(yè)資源、改善水域環(huán)境、保持生態(tài)平衡的目的[1]。海洋物種增殖放流已成為恢復和增殖海洋漁業(yè)資源、促進沿海漁民增產增收的重要措施。漁業(yè)資源種類在生活史過程中的死亡高峰期，是處在產卵以后的幼體及仔稚魚期，增殖放流的種苗經過人工培育，避過了在自然環(huán)境中的死亡高峰階段，如果在增殖放流初期能有效保障種苗的存活率，就能非常高效地補充漁業(yè)資源的補充群體。同時，增殖放流初期放流種類的存活率是評估增殖放流效果的重要參數，若能摸清增殖放流初期存活率，對于提高增殖放流評估結果的準確性有重要意義。摸清增殖放流初期存活率包括種苗放養(yǎng)時易池放養(yǎng)時生態(tài)環(huán)境的變化引起的“突然死亡”、稱重計數引起的“機械損傷死亡”和種苗放養(yǎng)期間敵害魚類的“捕食死亡”[2]。對自然死亡率的估算方法主要有漁獲量曲線分析方法[3]、標記-回捕法[4-6]等，國內外也有一些學者做過增殖放流前期魚類行為的研究[7]。筆者通過模擬廣東主要海洋經濟物種紫紅笛鯛、紅笛鯛、黑鯛和斑節(jié)對蝦等種苗在增殖放流過程和增殖放流初期在機械損傷、環(huán)境突變和敵害生物捕食等因素影響下的存活率和生理生化變化試驗，研究放流過程突然死亡率和放流初期存活率，探討增殖放流對放流物種生理狀況的影響，以期為廣東沿海乃至全國增殖放流的實施及效果評價提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

研究目標種類為廣東海域主要增殖放流種類紫紅笛鯛、紅笛鯛、黑鯛、斑節(jié)對蝦種苗。魚苗規(guī)格為3～5 cm，蝦苗規(guī)格為1～3 cm。受試生物購自廣東省深圳市南澳海域附近的育苗場。

試驗在中國水產科學研究院南海水產研究所深圳試驗基地的室內受控流水式水泥池進行，試驗池和對照池面積均為20 m2，水深均為1.5 m，試驗時海水鹽度為31.70，pH 8.08，溶解氧含量控制在5.6～6.3 mg/L。

1.2 增殖放流初期存活率試驗

魚類降溫桶裝運輸試驗時，試驗池和對照池中均各投放紫紅笛鯛、紅笛鯛、黑鯛苗種約2 000尾。試驗水池內溫度均為各個種苗育苗場水池溫度（如紫紅笛鯛育苗時溫度為30 ℃），此后用抄網將試驗魚從池中撈至魚苗運輸車的降溫桶中，其時降溫桶中海水溫度為20 ℃，運輸2～3 h后，用抄網將受試生物從降溫桶中轉移至試驗池內，其時試驗池內海水水溫為廣東省6月份天然海水水溫27.8 ℃。對照池中水溫一直保持在27.8 ℃。進行蝦類試驗時，試驗池和對照池中相應各投放斑節(jié)對蝦約3 000尾。降溫桶裝運輸試驗過程同魚類，進行蝦苗袋運輸試驗時，充氧量為水體量的1.5倍。在海水加入10%的海水冰。此外，在試驗池內中放置作為放流種苗敵害生物的體重15.6 g 的黑鯛3尾（根據拖網調查所得的海域敵害生物資源密度計算確定），對照組中不放置敵害生物。試驗組和對照組每天均投放不影響水質的少量餌料。

試驗開始后，每2 h觀測1次受試魚的狀況，測定池水pH、溶解氧和溫度，記錄試驗魚的異常行為如魚體側翻、失去平衡、游泳能力減弱、呼吸功能減弱、色素沉積等。如受試魚沒有任何肉眼可見運動，如不游動、鰓不扇動、碰觸尾柄后無反應等，即判斷該魚已死亡，取出并記錄死魚數目。試驗期30 d。

