章紅兵，簡毅科，舒芳衛(wèi)

（1.金華職業(yè)技術(shù)學(xué)院，浙江金華 321007；2.播恩生物技術(shù)股份有限公司，廣東廣州 511400；3.金華市金東區(qū)大地生態(tài)養(yǎng)殖場，浙江金華 321007）

母豬的繁殖性能和免疫功能與仔豬的生長性能和豬場經(jīng)濟(jì)效益息息相關(guān)，母豬的繁殖性能與免疫功能呈正相關(guān)[1]。在現(xiàn)代養(yǎng)殖環(huán)境下，由于養(yǎng)殖方式和營養(yǎng)等因素影響，母豬免疫功能下降和繁殖障礙問題日趨突出。特別在非洲豬瘟常態(tài)化背景下，通過飼料調(diào)控豬只免疫狀態(tài)來保護(hù)易感動物、提高抗非洲豬瘟的感染閾值尤為重要[2]。發(fā)酵飼料是指利用國家相關(guān)法規(guī)允許使用的飼料原料和微生物，通過發(fā)酵工程技術(shù)生產(chǎn)的含有微生物或其代謝產(chǎn)物的單一飼料和混合飼料。優(yōu)質(zhì)發(fā)酵飼料富含有機(jī)酸、有益菌、小肽、細(xì)菌素等多種代謝產(chǎn)物，能改善腸道健康，提升免疫功能和母豬繁殖性能[3-5]。實(shí)現(xiàn)從減抗到無抗養(yǎng)殖轉(zhuǎn)型是近年動物營養(yǎng)學(xué)的研究熱點(diǎn)，發(fā)酵飼料在調(diào)節(jié)腸道、增強(qiáng)免疫功能等方面具有廣闊的應(yīng)用前景。但發(fā)酵飼料在畜禽上應(yīng)用的研究結(jié)果并非十分一致，而且發(fā)酵飼料對于母豬繁殖性能與免疫功能的研究較少。本試驗(yàn)旨在研究發(fā)酵飼料對母豬繁殖性能、哺乳仔豬生長性能和部分免疫指標(biāo)的影響，為發(fā)酵飼料在母豬飼養(yǎng)中的應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 選擇金華市金東區(qū)大地生態(tài)養(yǎng)殖場提供的預(yù)產(chǎn)期、體重、膘情、胎次接近，臨床檢查健康，乳頭正常的長×大二元雜交母豬30 頭，隨機(jī)分成對照組與試驗(yàn)組，每組15 個重復(fù)，每個重復(fù)1 頭母豬，同一間產(chǎn)房飼養(yǎng)。對照組飼喂常規(guī)日糧，試驗(yàn)組用5%發(fā)酵飼料代替常規(guī)日糧中5%的玉米，其他日糧組成不變。正式試驗(yàn)從母豬妊娠第93 天開始至分娩后第22 天結(jié)束，正式試驗(yàn)開始前進(jìn)行7 d 預(yù)試驗(yàn)。試驗(yàn)豬高床單欄飼養(yǎng)，全漏縫地板，分餐飼喂，自由飲水，不銹鋼料槽。免疫、驅(qū)蟲、消毒、飼喂時間及飼養(yǎng)管理按豬場常規(guī)方案執(zhí)行。

1.2 日糧配方與營養(yǎng)成分 2 組日糧均為金華市金東區(qū)大地生態(tài)養(yǎng)殖場自行配制的粉料（表1），濃縮料和發(fā)酵飼料由浙江播恩生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。試驗(yàn)用發(fā)酵飼料以玉米為主要原料，篩選芽孢桿菌、酵母菌、乳酸桿菌和丁酸梭菌4 株菌，采用固態(tài)發(fā)酵工藝生產(chǎn)。發(fā)酵后有益菌≥109CFU/g、小肽≥2.0%、總酸≥5.0%。

