李 博，張丹丹，程 景，靳 光，王棟才，孫銳鋒，徐 芳，梁 圓，張?jiān)獞c

（山西農(nóng)業(yè)大學(xué)（山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院）動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，山西太原 030032）

傳統(tǒng)測(cè)定飼料中粗纖維（CF）的方法是經(jīng)過(guò)稀酸、稀堿處理后烘干可得，此方法測(cè)定的結(jié)果僅包括部分纖維素、半纖維素和木質(zhì)素，測(cè)得的結(jié)果會(huì)低于實(shí)際測(cè)定結(jié)果[1]。Van Soest 等[2]在1991 年提出測(cè)定飼料中性洗滌纖維（NDF）和酸性洗滌纖維（ADF）的方法，主要是通過(guò)消煮、過(guò)濾法進(jìn)行參比分析，目前仍是學(xué)界公認(rèn)的精準(zhǔn)度較高的方法。在此原理基礎(chǔ)上，發(fā)展了濾袋法、ANKOM 纖維儀法[3-4]。朱立濤等[5]、張崇玉等[6]用濾袋法測(cè)定了飼料原料的CF 含量，同時(shí)以國(guó)標(biāo)法測(cè)定結(jié)果驗(yàn)證了濾袋法測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性，表明濾袋法測(cè)定粗纖維是可行的。劉磊等[7]采用濾袋法測(cè)定了飼料CF、NDF 和ADF 殘?jiān)懈鞒煞趾?。?guó)內(nèi)研究已對(duì)濾袋法和ANKOM 測(cè)定方法進(jìn)行改進(jìn)[8-9]。但ANKOM原裝濾袋價(jià)格昂貴，為了節(jié)約成本，同時(shí)探索一種測(cè)定NDF、ADF 準(zhǔn)確高效的方法，本試驗(yàn)將傳統(tǒng)濾袋用于ANKOM 儀器中測(cè)定飼料中NDF、ADF，并采用濾袋法和ANKOM 纖維儀法驗(yàn)證其測(cè)定準(zhǔn)確性及可行性，為飼料中NDF、ADF 的不同測(cè)定方法分析以及飼料數(shù)據(jù)庫(kù)建立時(shí)的差異分析提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 試驗(yàn)選取13 個(gè)高纖維、低纖維飼料（小麥秸、構(gòu)樹(shù)、連翹、苜蓿、苜蓿青貯、全株玉米青貯、豆科青貯、精料、白酒糟、豆粕、玉米胚芽餅、DDGS、噴漿玉米），65℃烘干制成風(fēng)干樣品，粉碎，過(guò)40 目篩，然后將樣品充分混合均勻，密封保存以備分析測(cè)定。

飼料纖維分析濾袋（傳統(tǒng)濾袋）由北京一牛肉牛信息技術(shù)研究中心研制，進(jìn)口特制無(wú)紡布，42 mm×53 mm，孔徑38～45 μm。ANKOM 專(zhuān)用濾袋F57（ANKOM 2000i 型全自動(dòng)纖維分析儀，孔徑25 μm，美國(guó)ANKOM 科技公司）。

1.2 濾袋法測(cè)定NDF、ADF 含量

1.2.1 濾袋法測(cè)定飼料NDF 含量 ①將濾袋用2B 鉛筆編號(hào)后置于105℃烘箱中烘干，稱(chēng)重。②樣品烘干稱(chēng)重，計(jì)算水分或干物質(zhì)含量。③稱(chēng)取風(fēng)干飼料樣品0.5～0.6 g，無(wú)損轉(zhuǎn)移至濾袋中，并用塑料袋封口機(jī)封口。每個(gè)樣品做4 個(gè)平行樣。④在600 mL 高腰燒杯中加入約260 mL中性洗滌劑、2～3 滴十氫化萘、耐高溫α-淀粉酶6 mL和0.5 g 無(wú)水亞硫酸鈉，再放入3～4 個(gè)已裝好樣品的濾袋，并放置壓塊。⑤套上冷凝裝置，在調(diào)溫電爐上加熱，煮沸1 h。⑥煮沸完畢后取出濾袋，并用熱水沖洗和洗衣機(jī)甩干5 次以上，直至洗液中無(wú)泡沫，再用20 mL丙酮沖洗2 次。⑦將濾袋置于105℃烘箱中烘干，稱(chēng)重。

