張娟利，莫 放，姚 剛，楊開倫，陳如龍，楊紅建*

（1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，新疆烏魯木齊 830052；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100193；3.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，新疆烏魯木齊 830052；4.新疆天萊牧業(yè)有限責(zé)任公司，新疆博樂(lè) 833400）

我國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部（農(nóng)醫(yī)發(fā)[2017]22 號(hào)）規(guī)定在2020 年底前包括抗生素在內(nèi)的“藥物性飼料添加劑”將全面退出，飼料端“禁抗”，養(yǎng)殖“減抗、限抗”已成為大勢(shì)所趨。飼用益生菌（Probiotics），又稱直接飼用微生物（Direct-fed microbials），因其在飼料或飲水中添加后可改善胃腸道菌群平衡并對(duì)宿主動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育及機(jī)體健康起到有益作用而備受養(yǎng)殖業(yè)高度關(guān)注[1]?？莶菅挎邨U菌（Bacillus subtilis）作為飼用益生菌之一，可在消化道內(nèi)存活，不具有致病性，并因其能夠形成抗寒和耐熱的孢子，使其在日糧中添加使用時(shí)活性十分穩(wěn)定[2-3]?？莶菅挎邨U菌在水產(chǎn)、豬、雞等單胃動(dòng)物上具有抑制腸道有害菌、增強(qiáng)機(jī)體免疫、提高抗氧化力、促生長(zhǎng)等方面的有益功效[4-7]?？莶菅挎邨U菌在肉羊上的飼用功效已有研究報(bào)道[8-10]；在斷奶前犢牛日糧中添加納豆芽孢桿菌可以提高機(jī)體免疫力[11]；日糧添加枯草芽孢桿菌（3.0×109活菌數(shù)/天/頭）可提高產(chǎn)奶量與乳固形物產(chǎn)量，對(duì)養(yǎng)分消化率無(wú)顯著影響[12]。枯草芽孢桿菌在肉牛上的飼用功效鮮有報(bào)道。新疆褐牛是我國(guó)自20 世紀(jì) 30 年代起歷經(jīng)50 多年育成的乳肉兼用品種，廣泛分布于新疆伊犁、塔城、博樂(lè)等地區(qū)[13]。隨消費(fèi)需求的不斷增加，肉牛養(yǎng)殖業(yè)已經(jīng)被列為新疆維吾爾自治區(qū)草食畜牧業(yè)優(yōu)勢(shì)主導(dǎo)產(chǎn)業(yè)之一，如何提高新疆褐牛增重速度與飼料轉(zhuǎn)化效率，繼而縮短育肥出欄時(shí)間一直頗受關(guān)注。在肉牛育肥實(shí)踐中，許多規(guī)?；蕡?chǎng)通常將不同初始月齡的肉牛分為不同進(jìn)欄時(shí)間、不同圈欄批次、采用不同飼料配方進(jìn)行育肥。本試驗(yàn)旨在研究日糧添加單一枯草芽孢桿菌對(duì)新疆博樂(lè)地區(qū)13 月齡新疆褐牛生長(zhǎng)性能與養(yǎng)分消化率的影響，為飼用益生菌在肉牛飼養(yǎng)實(shí)踐中的應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 枯草芽孢桿菌制劑 枯草芽孢桿菌制劑為褐色粉劑，粒徑≤80 目，水分≤10%，有效活菌數(shù)≥100 億 CFU/g，粗灰分≤10%。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)管理 挑選體重（313.23±2.86）kg 的13月齡新疆褐牛與哈薩克牛雜交F1代公牛30 頭，隨機(jī)分為對(duì)照組與枯草芽孢桿菌添加組（試驗(yàn)組），在具有遮陽(yáng)棚和配有自由飲水槽的開放式隔欄中采用全混合日糧（TMR）方式在每日10:00 和19:30 分2 次進(jìn)行飼喂，飼養(yǎng)期為90 d。

在試驗(yàn)開始前進(jìn)行牛只稱重記錄，在TMR 投放后，試驗(yàn)組試驗(yàn)牛TMR 中按照每100 kg 平均體重添加10 g枯草芽孢桿菌粉劑，13 月齡肉牛TMR 原料組成與營(yíng)養(yǎng)成分見(jiàn)表1。試驗(yàn)期間，飲水槽每3 d 清理1 次，保證試驗(yàn)牛只清潔飲水。