1.3 樣品采集與指標(biāo)測定

1.3.1 乳汁樣品采集與指標(biāo)測定 于母豬分娩結(jié)束后12 h及分娩后第7、14、21 天08:00 分別收集乳汁。采集前用0.1%熱高錳酸鉀溶液擦拭并按摩母豬乳房，用75%酒精棉對乳頭進(jìn)行消毒，然后分別擠壓前、中、后乳頭，收集20 mL 乳汁于EP 管中，混勻，迅速將樣品放在-20℃冰箱中保存?zhèn)溆?。常乳樣品采集?0 min 經(jīng)母豬耳緣靜脈注射20 IU 催產(chǎn)素。檢測前經(jīng)12 000 r/min 離心15 min去除乳脂。采用酶聯(lián)免疫檢測試劑盒測定乳汁中免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）水平，試劑盒均購于南京建成生物工程研究所。

表1 日糧組成與營養(yǎng)成分

1.3.2 血清樣品采集與指標(biāo)測定 每組隨機(jī)選取10 頭體況相近的母豬，于分娩后12 h 及分娩后第7、14、21天08:00 空腹，分別用促凝真空管在耳緣靜脈采集血液10 mL，于4℃靜置20 min，3 000 r/min 離心30 min，取上層血清-20℃保存?zhèn)溆?。采用酶?lián)免疫檢測試劑盒測定血清IgA、IgG、IgM 含量；每窩隨機(jī)選取2 頭仔豬（公、母各半），前腔靜脈采集1、7、14、21 日齡仔豬血液，同樣方法測定仔豬血清IgA、IgG、IgM 含量。所有指標(biāo)嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行測定，試劑盒均購于南京建成生物工程研究所。

1.3.3 糞便樣品采集與指標(biāo)測定 分別于正式試驗(yàn)開始時、分娩當(dāng)天、試驗(yàn)結(jié)束當(dāng)天，用滅菌棉拭子采集母豬直腸新鮮糞便5 g，分裝在無菌封口袋中，-20℃保存?zhèn)溆?。采用MRS 瓊脂培養(yǎng)基測定糞便中乳酸桿菌數(shù)量，采用麥康凱瓊脂培養(yǎng)基測定糞便中大腸桿菌數(shù)量。

1.3.4 母豬便秘發(fā)生率的測定 每天早、中、晚各1 次觀察母豬排便情況和糞便性狀，記錄發(fā)生便秘的母豬頭數(shù)。便秘判斷標(biāo)準(zhǔn)：糞便成形、體積縮小，糞便水分較少，質(zhì)地變硬，成顆粒狀或圓珠狀，顏色暗灰或呈黃色或黑色。便秘發(fā)生后不采取治療措施。便秘率=（便秘母豬頭數(shù)×便秘天數(shù)）/（母豬總頭數(shù)×試驗(yàn)天數(shù)）×100%。

1.3.5 母豬繁殖性能測定 在母豬分娩當(dāng)天記錄產(chǎn)仔總數(shù)、產(chǎn)活仔總數(shù)，計(jì)算窩均產(chǎn)仔數(shù)和窩均產(chǎn)活仔數(shù)；記錄仔豬死亡頭數(shù)，計(jì)算斷奶成活率；分別對初產(chǎn)活仔和斷奶仔豬進(jìn)行稱重，記錄仔豬初生窩重（每頭活仔初生個體重之和）、斷奶窩重（每頭斷奶仔豬個體重之和），計(jì)算平均初生重、平均斷奶重和仔豬平均日增重（ADG）；記錄每頭母豬從第1 頭仔豬產(chǎn)出到胎衣全部排出的時間間隔，計(jì)算平均產(chǎn)程；觀察母豬產(chǎn)后子宮炎、乳房炎、無乳綜合征（MMA）發(fā)生情況，計(jì)算MMA 發(fā)生率；觀察母豬斷奶后發(fā)情表現(xiàn)，計(jì)算斷奶后7 d 的發(fā)情率。