1.2.2 濾袋法測(cè)定飼料ADF 含量 ①同1.2.1 測(cè)定步驟①、②和③。②在600 mL 高腰燒杯中加入約260 mL酸性洗滌劑、2～3 滴十氫化萘，再放入3～4 個(gè)已裝好樣品的濾袋，并放置壓塊。③同1.2.1 測(cè)定步驟⑤。④煮沸完畢后取出濾袋，用熱水沖洗和甩干濾袋至洗液呈中性，再用少量的丙酮沖洗2 次。⑤同1.2.1 測(cè)定步驟⑦。

1.3 ANKOM 測(cè)定飼料NDF、ADF 含量 使用ANKOM專(zhuān)用濾袋F57，操作步驟遵循ANKOM 2000i 的操作說(shuō)明。每個(gè)飼料樣品做4 個(gè)平行，樣品稱(chēng)樣0.5～0.6 g。

1.4 ANKOM（傳統(tǒng)濾袋）測(cè)定飼料NDF、ADF 含量使用傳統(tǒng)濾袋，具體操作步驟遵循ANKOM 2000i 的操作說(shuō)明。每個(gè)飼料樣品做4 個(gè)平行，樣品稱(chēng)樣0.5～0.6 g。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel 2016 整理，以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差的方式表示。使用SPSS 21.0 對(duì)變量結(jié)果進(jìn)行配對(duì)樣本T 檢驗(yàn)及線性回歸分析，P＞0.05 為差異不顯著，P＜0.05 為差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 不同方法測(cè)定飼料中NDF 含量的分析 由表1 可知，經(jīng)過(guò)配對(duì)樣本T 檢驗(yàn)分析，ANKOM 纖維儀法、ANKOM 纖維儀（傳統(tǒng)濾袋）與濾袋法以及ANKOM纖維儀（傳統(tǒng)濾袋）與ANKOM 纖維儀法配對(duì)分析測(cè)定結(jié)果差異均不顯著。

2.2 不同方法測(cè)定飼料中ADF 含量的分析 由表2 可知，ANKOM 纖維儀法、ANKOM 纖維儀（傳統(tǒng)濾袋）與濾袋法經(jīng)過(guò)配對(duì)以及ANKOM 纖維儀（傳統(tǒng)濾袋）與ANKOM 纖維儀法配對(duì)分析測(cè)定結(jié)果差異均不顯著。

表1 不同方法測(cè)定飼料中的NDF 含量的分析（風(fēng)干基礎(chǔ)） %

2.3 ANKOM 測(cè)定飼料中的NDF、ADF 含量校正結(jié)果以濾袋法測(cè)定飼料中的NDF、ADF 結(jié)果校正ANKOM纖維儀法和ANKOM 纖維儀（傳統(tǒng)濾袋）測(cè)定結(jié)果，建立的回歸公式極顯著（P＜0.001），ANKOM 纖維儀法和ANKOM 纖維儀（傳統(tǒng)濾袋）測(cè)定結(jié)果與濾袋法測(cè)定結(jié)果有密切的相關(guān)性，建立的公式有意義（表3）。

3 討 論

Van Soest 等[2]提出的測(cè)定NDF、ADF 方法，雖說(shuō)仍是國(guó)際上公認(rèn)的測(cè)定NDF、ADF 準(zhǔn)確度較高的方法，但在實(shí)際測(cè)定過(guò)程中發(fā)現(xiàn)煮沸時(shí)間、消煮方式、飼料質(zhì)量、洗滌液比例、過(guò)濾時(shí)濾孔的孔徑大小以及濾膜面積等均會(huì)對(duì)飼料NDF、ADF 的測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生影響[10-12]。另外在測(cè)定過(guò)程中，每次消煮只能測(cè)定一個(gè)樣品，測(cè)定量少；消煮過(guò)程中，溫度及冷凝水調(diào)節(jié)不當(dāng)時(shí)會(huì)造成洗滌劑沸騰，且在抽濾過(guò)程中容易造成樣品損失。

