賀興龍 張一君 曾青華 張旭 馬海明

摘 ?要：為鑒定寧鄉(xiāng)豬血緣關(guān)系，本研究以寧鄉(xiāng)豬為研究對(duì)象，采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) （Polymerase Chain Reaction，PCR）對(duì)14個(gè)微衛(wèi)星DNA標(biāo)記進(jìn)行擴(kuò)增，利用全自動(dòng)測序儀通過毛細(xì)管電泳技術(shù)進(jìn)行分型，對(duì)257頭寧鄉(xiāng)豬進(jìn)行了親子鑒定。本研究為寧鄉(xiāng)豬的保種和產(chǎn)業(yè)化提供了有益的資料。

關(guān)鍵詞：寧鄉(xiāng)豬;微衛(wèi)星DNA;血緣關(guān)系鑒定

寧鄉(xiāng)豬是著名的地方豬品種，先后被列入“湖南省家畜家禽品種志和品種圖譜”和“中國豬品種志”，1984年對(duì)其制定了國家標(biāo)準(zhǔn)（GB/T2773-1981）。寧鄉(xiāng)豬因主要分布在寧鄉(xiāng)縣流沙河、草沖一帶而得名。其突出特點(diǎn)是早熟易肥、蓄脂力強(qiáng)、肌肉細(xì)嫩和肉味鮮美。隨著寧鄉(xiāng)豬產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展，對(duì)其進(jìn)行親子血緣關(guān)系鑒定顯得十分重要。微衛(wèi)星DNA屬于第三代遺傳標(biāo)記，具有多態(tài)性豐富、呈共顯性和簡單易行等特點(diǎn)，可用于親子血緣關(guān)系鑒定。本研究利用14個(gè)微衛(wèi)星DNA標(biāo)記，通過計(jì)算排除概率可進(jìn)行親子血緣鑒定，以期為寧鄉(xiāng)豬的保種選育提供理論依據(jù)。

1 ?材料與方法

1.1 樣本采集

用耳鉗剪取257頭寧鄉(xiāng)豬小塊耳組織，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 DNA提取及聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

按常規(guī)酚-氯仿法提取基因組DNA。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reaction，PCR）擴(kuò)增條件為：95 ℃預(yù)變性5 min，94 ℃變性30 s，56 ℃復(fù)性30 s，72 ℃延伸30 s，共計(jì)40 個(gè)循環(huán)，最后60 ℃延伸30 min。

1.3 微衛(wèi)星DNA分型

利用全自動(dòng)測序儀對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行測序，確定等位基因片段大小，毛細(xì)管電泳后分型，參照DNA分子量標(biāo)記，利用ABI遺傳分析儀對(duì)熒光標(biāo)記的DNA片段進(jìn)行檢測。微衛(wèi)星DNA標(biāo)記SWC59如圖 1 所示。

2 ?結(jié)果與分析

通過14個(gè)微衛(wèi)星DNA標(biāo)記研究了124頭后代個(gè)體與133個(gè)候選母本的親子關(guān)系。共獲得14個(gè)微衛(wèi)星DNA標(biāo)記的172個(gè)等位基因，SW2496、SW1400和 SW1047等位基因數(shù)分別為20個(gè)、19個(gè)和18個(gè)。各個(gè)基因座的基因雜合度也不同，SW1918最高，其雜合度是0.846，SW963最低，其雜合度是0.288，各個(gè)基因座的平均雜合度是0.625。親子鑒定部分結(jié)果如表1所示。

3 ?討論與結(jié)論

由于混合授精、多次授精和記錄錯(cuò)誤等原因，在豬場進(jìn)行親子鑒定十分重要。親子鑒定的方法很多，包括利用第一代、第二代和第三代遺傳標(biāo)記，但第三代遺傳標(biāo)記——微衛(wèi)星DNA標(biāo)記效果最好。本研究利用14個(gè)微衛(wèi)星DNA標(biāo)記對(duì)267頭寧鄉(xiāng)豬進(jìn)行了親子鑒定，結(jié)果可靠準(zhǔn)確。