MMA 判定標(biāo)準(zhǔn)：母豬產(chǎn)后不食或食欲減退，體溫升高，呼吸急促，陰門紅腫，陰道內(nèi)流出污紅色或膿性分泌物，乳房紅腫或蒼白扁平，少乳或無乳，趴臥不讓仔豬吮乳或仔豬不斷用力拱撞乳房吮乳，仔豬吮乳后下痢、消瘦。MMA 發(fā)生后采取治療措施，但不改變?nèi)占Z組成，不在日糧中添加任何功能性添加劑和藥物。

母豬發(fā)情判斷標(biāo)準(zhǔn)：食欲下降、興奮不安、爬跨其他母豬或接受其他母豬爬跨，出現(xiàn)“靜立反射”；陰戶充血、腫脹、流出透明黏液。

窩均產(chǎn)仔數(shù)=產(chǎn)仔總數(shù)（頭）/試驗(yàn)?zāi)肛i總數(shù)（頭）

窩均產(chǎn)活仔數(shù)=產(chǎn)活仔總數(shù)（頭）/試驗(yàn)?zāi)肛i總數(shù)（頭）

平均初生重=初生窩重（kg）/窩活仔數(shù)（頭）

平均斷奶重=斷奶窩重（kg）/窩斷奶仔數(shù)（頭）

ADG=（斷奶窩重-初生窩重）/試驗(yàn)天數(shù)/斷奶仔數(shù)頭數(shù)

仔豬斷奶成活率=斷奶仔豬數(shù)（頭）/產(chǎn)活仔豬數(shù)（頭）×100%

平均產(chǎn)程=所有母豬產(chǎn)程總和（h）/ 分娩母豬總數(shù)（頭）

MMA 發(fā)生率=發(fā)生MMA 母豬數(shù)（頭）/ 試驗(yàn)?zāi)肛i總數(shù)（頭）×100%

斷奶后7 d 發(fā)情率=斷奶后7 d 內(nèi)發(fā)情母豬數(shù)（頭）/試驗(yàn)?zāi)肛i總數(shù)（頭）×100%

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 應(yīng)用SAS 9.2 軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析（One-Way ANOVA），以P＜0.05 作為差異顯著的標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 發(fā)酵飼料對母豬便秘率的影響 由表2 可知，除分娩后15～21 d 對照組與試驗(yàn)組便秘率差異不顯著外，試驗(yàn)組在各階段及整個試驗(yàn)期平均便秘率較對照組均極顯著下降。表明發(fā)酵飼料能顯著改善母豬的糞便形態(tài)，降低便秘發(fā)生率。

表2 發(fā)酵飼料對母豬便秘率的影響 %

2.2 發(fā)酵飼料對母豬繁殖性能的影響 從表3 可以看出，試驗(yàn)組窩均產(chǎn)仔總數(shù)、窩均產(chǎn)活仔數(shù)、斷奶成活率和平均日增重與對照組差異不顯著，其中窩均產(chǎn)活仔數(shù)、斷奶成活率、平均日增重較對照組有提高趨勢。試驗(yàn)組的斷奶仔豬數(shù)、平均初生重、平均斷奶重和斷奶后7 d 發(fā)情率較對照組均顯著提高，平均產(chǎn)程極顯著縮短，MMA發(fā)生率極顯著降低。

表3 發(fā)酵飼料對母豬繁殖性能的影響

2.3 發(fā)酵飼料對母豬乳汁和血清中免疫球蛋白水平的影響 由表4 可知，與對照組相比，試驗(yàn)組母豬初乳中IgA 水平顯著提高、IgG 和IgM 水平極顯著提高；第7、14、21 天乳汁中IgA、IgG 和IgM 水平均極顯著提高。分娩當(dāng)天和分娩后第7、14、21 天母豬血清IgA 水平均極顯著提高，分娩當(dāng)天和分娩后第7 天母豬血清IgG水平顯著提高，分娩當(dāng)天和分娩后第7、14 和21 天母豬血清IgM 水平均顯著提高，分娩后第14、21 天母豬血清IgG 水平差異不顯著。