1.3 增殖放流初期生理生化指標的變化

選取廣東省典型增殖放流苗種——紫紅笛鯛作為研究對象，探討降溫桶運輸對紫紅笛鯛幼魚生理生化指標的影響。試驗開始后分別在30 ℃育苗池中、20 ℃降溫桶運輸途中、27.8 ℃試驗水池中1、3、6、24、48和96 h后從每組每次隨機抽取10尾受試放流生物，根據取樣品的順序分別將樣品編號為Y30、T20、S1、S3、S6、S24、S48、S96。用潔凈海水沖洗后置于冰盤內，快速解剖并分別對紫紅笛鯛幼魚肝、鰓、腦、肌肉等部位各取樣0.5～1.0 g，用0.86%預冷生理鹽水淋洗，濾紙吸附后用預冷的Tris-HCl緩沖液（0.01 mol/L Tris，0.25 mol/L蔗糖，0.1 mol/L EDTA，pH 7.5）勻漿，6 000 r/min離心10 min后，立刻取上清液進行蛋白質含量和酶活力測定，肝的勻漿比例為1∶ 4、鰓和腦的勻漿比例為1∶9[組織質量（g）/緩沖液體積（mL）]分別進行生理生化應激指標（丙二醛MDA、超氧化物歧化酶SOD、乙酰膽堿酯酶AchE等）測定。

酶活性測定按照南京建成生物工程研究所蛋白質試劑盒，SOD試劑盒、MDA試劑盒和AchE試劑盒的使用說明操作，反應液吸光值使用UV-5100紫外可見光分光光度計測定。

綜合運輸過程和放流過程中的水溫變化、機械損傷、敵害生物捕食等以及受試放流生物產生的應激性分析，估算增殖放流過程中的放流種類突然死亡率和存活率。

1.4 數據處理 利用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件對生理生化指標進行分析，統(tǒng)計結果均以平均值±標準差（±SD）表示，P<0.05 表示顯著相關。

2 結果與分析

2.1 放流過程中試驗生物存活率的測定結果

該研究通過模擬增殖放流種苗在機械損傷、環(huán)境、突變、敵害生物捕食等因素影響下的存活率試驗，研究紫紅笛鯛、紅笛鯛、黑鯛3種放流魚類和斑節(jié)對蝦1種放流蝦類的放流過程的存活率。

在降溫桶裝運輸、抄網撈取投放、敵害生物投放條件下，紫紅笛鯛、紅笛鯛、黑鯛和斑節(jié)對蝦的放流過程存活率分別為85.4%、83.1%、75.5%和91.1%（表1），即增殖放流前期突然死亡率分別為14.6%、16.9%、24.5%和8.9%。在蝦苗袋充氧密封運輸、敵害生物投放條件下，斑節(jié)對蝦的放流過程存活率為91.9%，即增殖放流前期突然死亡率為8.1%。對照組紫紅笛鯛、紅笛鯛、黑鯛和斑節(jié)對蝦的暫養(yǎng)存活率分別為94.5%、97.9%、94.1%和95.9%。

2.2 降溫桶運輸對紫紅笛鯛幼魚肝、鰓組織SOD活性的影響 從圖1可以看出，降溫桶運輸方式對紫紅笛鯛幼魚肝組織中的SOD活性有顯著的促進作用，在運輸過程中及放入試驗水池后1 h內，試驗組與對照組SOD酶活性無顯著差異（P<0.05）;放入試驗水池1～3 h內，紫紅笛鯛幼苗肝組織的SOD活性明顯達到最高值，此后隨之降低，12 h后趨于穩(wěn)定。從圖2可以看出，降溫桶運輸方式對紫紅笛鯛幼魚鰓組織中的SOD活性也有顯著的促進作用，但與肝組織中SOD活性的差異在于放入試驗水池3 h后SOD活性達到最大值，此后隨著時間的增加而遞減，96 h后趨于穩(wěn)定。

