聞治國，吳學(xué)壯，齊志國，李復(fù)煌*，楊培龍*

（1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所，農(nóng)業(yè)部飼料生物技術(shù)重點實驗室，北京 100081；2.安徽科技學(xué)院動物科學(xué)學(xué)院，安徽蚌埠 233100；3.北京市畜牧總站，北京 100107）

橡膠籽是天然橡膠種植業(yè)的副產(chǎn)物，種仁含油量為40%～50%，資源豐富且廉價，但長期以來，橡膠籽并沒有得到有效開發(fā)利用[1]。橡膠籽經(jīng)脫殼壓榨后產(chǎn)生橡膠籽粕和橡膠籽油（Rubber seed oil，RSO）。RSO 中脂肪酸主要含有亞油酸（C18:2）、亞麻酸（C18:3）、油酸（C18:1）、硬脂酸（C18:0）和棕櫚酸（C16:0），其中多不飽和脂肪酸占65.77%，且亞麻酸的含量高達(dá)28.72%，是豆油3～4 倍[2]。RSO 沒有毒性[3]，具有抗氧化功能[4]，對小鼠生長發(fā)育沒有負(fù)作用[5]。在畜禽上，RSO 能夠提高牛奶ω-3 多不飽和脂肪酸含量[6]、增強(qiáng)奶牛免疫功能[7]以及提高羅非魚腸道消化酶活性[8]。前期研究發(fā)現(xiàn)，日糧中添加4% RSO 能夠促進(jìn)蛋雞產(chǎn)蛋性能，顯著提高蛋黃α-亞麻酸（ALA）、二十二碳六烯酸（DHA）和二十碳五烯酸（EPA）等ω-3 多不飽和脂肪酸含量，飼喂8 周，整枚雞蛋DHA 含量較對照組提高了45.6%[9]。動物體內(nèi)蓄積的ω-3 多不飽和脂肪酸在機(jī)體抗炎上發(fā)揮重要作用。DHA 和EPA 能置換細(xì)胞膜磷脂中的花生四烯酸（AA，n-6）、競爭環(huán)氧化酶（COX）和脂氧合酶從而減少來源于AA 的炎性介質(zhì)產(chǎn)生，減輕炎癥反應(yīng)[10]，同時能抑制TLR4/NF-κB炎癥通路中TLR4和NF-κB等相關(guān)基因的表達(dá)[11-12]，降低TNF-α、IL-1β和IL-6 等炎癥因子的生成[13-14]。RSO 是一種典型的富含ω-3 多不飽和脂肪酸的木本植物油，并能促進(jìn)雞蛋ω-3 多不飽和脂肪酸蓄積，但RSO 能否緩減蛋雞炎癥反應(yīng)迄今未見報道。因此，本研究通過脂多糖（LPS）刺激蛋雞產(chǎn)生炎癥反應(yīng)，并進(jìn)一步研究RSO對LPS 刺激蛋雞產(chǎn)蛋性能、腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)和免疫功能的影響，為RSO 在蛋雞日糧中應(yīng)用以及利用RSO 緩減蛋雞炎癥反應(yīng)提供理論和方法依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 RSO 由西雙版納華坤生物科技有限責(zé)任公司提供；LPS 購自國藥集團(tuán)。羅曼青年蛋雞（15 周齡）購自北京大發(fā)正大有限公司，飼喂至產(chǎn)蛋高峰期（25周齡）。

1.2 試驗設(shè)計及動物 本試驗采用2×2 因子完全隨機(jī)試驗設(shè)計，將192 只25 周齡健康、產(chǎn)蛋率和體形相近的羅曼蛋雞隨機(jī)分為4 組，每組4 個重復(fù)，每重復(fù)12 只雞，每個重復(fù)2 個雞籠，每個雞籠6 只雞，試驗期4 周。對照組飼喂常規(guī)基礎(chǔ)日糧，LPS 組（模型組）飼喂基礎(chǔ)日糧并攻毒LPS，RSO 組飼喂RSO 日糧，RSO+LPS 組飼喂橡膠籽油日糧并攻毒LPS。LPS 攻毒分別在試驗第19、21、23、25、27 天09:00 腹腔注射LPS（1 mg/kg體重，用生理鹽水溶解），對照組和RSO 組注射等量的生理鹽水。本試驗經(jīng)中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所實驗動物倫理委員會批準(zhǔn)。