表4 發(fā)酵飼料對母豬乳汁和血清免疫球蛋白水平的影響 mg/mL

2.4 發(fā)酵飼料對哺乳仔豬血清中免疫球蛋白水平的影響從表5 可以看出，與對照組相比，試驗(yàn)組哺乳仔豬出生后當(dāng)天血清中IgA、IgG 和IgM 水平均極顯著提高；7日齡血清中IgA 水平顯著提高，IgG 和IgM 水平極顯著提高；14 日齡血清中IgA、IgG 和IgM 水平均極顯著提高；21 日齡血清中IgA 水平顯著提高，IgG 水平極顯著提高，IgM 水平差異不顯著。

表5 發(fā)酵飼料對哺乳仔豬血清中免疫球蛋白水平的影響 mg/mL

2.5 發(fā)酵飼料對母豬直腸微生物菌群數(shù)量的影響 由表6 可知，與對照組相比，試驗(yàn)組分娩當(dāng)天和分娩后21 d，大腸桿菌數(shù)量均極顯著減少，乳酸桿菌數(shù)量均極顯著增加。試驗(yàn)開始時，試驗(yàn)組與對照組母豬直腸大腸桿菌和乳酸桿菌數(shù)量差異不顯著，對照組整個試驗(yàn)期大腸桿菌和乳酸桿菌數(shù)量變化不顯著，但試驗(yàn)組隨著發(fā)酵飼料使用時間的延長，大腸桿菌數(shù)量顯著下降，乳酸桿菌數(shù)量極顯著增加。

表6 發(fā)酵飼料對母豬直腸微生物菌群數(shù)量的影響 ×107 CFU/g

3 討 論

3.1 發(fā)酵飼料對母豬便秘率的影響 規(guī)模化養(yǎng)豬中，母豬便秘是普遍現(xiàn)象，特別是妊娠后期和哺乳期便秘更為嚴(yán)重，而便秘會不同程度降低母豬的年生產(chǎn)力。研究表明，補(bǔ)飼發(fā)酵飼料能改善腸道內(nèi)環(huán)境、促進(jìn)腸道運(yùn)動和增加食糜流通性，改善母豬糞便形態(tài)，減少母豬便秘的發(fā)生[6-7]。本研究發(fā)現(xiàn)，給妊娠后期和哺乳期母豬補(bǔ)飼發(fā)酵飼料能顯著降低母豬便秘發(fā)生率，這可能與發(fā)酵飼料中含有較豐富的膳食纖維、維生素、有機(jī)酸、多糖及益生菌[8-9]等成分有關(guān)。高纖維飼糧可以刺激胃腸蠕動、加快食糜排空，提高回腸末端食糜的流通速度，有效降低便秘發(fā)生；有機(jī)酸能刺激腸道蠕動，丁酸能為腸壁平滑肌直接提供蠕動能量，有效降低便秘發(fā)生；益生菌可調(diào)節(jié)后腸道的微生態(tài)平衡，在腸內(nèi)定植產(chǎn)生的短鏈脂肪酸可以降低結(jié)腸內(nèi)pH，刺激腸道蠕動，提高食糜排空速度，抑制毒素的積累而促進(jìn)腸道健康，從而降低便秘發(fā)生。