1.3 測(cè)定指標(biāo)與方法 在飼養(yǎng)試驗(yàn)期間，以圈欄為單位在地面槽位均勻投料后，記錄TMR 攪拌車投料總量，根據(jù)每頭肉牛所占槽位長(zhǎng)度，記錄每天各頭牛所在槽位的平均投料量，于次日晨飼前稱量各槽位剩料量，測(cè)算每頭肉牛個(gè)體采食量。每7 d 采集TMR 樣品，測(cè)定水分含量，并用使用賓州篩（2012 版：第1 層孔徑19 mm，第2 層8 mm，第3 層1.18 mm）對(duì)投放的新鮮TMR 以及次日清晨剩料進(jìn)行顆粒分布現(xiàn)場(chǎng)測(cè)定；每間隔30 d 在晨飼前對(duì)試驗(yàn)牛進(jìn)行稱重，計(jì)算平均日增重（ADG）、干物質(zhì)采食量（DMI）和平均耗料增重比（F/G），F(xiàn)/G=DMI/ADG。在稱重結(jié)束后，從對(duì)照組與試驗(yàn)組各選取6 頭試驗(yàn)牛，采用點(diǎn)收糞法連續(xù)7 d 于每日08:00—09:00、14:00—15:00 和20:30—21:30 收集糞樣，采用糞篩（上層：孔徑4.762 5 mm；中層：孔徑2.381 25 mm；下層：1.587 5 mm）對(duì)糞樣進(jìn)行粒度分析。除此之外，將每只牛的糞樣混合后取500 g 左右，加入10%硫酸后，放入烘箱65℃烘48 h 至風(fēng)干，回潮48 h 后粉碎，過(guò)1 mm篩用塑料封口袋密封保存。參照AOAC 方法[14]，分析測(cè)定TMR 和糞便樣品中有機(jī)物（OM）、粗蛋白質(zhì)（CP）含量；參照范氏纖維分析法[15]，利用實(shí)驗(yàn)室自主研發(fā)的DFA-1 型分布式纖維測(cè)定儀測(cè)定中性洗滌纖維（NDF）和酸性洗滌纖維（ADF）、酸不溶性灰分（AIA）含量，按照AIA 內(nèi)標(biāo)法計(jì)算日糧養(yǎng)分表觀消化率。

表1 13 月齡肉牛TMR 原料組成及營(yíng)養(yǎng)成分（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 利用SAS 9.4 軟件Import 過(guò)程讀入經(jīng)整理后的Excel 數(shù)據(jù)，采用GLM 過(guò)程對(duì)13 月齡肉牛飼養(yǎng)試驗(yàn)數(shù)據(jù)分別進(jìn)行方差分析，計(jì)算最小二乘法均值標(biāo)準(zhǔn)誤（SEM），利用LSMEANS 語(yǔ)句采用Tukey 檢驗(yàn)針對(duì)對(duì)照組與試驗(yàn)組肉牛所有測(cè)試指標(biāo)分別進(jìn)行最小二乘法均值差異性比較，顯著水平設(shè)定為P＜0.05。

2 結(jié)果

2.1 日糧添加枯草芽孢桿菌對(duì)13 月齡肉牛TMR 剩料粒度分布的影響 由表2 所示，13 月齡肉牛在0～90 d 不同飼養(yǎng)階段，TMR 投料賓州篩各層分布差異不顯著。

如表3 所示，試驗(yàn)組TMR 剩料賓州篩各層比例與對(duì)照組未呈顯著差異。與0～30 d 相比，30～90 d 賓州篩第1 層與底層TMR 剩料比例呈下降趨勢(shì)，而賓州篩第3 層呈升高現(xiàn)象，表明育肥后期肉牛對(duì)日糧中19 mm 長(zhǎng)度以上長(zhǎng)粗飼料進(jìn)食量進(jìn)食比例增加。