2.3 降溫桶運輸對紫紅笛鯛幼苗肝、鰓組織MDA含量的影響 由圖3～4可知，降溫桶運輸對紫紅笛鯛幼苗肝組織和鰓組織中的MDA含量均有明顯影響，在試驗開始時，由于試驗水池水溫高于對照池，試驗組內幼苗肝組織中的MDA含量高于對照組，但無顯著差異，之后用降溫桶運輸，進行2次機械損傷，試驗組MDA 含量逐漸降低，在運輸后放入試驗水池1 h后達到最低點，但在放入試驗水池3 h后MDA含量達到最高值，此后隨之降低，48 h后趨于穩(wěn)定。鰓組織中MDA含量與肝組織較為類似，放入試驗水池3 h后，MDA含量明顯達到最高，但恢復穩(wěn)定時間較短，6 h后趨于穩(wěn)定。

2.4 降溫桶運輸對紫紅笛鯛幼苗腦組織AChE活性的影響

乙酰膽堿酯酶（AChE）是生物神經傳導中的關鍵性酶。由圖5可知，降溫桶運輸對紫紅笛鯛幼魚腦組織中的AChE活性影響不甚明顯。與對照組相比，放入試驗水池3 h后AChE活性降低至最低值，但無顯著性差異;96 h后趨于穩(wěn)定。

3 討論

3.1 放流過程對紫紅笛鯛幼魚死亡率的影響

增殖放流的魚類肯定會在自然環(huán)境中出現死亡的現象，正確分析出自然死亡的數量可以減少對增殖放流評價的誤差，是不容忽視的數據。因為影響因素太多，不能準確得到這個數值。因此，需要用試驗的方法，通過分析試驗結果來估算。盡管實際上自然死亡率隨著時間、年齡和世代的不同而變化，由于在估計方法上的困難，它通常都是被當作常量來處理的[8]。漁獲量曲線分析法往往適用于開發(fā)初期的漁業(yè)種群， 因為這一時期的捕撈死亡率（F）是可以被忽略的， 而當種群開發(fā)程度較大時這種方法便不甚適用。經驗公式對自然死亡率的估算也只是一個粗略的估計[9]。增殖標志放流的魚苗需要從魚池里運輸到放流地點，在運輸過程中也會對魚苗造成損傷，影響到放流苗種的存活率。對長江刀鱭進行裝載和運輸脅迫后，4 h運輸后死亡率達到23.33%，而加鹽應激后死亡率則大大降低[10]。降低運輸密度，也可使運輸死亡率下降[11]。在放流苗種運輸時添加氨酪酸能有效緩解魚體的一些應激敏感指標，減少對魚類機體的損傷[12]，因此，放流運輸時要加入少量的緩解劑。該研究中在降溫桶裝運輸、抄網撈取投放、敵害生物投放條件下，紫紅笛鯛、紅笛鯛、黑鯛和斑節(jié)對蝦的增殖放流前期突然死亡率分別為14.6%、16.9%、24.5%和8.9%。

3.2 降溫桶運輸對紫紅笛鯛幼魚生理生化指標的影響

魚類的應激反應是魚體對體內外各種環(huán)境因子的超長刺激所產生的一種非特異性生理反應，以使機體適應超出正常生理調節(jié)范圍的環(huán)境變化要求[13]。

增殖放流的種苗的放流過程包括從育苗池或中間培育池裝載到低溫、高密度運輸再到低密度、高溫放流環(huán)境的變化過程，增殖放流期間種苗主要受溫度變化及密度變化的脅迫影響。研究顯示，運輸脅迫銀鯧時會導致其血清皮質醇含量顯著升高，血糖、血清與肌肉中乳酸含量在運輸脅迫后均顯著升高;肝臟與肌肉中糖元含量在運輸脅迫后均顯著降低，但在整個運輸脅迫過程中，肝臟組織中糖元含量的降低程度明顯高于肌肉組織[14]。