3.2 發(fā)酵飼料對母豬繁殖性能的影響 研究發(fā)現(xiàn)，母豬飼喂發(fā)酵飼料可顯著提高其產(chǎn)仔數(shù)和產(chǎn)活仔數(shù)、仔豬的初生重、平均日增重和平均斷奶重[10]，改善母豬繁殖性能和仔豬生長性能[11]。其原因可能與發(fā)酵飼料可提高母乳質(zhì)量、泌乳量和仔豬自身腸道的吸收情況有關(guān)[12]。本試驗(yàn)所用的發(fā)酵飼料含有豐富的酵母菌、乳酸桿菌、芽孢桿菌和丁酸梭菌及其甘露寡糖、果寡糖、低聚殼聚糖、維生素、有機(jī)酸、小肽、細(xì)菌素、消化酶、飼料抗?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)分解酶等代謝產(chǎn)物。其中，甘露寡糖、果寡糖、低聚殼聚糖能增強(qiáng)動物機(jī)體的免疫力[13]；氨基酸、維生素、活性肽、有機(jī)酸和消化酶等能促進(jìn)腸道對養(yǎng)分的消化吸收[14]；益生菌的定植能在腸道內(nèi)形成生物屏障，抑制有害菌侵染，調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)區(qū)系，促進(jìn)腸道健康發(fā)育，提高微生物蛋白的合成和對營養(yǎng)的吸收率[15]；酵母菌和芽孢桿菌的代謝可產(chǎn)生大量乳酸，降低腸道pH，提高母豬消化率和飼料轉(zhuǎn)化率，提高乳汁產(chǎn)量和質(zhì)量，有利于仔豬的健康生長，進(jìn)而提高斷奶窩重[16]。益生菌和代謝活性產(chǎn)物共同作用于機(jī)體，參與機(jī)體生理活動和代謝調(diào)節(jié)，不僅能增強(qiáng)機(jī)體免疫能力，改善母豬健康狀態(tài)，還能提高母豬繁殖性能，促進(jìn)仔豬生長[15]。發(fā)酵飼料提高了母乳中免疫球蛋白含量，仔豬攝入母乳可促進(jìn)腸道健康發(fā)育，提高抗病力，從而提高哺乳仔豬的生長性能[17]。但本研究結(jié)果顯示，試驗(yàn)組用5%發(fā)酵飼料代替常規(guī)日糧中5%的玉米，未能提高產(chǎn)仔總數(shù)、產(chǎn)活仔數(shù)和仔豬平均日增重，這與王小明等[10]研究結(jié)果不一致。

劉江英等[18]研究表明，多菌種聯(lián)合發(fā)酵飼料能夠改善黃羽肉雞沙門氏菌感染導(dǎo)致的炎癥反應(yīng)；楊淑華等[19]研究表明，發(fā)酵乳桿菌能夠調(diào)控炎性細(xì)胞因子的表達(dá)與釋放，抑制炎性反應(yīng)的發(fā)生，對脂磷壁酸（LTA）所誘導(dǎo)的牛子宮內(nèi)膜細(xì)胞炎性損傷發(fā)揮保護(hù)作用；賴濤等[20]研究表明，給妊娠后期和哺乳期母豬補(bǔ)飼發(fā)酵蘆筍下腳料能顯著降低母豬血清白細(xì)胞介素-6（IL-6）含量；毛春瑕等[7]研究表明，發(fā)酵飼料可降低母豬初乳中炎性因子水平，但未見發(fā)酵飼料對母豬產(chǎn)后MMA 的影響。本研究表明，妊娠后期與哺乳期母豬補(bǔ)飼發(fā)酵飼料可極顯著降低MMA 發(fā)生率，可能與發(fā)酵飼料含有多種活性物質(zhì)且含量較高有關(guān)，增強(qiáng)了機(jī)體免疫能力，改善了母豬健康狀況，從而降低了便秘發(fā)生率、縮短了產(chǎn)程、減少了炎性因子。母豬便秘可能會導(dǎo)致難產(chǎn)、死胎，糞便發(fā)酵產(chǎn)生的毒素還會損害器官，引發(fā)子宮炎、乳房炎、產(chǎn)后泌乳障礙等諸多問題，這與本研究結(jié)果便秘率與MMA 發(fā)生率呈正相關(guān)一致。

蟲草真菌發(fā)酵中草藥能夠顯著縮短母豬斷奶至發(fā)情間隔，降低乏情率[21]；發(fā)酵中藥能顯著縮短母豬產(chǎn)程和斷奶至發(fā)情間隔[22]；微生態(tài)制劑飼料能提高陜北絨山羊發(fā)情率[23]，但未見發(fā)酵飼料對母豬斷奶后發(fā)情率的影響。本研究表明，發(fā)酵飼料可顯著提高斷奶后7 d發(fā)情率，這可能與發(fā)酵飼料豐富的活性代謝產(chǎn)物參與機(jī)體生理活動和代謝調(diào)節(jié)有關(guān)。