表2 肉牛不同飼養(yǎng)階段TMR 投料粒度分布比例 %

表3 日糧中添加枯草芽孢桿菌對(duì)13 月齡肉牛不同飼養(yǎng)階段TMR 剩料分布比例 %

2.2 日糧添加枯草芽孢桿菌對(duì)13 月齡肉牛育肥增重性能與養(yǎng)分消化率的影響 如圖1 所示，飼養(yǎng)30 d 后試驗(yàn)組肉牛平均體重開始超過(guò)對(duì)照組，兩組肉牛體重均呈線性增長(zhǎng)模式。

圖1 日糧添加枯草芽孢桿菌對(duì)13 月齡肉牛體重變化的影響

從表4 可知，隨飼養(yǎng)天數(shù)增加，DMI 均呈升高趨勢(shì)，但在90 d 飼養(yǎng)期內(nèi)試驗(yàn)組與對(duì)照組均未呈現(xiàn)顯著差異；13 月齡肉牛經(jīng)90 d 飼養(yǎng)后，試驗(yàn)組ADG 顯著高出對(duì)照組 23%，試驗(yàn)組F/G 較對(duì)照組下降了18.8%（P＜0.05）。

如表5 所示，雖然13 月齡肉牛在不同生長(zhǎng)期內(nèi)OM、CP、NDF、ADF 表觀消化率未呈現(xiàn)顯著差異，但全期平均消化率從數(shù)值上試驗(yàn)組與對(duì)照組相比分別提高了1.3、6.0、4.3、3.0 個(gè)百分點(diǎn)（P＞0.05）。

表4 日糧中添加枯草芽孢桿菌對(duì)13 月齡肉牛育肥生長(zhǎng)性能的影響

表5 日糧中添加枯草芽孢桿菌對(duì)13 月齡肉牛養(yǎng)分表觀消化率的影響 %

由表6 和圖2 可知，試驗(yàn)組與對(duì)照組相比，糞篩上層比例由12.99%升高至18.18%，中層篩比例由38.96%下降至27.27%，而下層曬糞便比例由48.05%升高至54.55%。

表6 日糧中添加枯草芽孢桿菌對(duì)13 月齡肉牛育肥至第90 天數(shù)時(shí)糞便粒度分布的影響 %

圖2 日糧添加枯草芽孢桿菌對(duì)13 月齡肉牛育肥至第90 天數(shù)時(shí)糞篩分析對(duì)比圖

3 討 論

隨著我國(guó)畜牧業(yè)的快速發(fā)展，TMR 飼喂方式已經(jīng)在許多規(guī)?；膛ｐB(yǎng)殖場(chǎng)得到廣泛應(yīng)用，并正逐步應(yīng)用于肉牛飼養(yǎng)實(shí)踐中。在TMR 應(yīng)用實(shí)踐中，賓州飼料分級(jí)篩已經(jīng)成為評(píng)價(jià)TMR 制作質(zhì)量的重要評(píng)價(jià)工具，在奶牛飼養(yǎng)實(shí)踐中得到廣泛應(yīng)用，但在肉牛上研究應(yīng)用報(bào)道較少。本研究中，日糧添加枯草芽孢桿菌雖然沒(méi)有改變TMR 剩料在賓州篩各層的分布比例，但隨飼養(yǎng)天數(shù)的增加，TMR 剩料在賓州篩第1 層和底層比例出現(xiàn)下降，表明育肥后期肉牛對(duì)日糧中長(zhǎng)度大于19 mm 的長(zhǎng)粗飼料進(jìn)食能力提高，而這部分比例的升高則有助于提高反芻咀嚼次數(shù)，促進(jìn)唾液的分泌，使瘤胃pH 處于正常范圍，避免發(fā)生酸中毒。