肝臟是試驗生物最大的解讀器官，當受到脅迫效應時，其內部的SOD及MDA含量將直接反映其應激程度;鰓是脅迫物的直接作用器官， 脅迫直接誘導其酶活性。SOD是一種誘導酶，當生物體受到脅迫時，細胞的氧化損傷時SOD的活性會受到誘導而含量增加，所以SOD活性的改變可反映魚體受脅迫的程度。丙二醛（MDA）的含量也可指示魚體的受脅迫程度。研究結果表明，紫紅笛鯛幼魚鰓和肝組織中的SOD活性和敏感性明顯不同，經過低溫-高密度脅迫效應后，脅迫效應達到最高值時為運輸后3 h，種苗體內肝、鰓組織的SOD活性、MDA含量均升至最高值，與對照組相比肝組織的SOD活性和MDA含量分別為對照組的2.6和2.9倍，鰓組織的SOD活性和MDA含量分別為對照組的1.77和2.36倍，SOD活性測定結果與有關學者對魚類的脅迫試驗結果相似。魚體中肝和鰓的生理功能不同，肝中的SOD活性高且敏感性高。因此，脅迫作用對肝SOD活性表現出促進作用，脅迫條件下肝SOD活性比鰓高，且肝組織SOD活性也較鰓中的先被激活[15-18]。但有些學者的研究表明在脅迫作用下，SOD的肝臟內是先抑制后升高，但該次試驗數據沒有顯示到該過程[19]。該研究結果顯示雖然紫紅笛鯛幼魚鰓和肝中SOD活性與MAD含量的變化規(guī)律差異不大，但低溫-高密度脅迫下紫紅笛鯛抗氧化酶體系內各種酶對其脅迫的敏感性差異也較小。

乙酰膽堿脂酶（AChE）是生物神經傳導中的關鍵性酶，能降解乙酰膽堿，終止神經遞質對后膜的刺激作用，保證神經沖動在突觸間正常傳導。一般認為， 魚體20%以上的AChE被抑制可認為脅迫作用存在;50%AChE被抑制可認為危害魚體生存，70%～80%的AChE被抑制則可能導致死亡。該試驗發(fā)現降溫桶運輸對紫紅笛鯛幼魚有抑制作用，這與有關學者做脅迫物質的結果較為類似[20-23]。但AChE的抑制率均在20%以下，說明降溫桶運輸對試驗魚腦組織中AChE活性的脅迫不甚明顯。

4 結論

該研究表明在降溫桶裝運輸、抄網撈取投放、模擬敵害生物捕食條件下，紫紅笛鯛、紅笛鯛、黑鯛和斑節(jié)對蝦的初期存活率分別為85.4%、83.1%、75.5%和91.1%。在蝦苗袋充氧密封運輸、模擬敵害生物捕食條件下，斑節(jié)對蝦的放流初期存活率為91.9%;紫紅笛鯛種苗降溫桶運輸放流3 h后，紫紅笛鯛種苗體內的生理生化指標均出現較大的變化，與對照組相比，肝組織的SOD活性和MDA含量分別為對照組的2.6和2.9倍，鰓組織的SOD活性和MDA含量分別為對照組的1.77和2.36倍，說明降溫桶運輸放流3 h前后對紫紅笛鯛種苗產生的脅迫作用最強。另根據一些學者的研究[11-12，24-25]，建議放流前清除放流水域敵害生物，增殖放流運輸時盡量使運輸水溫與自然海域水溫一致、添加氨酪酸、盡量降低運輸密度，放流時使用有效器具輕取輕放降低放流機械損傷，以提高增殖放流初期存活率、保障增殖放流效果。

參考文獻

[1] 李繼龍，王國偉，楊文波，等.國外漁業(yè)資源增殖放流狀況及其對我國的啟示[J].中國漁業(yè)經濟，2009，27（3）：111-123.

[2] 鄧景耀，任勝民，朱金聲.中國對蝦苗種放流規(guī)格試驗[J].水產學報，1996，20（2）：188-192.

[3] JENSEN A L.Comparison of catch-curve methods for estimation of mortality[J].Trans Am Fish Soc，1985，114（5）：743-747.

[4] CHAPMAN D G.Statistical problems in dynamics of exploited fisheries populations[C]//NEYMAN J.Proceedings of the fourth berkley symposium on mathematical statistics and probability.Berkeley：University of California Press，1961：153-168.