1.3 試驗日糧 試驗日糧采用玉米-豆粕型基礎(chǔ)日糧，參照我國《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》（NY/T 33-2004）和美國NRC（1994），在試驗日糧中添加4%橡膠籽油，并通過調(diào)節(jié)飼料原料的比例使試驗日糧營養(yǎng)水平完全滿足產(chǎn)蛋高峰期蛋雞營養(yǎng)需要，試驗日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.4 飼養(yǎng)管理 采用封閉式雞舍，2 層階梯式籠養(yǎng)，同一處理各重復(fù)均勻分布于雞舍不同位置的上下層，以消除環(huán)境、位置對測定指標(biāo)的影響；自然光照與人工光照相結(jié)合，保證每日光照16 h，光照強(qiáng)度10～20 lx；正壓橫向通風(fēng)，屋頂進(jìn)風(fēng)，溫度25～30℃，相對濕度50%～75%；飼料為干粉料，每日布料2 次，勻料4 次，自由采食，乳頭式飲水器自由飲水；每日撿蛋1 次；每5 d 清糞、雞舍消毒1 次，按照常規(guī)防疫程序進(jìn)行防疫。

1.5 測定指標(biāo)與方法

1.5.1 生產(chǎn)性能 試驗期間，每天以重復(fù)為單位，記錄每個重復(fù)的總蛋重、雞蛋數(shù)，每周清料1 次，最后計算整個試驗期的產(chǎn)蛋率、總產(chǎn)蛋量、平均蛋重、只日產(chǎn)蛋量、平均日采食量及料蛋比。

1.5.2 血液免疫生理生化指標(biāo) 試驗結(jié)束時，每個重復(fù)挑選接近平均體重的蛋雞2 只，采集少許全血于5 mL EDTA 抗凝管，采用德國ABX 血細(xì)胞分析儀（Pentra120）測定白細(xì)胞計數(shù)（WBC）、紅細(xì)胞計數(shù)（RBC）、血紅蛋白濃度（HGB）、單核細(xì)胞絕對值（MON）、淋巴細(xì)胞絕對值（LYM）、中性粒細(xì)胞絕對值（MEUT）和嗜堿性粒細(xì)胞絕對值（BAS）。同時，采集血液置于10 mL 真空采血管（內(nèi)含肝素鈉）內(nèi)，室溫靜置4 h 后，3 500 r/min 離心10 min 制備血漿，分裝于1.5 mL EP管中，-20℃下保存?zhèn)錅y。然后使用試劑盒測定谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、白細(xì)胞介素6（IL-6）、腫瘤壞死因子α（TNF-α），試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

表1 日糧組成及營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.5.3 炎癥基因mRNA 表達(dá)分析 采集血液后的蛋雞，用手術(shù)剪刀打開腹腔，無菌操作取出少許肝臟、脾臟和回腸中段組織，分別置于滅菌的1.5 mL 凍存管中，立即保存于-196℃液氮速凍后轉(zhuǎn)移到-80℃冰箱中，采用SYBR Green 實時熒光定量RT-PCR 法測定IL-6、IL-1β、TLR4、NF-κB基因mRNA 表達(dá)量，并用核酸測定儀（Nanodrop?ND-2000）測定總RNA 純度和濃度，然后應(yīng)用反轉(zhuǎn)錄試劑盒（TaKaRa 公司，日本）獲取cDNA，-80 ℃保存待用。按照SYBR Premix Ex TaqTM（TaKaRa 公司，日本）試劑盒說明書進(jìn)行熒光定量PCR，反應(yīng)儀器為7500 熒光檢測系統(tǒng)（Applied Biosystems）。PCR 擴(kuò)增完成后用熔解曲線和瓊脂糖凝膠電泳法分析驗證產(chǎn)物的特異性。炎癥基因IL-6、IL-1β、TLR4、NF-κB和內(nèi)參基因GAPDH的引物序列見表2，基因表達(dá)的結(jié)果采用2-△△CT法進(jìn)行分析。

表2 引物序列及序列號

1.5.6 腸道形態(tài)結(jié)構(gòu) 用手術(shù)刀取回腸中段約2 cm 置于10% 福爾馬林固定24 h 后，經(jīng)浸洗、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、染色等步驟制作組織切片，切片厚度為6 μm，經(jīng)蘇木精-伊紅（HE）染色后，在顯微鏡下觀察組織病理學(xué)形態(tài)變化，并隨機(jī)選取完整、走向平直的10 根絨毛，應(yīng)用圖像分析軟件（Image pro-plus 6.0）分析絨毛頂端到隱窩入口處的長度（絨毛高度）和絨毛基部到黏膜下層長度（隱窩深度），然后計算絨毛高度和隱窩深度比值。