3.3 發(fā)酵飼料對免疫球蛋白水平的影響 李薛強(qiáng)等[24]研究發(fā)現(xiàn)，復(fù)合菌培養(yǎng)物或發(fā)酵飼料能顯著提高母豬血清中免疫球蛋白含量，改善母豬機(jī)體免疫功能。飼料發(fā)酵過程中大量增殖的益生菌及其代謝產(chǎn)物對母豬起到明顯的免疫促進(jìn)作用[7]。IgA、IgG、IgM 水平是反映機(jī)體免疫機(jī)能的重要指標(biāo)[25]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，圍產(chǎn)期母豬日糧中使用發(fā)酵飼料能顯著提高母豬乳汁、血清和哺乳仔豬血清中IgG、IgA、IgM 水平，且與母豬產(chǎn)程縮短、斷奶后7 d 發(fā)情率提高及MMA 發(fā)生率下降均呈正相關(guān)，這與鹿曉龍等[26]研究結(jié)果一致。母豬免疫功能提高可提高乳汁質(zhì)量，進(jìn)而提高仔豬被動免疫力。本試驗(yàn)發(fā)酵飼料中的活性氨基酸、小肽、有機(jī)酸等發(fā)酵產(chǎn)物能刺激機(jī)體對營養(yǎng)物質(zhì)的消化、吸收，調(diào)節(jié)消化道內(nèi)微生物區(qū)系，影響免疫系統(tǒng)的功能[27]。發(fā)酵飼料中的有益菌可以作為一種非特異性免疫調(diào)節(jié)因子，通過吞噬細(xì)胞活力或作為佐劑激活腸道黏膜中的巨噬細(xì)胞、T 細(xì)胞、NK 細(xì)胞、DC 細(xì)胞等，增強(qiáng)母豬自身的免疫應(yīng)答反應(yīng)[28-29]。雙歧桿菌和乳酸菌的活菌、細(xì)菌結(jié)構(gòu)性分子和基因組DNA 等均具有免疫調(diào)節(jié)功能[30]。同時，代謝產(chǎn)物中甘露聚糖等作為一種免疫促進(jìn)劑，能夠增強(qiáng)機(jī)體的非特異性免疫能力[13]。

3.4 發(fā)酵飼料對母豬直腸微生物菌群數(shù)量的影響 研究發(fā)現(xiàn)，飼喂發(fā)酵飼料能夠提高糞便中乳酸菌等益生菌數(shù)量[31]，降低大腸桿菌、沙門氏菌等有害菌數(shù)量[31-32]，調(diào)節(jié)動物體內(nèi)菌群平衡[33]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，母豬日糧中使用發(fā)酵飼料能極顯著提高母豬直腸中乳酸桿菌數(shù)量，極顯著降低大腸桿菌數(shù)量，與其他研究報道一致[34-35]。這主要是發(fā)酵飼料中的益生菌進(jìn)入動物腸道后能夠通過競爭性抑制作用阻止有害菌群在動物腸道的黏附與繁殖，促進(jìn)有益微生物的繁殖，減少潛在的致病性微生物，改善母豬腸道微生物的平衡。本試驗(yàn)結(jié)果還表明，母豬便秘的發(fā)生與直腸中有益菌數(shù)量呈負(fù)相關(guān)，與有害菌數(shù)量呈正相關(guān)。

4 結(jié) 論

本研究結(jié)果表明，母豬日糧中用5%發(fā)酵飼料代替玉米能提高母豬繁殖性能和免疫功能，降低母豬便秘發(fā)生率，減少母豬直腸大腸桿菌數(shù)量、增加乳酸桿菌數(shù)量。