表2 不同方法測(cè)定飼料中的ADF 含量的分析（風(fēng)干基礎(chǔ)） %

表3 不同方法測(cè)定飼料中NDF、ADF 含量校正結(jié)果

濾袋法是在Van Soest 法的基礎(chǔ)上，改進(jìn)得到的一種精確、簡(jiǎn)便的方法。使用濾袋法測(cè)定時(shí)可將多個(gè)濾袋放于同個(gè)燒杯中一起消煮，可以擴(kuò)大樣品測(cè)定量；在洗滌過(guò)程中省去抽濾步驟，避免抽濾耗時(shí)耗力，而濾袋也因其獨(dú)特的材質(zhì)可避免洗滌時(shí)造成的包裝破裂樣品損失。所以濾袋法測(cè)定同時(shí)可以批量測(cè)定多個(gè)樣品，既提高了試驗(yàn)測(cè)定的準(zhǔn)確度、精確度；也提高了試驗(yàn)的效率，節(jié)省時(shí)間[4]。楊喆等[13]利用濾袋法測(cè)定苜蓿草中粗纖維的含量，操作方法簡(jiǎn)單，檢測(cè)效率高，且適用于大批量測(cè)定；張晨等[14]研究表明聚酯網(wǎng)袋法與國(guó)標(biāo)法測(cè)定飼料的CF 以及濾袋法與國(guó)標(biāo)法測(cè)定飼草中NDF、ADF含量結(jié)果[15]均差異不顯著，且用濾袋法效率高、成本低，精密度優(yōu)于國(guó)標(biāo)法。

ANKOM 纖維儀法相較于濾袋法，可以解決因加熱不均造成的洗滌劑濃度變化引起的測(cè)定誤差，減少了因人為操作造成的測(cè)定誤差，且試驗(yàn)操作過(guò)程簡(jiǎn)單、安全，測(cè)定樣品量更大。Nguyen 等[16]分別按照AOAC 991.43 和AOAC 2011.43 方法用ANKOM 儀器測(cè)定日糧總纖維以及可溶性和不溶性纖維的含量無(wú)差異，表明ANKOM 儀器測(cè)定纖維含量準(zhǔn)確率較高。但ANKOM纖維儀價(jià)格昂貴，原裝濾袋價(jià)格較高。

利用濾袋法和ANKOM 纖維儀法測(cè)定飼料NDF、ADF 時(shí)，稱(chēng)取的樣品質(zhì)量均為0.5～0.6 g，相較于Van Soest 法，濾袋法和ANKOM 法省去了抽濾的過(guò)程，消除了因?yàn)槌闉V產(chǎn)生的誤差。濾袋材質(zhì)及孔徑的大小同樣會(huì)影響纖維的測(cè)定結(jié)果[17]，一般纖維測(cè)定儀會(huì)配有專(zhuān)用的纖維濾袋，ANKOM 纖維濾袋價(jià)格昂貴，來(lái)源單一，測(cè)定樣本量大時(shí)費(fèi)用較高。因此，本研究設(shè)計(jì)了利用傳統(tǒng)濾袋代替ANKOM 濾袋測(cè)定飼料NDF、ADF 含量試驗(yàn)，各操作步驟與ANKOM 纖維儀法均保持一致，所用飼料來(lái)自同一批，消除因飼料原料、操作等不同造成的測(cè)定誤差。通過(guò)與濾袋法配對(duì)樣本T 檢驗(yàn)分析試驗(yàn)結(jié)果，NDF、ADF 測(cè)定結(jié)果差異均不顯著，表明用傳統(tǒng)濾袋代替ANKOM 原裝濾袋測(cè)定飼料中的NDF、ADF 含量是可行的。在此基礎(chǔ)上，本研究建立了濾袋法校正ANKOM 法（傳統(tǒng)濾袋）測(cè)定測(cè)定飼料中的NDF、ADF 含量回歸公式，說(shuō)明ANKOM 纖維儀法和ANKOM 纖維儀（傳統(tǒng)濾袋）測(cè)定結(jié)果與濾袋法測(cè)定結(jié)果有密切的相關(guān)性，建立的公式有意義。

4 結(jié) 論

本研究通過(guò)配對(duì)樣本T 檢驗(yàn)分析，使用傳統(tǒng)濾袋代替ANKOM 濾袋測(cè)定飼料NDF、ADF 含量差異不顯著，可以用傳統(tǒng)濾袋代替ANKOM 原裝濾袋測(cè)定飼料中的NDF、ADF 含量。不同方法測(cè)定測(cè)定飼料中的NDF、ADF 含量建立的校正公式分別為NDF濾袋法=-1.46+1.064NDFANKOM（R2=0.923，P＜0.001），NDF濾袋法=0.786+0.993NDFANKOM（傳統(tǒng)濾袋）（R2=0.884，P＜0.001）；ADF濾袋法=0.545+1.026ADFANKOM（R2=0.954，P＜0.001），ADF濾袋法=1.176+0.996ADFANKOM（傳統(tǒng)濾袋）（R2=0.936，P＜0.001）。