1.6 統(tǒng)計分析 試驗數(shù)據(jù)采用SAS 9.0 中Two-Way ANOVA進(jìn)行統(tǒng)計分析，當(dāng)RSO 和LPS 交互作用顯著時，采用LSD 法進(jìn)行多重比較，結(jié)果以平均值和標(biāo)準(zhǔn)誤（SEM）表示，以P＜0.05 作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 RSO 對LPS 刺激蛋雞產(chǎn)蛋性能的影響 由表3 可知，與對照組相比，日糧中添加RSO 能夠提高蛋雞產(chǎn)蛋率、總產(chǎn)蛋量、只日產(chǎn)蛋量和平均日采食量（P＜0.05），LPS 攻毒后蛋雞產(chǎn)蛋率、總產(chǎn)蛋量、只日產(chǎn)蛋量和平均日采食量降低（P＜0.05）；與LPS 組相比，RSO+LPS組蛋雞產(chǎn)蛋率、總產(chǎn)蛋量、只日產(chǎn)蛋量、平均日采食量升高（P＜0.05）；添加RSO 和LPS 攻毒均對平均蛋重和料蛋比無顯著作用；RSO 和LPS 在蛋雞產(chǎn)蛋性能上不存在顯著交互作用。

2.2 RSO 對LPS 刺激蛋雞血液免疫生理生化指標(biāo)的影響由表4 可知，與對照組相比，LPS 攻毒能夠提高蛋雞血液WBC、LYM、AST、IgA、IL-6 和TNF-α水平（P＜0.05），日糧中添加RSO 能夠降低蛋雞血液IgA、AST、IL-6 和TNF-α水平（P＜0.05）；與LPS 組相比，RSO+LPS 組蛋雞血液IgA、AST、IL-6 和TNF-α水平降低（P＜0.05）；日糧RSO 和LPS 攻毒在血液IgA 和TNF-α上存在交互作用（P＜0.05），添加RSO 能夠緩減蛋雞LPS 攻毒誘導(dǎo)的IgA 和TNF-α升高情況；蛋雞血液其他免疫生理生化指標(biāo)變化不大（P＞0.05）。

2.3 RSO 對LPS 刺激蛋雞免疫器官基因mRNA 表達(dá)的影響 由表5 可知，與對照組相比，LPS 攻毒提高蛋雞回腸、肝臟和脾臟TLR4、NF-κB、IL-1β和IL-6基因mRNA 表達(dá)量（P＜0.05），日糧中添加RSO 能夠降低肝臟和脾臟TLR4、NF-κB、IL-1β和IL-6基因以及回腸TLR4、IL-1β和IL-6基因mRNA 表達(dá)量（P＜0.05）；與LPS 組相比，RSO+LPS 組蛋雞回腸、肝臟和脾臟IL-6、IL-1β和TLR4基因mRNA 表達(dá)量降低（P＜0.05）；RSO 和LPS 在回腸TLR4和脾臟IL-1β基因上存在交互作用（P＜0.05），同時在肝臟IL-6、NF-κB和TLR4基因上有互作效應(yīng)（P＜0.05）。表明日糧中添加RSO能夠降低LPS 刺激蛋雞組織TLR4/NF-κB信號通路中關(guān)鍵基因表達(dá)。

2.4 RSO 對LPS 刺激蛋雞回腸形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響 由圖1可知，與對照組相比，LPS 組蛋雞回腸組織絨毛單層柱狀上皮細(xì)胞脫落、斷裂，杯狀細(xì)胞結(jié)構(gòu)消失，損傷累積隱窩淺層，黏膜層及黏膜下層結(jié)構(gòu)均正常；RSO 添加組蛋雞回腸組織絨毛上皮細(xì)胞的單層柱狀上皮細(xì)胞排列規(guī)則有序，杯狀細(xì)胞數(shù)量豐富，隱窩結(jié)構(gòu)清晰，黏膜層及黏膜下層結(jié)構(gòu)均正常，小腸結(jié)構(gòu)整體較正常。由表6可知，用圖像軟件分析后發(fā)現(xiàn)，與對照相比，LPS 組蛋雞回腸隱窩深度提高（P＜0.05），絨毛高度和絨毛高度/隱窩深度降低（P＜0.05），RSO 組蛋雞回腸絨毛高度提高，絨毛高度/隱窩深度提高（P＜0.05）。與LPS 組相比，RSO+LPS 組蛋雞回腸絨毛高度升高，隱窩深度降低（P＜0.05）。結(jié)果表明日糧中添加RSO 能有效維持LPS 刺激下蛋雞回腸組織形態(tài)結(jié)構(gòu)。