枯草芽孢桿菌進(jìn)入腸道后可促進(jìn)多種消化酶的產(chǎn)生，繼而促進(jìn)日糧養(yǎng)分吸收利用[16]。在本研究中，日糧添加枯草芽孢桿菌雖然沒(méi)有提高肉牛DMI，但對(duì)13月齡肉牛日糧OM、CP、NDF、ADF 消化率均有不同程度提高，這可能得益于枯草芽孢桿菌添加后促進(jìn)了宿主胃腸道消化酶分泌能力的提高。Moreira 等[17]在對(duì)體重315 kg 左右當(dāng)?shù)厝庥闷贩N公牛日糧中每頭每天添加10 g 枯草芽孢桿菌（低于本試驗(yàn)劑量）后，經(jīng)過(guò)118 d育肥飼養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)枯草芽孢桿菌可顯著提高小腸絨毛高度，并提高了肉牛屠宰后大理石花紋評(píng)分，間接表明日糧添加枯草芽孢桿菌可以提高養(yǎng)分的消化吸收能力，并改善牛肉品質(zhì)。除本研究外，國(guó)內(nèi)尚未見(jiàn)日糧添加單一枯草芽孢桿菌對(duì)肉牛日糧養(yǎng)分吸收方面的報(bào)道。

在肉牛日糧配方與營(yíng)養(yǎng)水平不變情況下，本研究發(fā)現(xiàn)日糧添加中按照每100 kg 平均體重添加10 g 枯草芽孢桿菌，經(jīng)過(guò)90 d 短期育肥，肉牛育肥體重呈線性增長(zhǎng)模式，ADG 較對(duì)照組提高了23%，F(xiàn)/G 下降了18.8%，表明日糧添加枯草芽孢桿菌在沒(méi)有影響日糧DMI 的情況下，仍能提高ADG，顯著提高飼料轉(zhuǎn)化效率。Moreira 等[17]研究發(fā)現(xiàn)10 g/（頭·d）枯草芽孢桿菌對(duì)肉牛增重沒(méi)有效果，除受肉牛品種差異影響外，可能是其添加劑量偏低造成的。從另一方面，提示飼用枯草芽孢桿菌在肉牛育肥中應(yīng)用時(shí)其添加劑量不宜過(guò)低。

高堂亮[18]研究發(fā)現(xiàn)，總活菌數(shù)為5×1010CFU/（頭·d）的復(fù)合益生菌（枯草芽孢桿菌、地衣芽胞桿菌和植物乳酸菌發(fā)酵混合制備）可提高新疆褐牛雜交后代公牛平均采食量ADFI（+14.54%）、ADG（+32.58%），F(xiàn)/G 降低了13.58%，日糧DM、CP、NDF、ADF 表觀消化率分別提高了3.3%、1.9%、4.4%、5.1%。該研究飼養(yǎng)期雖然只有30 d，但養(yǎng)分消化率提高幅度與本研究結(jié)果接近，ADG 也有明顯提高，但飼料轉(zhuǎn)化效率提高幅度明顯低于本研究結(jié)果（＞18.8%）。與賓州篩在TMR 日糧制作質(zhì)量評(píng)價(jià)應(yīng)用相比，糞便分離篩可根據(jù)不同篩孔直徑對(duì)牛糞便顆粒進(jìn)行分層比例分析，并以糞便在每層上殘留物多少間接反映日糧養(yǎng)分消化情況，目前已經(jīng)在奶牛養(yǎng)殖中得到應(yīng)用[19]，但在肉牛養(yǎng)殖中尚無(wú)糞篩分析研究報(bào)道。本研究發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，日糧添加枯草芽孢桿菌的試驗(yàn)組糞篩第2 層減少15.76%，第3 層則提高了14.40%，這也間接說(shuō)明日糧添加枯草芽孢桿菌可提高肉牛對(duì)日糧養(yǎng)分消化能力。上述結(jié)果表明，將枯草芽孢桿菌與其他適宜益生菌制備成復(fù)合益生菌，添加到肉牛日糧中也可以提高養(yǎng)分的消化率，繼而提高肉牛的增重性能。

4 結(jié) 論

本試驗(yàn)條件下，日糧添加枯草芽孢桿菌，雖然未顯著提高13 月齡新疆褐牛干物質(zhì)采食量，但肉牛仍呈線性育肥增長(zhǎng)模式，ADG 顯著提高了23%，飼料轉(zhuǎn)化效率提高了18.8%。綜合日糧養(yǎng)分消化率與糞篩分析結(jié)果表明，日糧添加枯草芽孢桿菌可通過(guò)改善日糧養(yǎng)分消化，提高新疆褐牛生長(zhǎng)速度，進(jìn)而在縮短育肥出欄時(shí)間方面具有應(yīng)用價(jià)值。