[5] PAULIK G J.Estimates of mortality rates from tag recoveries[J].Ciometrics，1963，19（1）：28-57.

[6] FAREBROTHER R W.Maximum likelihood estimates of mortality rates from single-release tagging studies[J].ICES Journal of Marine Science，1988，44（3）：229-234.

[7] 莫偉均，王從鋒，劉德富，等.北盤江2種典型增殖放流魚類突進游速研究[J].南方水產科學，2014，10（3）：9-14.

[8] 王迎賓，劉群.魚類自然死亡率的估算及其影響因子的探討[J].中國海洋大學學報，2005，35（1）：20-24.

[9] 詹秉義.漁業(yè)資源評估[M].北京：中國農業(yè)出版社，1995：352-353.

[10] 徐鋼春，杜富寬，聶志娟，等. 10‰鹽度對長江刀鱭幼魚裝載和運輸脅迫中應激指標的影響[J].水生生物學報，.2015，39（1）：66-72.

[11] 張偉，王有基，李偉明，等. 運輸密度和鹽度對大黃魚幼魚皮質醇、糖元及乳酸含量的影響[J].水產學報，2014，38（7）：973-980.

[12] 閆峰賓，董天成，盧媛媛，等. γ-氨基丁酸對鯽魚運輸應激后血液生化指標的影響[J].廣東農業(yè)科學，2014，41（20）：127-130.

[13] 劉小玲.魚類應激反應的研究[J].水利漁業(yè)，2007，27（3）：1-3.

[14] 彭士明，施兆鴻，李杰，等.運輸脅迫對銀鯧血清皮質醇、血糖、組織中糖元及乳酸含量的影響[J].水產學報，2011，35（6）： 831-837.

[15] 陳海剛，馬勝偉，林欽，等.氯化三丁基錫對黑鯛鰓和肝組織SOD、MDA和GPx的影響[J]. 南方水產，2009，5（2）：23-27.

[16] 楊麗華，方展強，鄭文彪，等.鎘對鯽魚鰓和肝臟超氧化物歧化酶活性的影響[J].安全與環(huán)境學報， 2003，3（3）：13-15.

[17] 秦潔芳，陳海剛，蔡文貴，等.鄰苯二甲酸二丁酯對紅鰭笛鯛幼魚的脅迫效應[J].中國水產科學，2011，18（5）：1125-1131.

[18] 楊濤，陳海剛，蔡文貴，等.菲脅迫對紅鰭笛鯛急、慢性毒性效應的研究[J].水產學報，2011，35（2）：298-304.

[19] 韓春燕，鄭清梅，陳桂丹，等.氨氮脅迫對奧尼羅非魚非特異性免疫的影響[J].南方水產科學，2014，10（3）：47-52.

[20]秦潔芳，陳海剛，蔡文貴等.鄰苯二甲酸二丁酯對漢氏棱鳀生化指標的影響[J].南方水產科學，2011，7（2）：29-34.

[21] DE LA TORRE F R，FERRARI L，SALIBIN A. Freshwater pollution biomarker：Response of brain acetylcholinesterase activity in two fish species[J].Comp Biochem Physiol： Part C，2002，131（3）：271-280.

[22] SONG S B，XU Y，ZHOU B S. Effects of hexachlorobenzene on antioxidant status of liver and brain of common carp （Cyprinus carpio）[J].Chemosphere，2006，65（4）：699-706.

[23] 李少南，謝顯傳，譚亞軍，等.三唑磷對麥穗魚腦組織中乙酰膽堿酯酶的誘導[J].農藥學學報，2005，7（1）： 59-62.

[24] 胡培培，劉汝鵬，趙忠波，等. 運輸時間和密度對翹嘴鲌皮質醇、耗氧率及氧氣袋內水質的影響[J].水生生物學報，2014，38（6）：1190-1194.

[25] 董少杰，梁擁軍，孫向軍，等.運輸條件下溫度、鹽度和pH值對眼斑雙鋸魚親魚氨和有機物排泄的影響[J].天津農業(yè)科學，2013，19（3）：32-37.