表3 RSO 對LPS 刺激蛋雞產(chǎn)蛋性能的影響

表4 RSO 對LPS 刺激蛋雞血液免疫生理生化指標(biāo)的影響

3 討 論

3.1 RSO 對LPS 刺激蛋雞產(chǎn)蛋性能的影響 前期研究發(fā)現(xiàn)，蛋雞日糧中添加4% RSO 蛋雞產(chǎn)蛋率、日產(chǎn)蛋量和采食量較對照組分別提高了6.52%、5.12%和9.03%[9]。本試驗中，日糧中添加4% RSO 能顯著提高蛋雞采食量，同時產(chǎn)蛋量和日產(chǎn)蛋量有升高的趨勢，與前期研究結(jié)果一致。關(guān)于ω-3 不飽和脂肪酸植物油對蛋雞產(chǎn)蛋性能影響的研究一直是爭論的話題。Petrovi? 等[15]研究發(fā)現(xiàn)1%亞麻籽油能夠提高雞蛋重量，進(jìn)一步添加會降低蛋重。而有的研究發(fā)現(xiàn)蛋雞飼料中添加ω-3 不飽和脂肪酸植物油（如橄欖油[16]和榛子油[17]）對蛋雞產(chǎn)蛋性能無顯著影響，甚至一些研究結(jié)果顯示蛋雞產(chǎn)蛋性能與日糧中ω-3 不飽和脂肪酸植物油含量負(fù)相關(guān)[18-19]。造成這些差異的原因可能與日糧成分、蛋雞品種、營養(yǎng)水平等不同相關(guān)。LPS 又稱內(nèi)毒素，是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁的成分，能夠成功誘導(dǎo)家禽產(chǎn)生炎癥反應(yīng)，并降低家禽生產(chǎn)性能[20]。本試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，LPS 組蛋雞產(chǎn)蛋率、產(chǎn)蛋量和料蛋比均顯著降低；與LPS 組相比，RSO+LPS 組蛋雞產(chǎn)蛋率和采食量顯著提高，這說明RSO 能夠緩減LPS 刺激導(dǎo)致的蛋雞生產(chǎn)性能降低的現(xiàn)象，主要原因可能是RSO 能夠抑制蛋雞肝臟和脾臟等免疫器官炎癥基因mRNA 表達(dá)，進(jìn)而緩減蛋雞機(jī)體炎癥反應(yīng)，血液免疫因子分泌量降低，同時維持了蛋雞腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)，以此來保持蛋雞正常生長發(fā)育。

表5 RSO 對LPS 刺激蛋雞組織基因mRNA 表達(dá)量的影響

圖1 RSO 對LPS 刺激蛋雞回腸組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

3.2 RSO 對LPS 刺激蛋雞血液免疫生理生化指標(biāo)的影響血液生理生化指標(biāo)的含量和變化規(guī)律是反映動物機(jī)體新陳代謝的重要指標(biāo)。機(jī)體免疫應(yīng)答過程中，白細(xì)胞是發(fā)揮作用的最主要免疫細(xì)胞，是衡量機(jī)體免疫反應(yīng)的重要指標(biāo)，能反映機(jī)體免疫功能水平的高低。本試驗中，與對照組相比，LPS 組蛋雞血液WBC 和LYM 顯著升高；與LPS 組相比，RSO+LPS 組血液WBC 和LYM 顯著降低，表明RSO 能夠提高LPS 刺激蛋雞的免疫能力。Gandhi 等[21]研究發(fā)現(xiàn)，與花生油組相比，橡膠籽油組小鼠血液WBC 含量顯著降低。血漿轉(zhuǎn)氨酶檢查是評估肝細(xì)胞損傷的重要途徑，而血漿免疫球蛋白含量是體現(xiàn)動物機(jī)體免疫功能的重要標(biāo)志。LPS 誘導(dǎo)蛋雞產(chǎn)生炎癥反應(yīng)，肝臟細(xì)胞通透性增加，血漿AST 含量顯著升高，與對照組相比，RSO 組蛋雞血液AST 含量降低，與張新黨等[8]在羅非魚上的研究結(jié)果相反，該研究顯示添加橡膠籽油后羅非魚血漿和肝臟ALT 和AST 活性無顯著差異。IgA 是機(jī)體黏膜局部抗感染免疫的主要抗體，LPS 誘導(dǎo)蛋雞血漿IgA 含量升高，添加RSO 后蛋雞血漿IgA 含量顯著下降，血漿IL-6與IgA 趨勢相同，表明日糧RSO 能夠緩解蛋雞LPS 誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。Pi 等[7]研究發(fā)現(xiàn)，奶?；A(chǔ)日糧中添加RSO，血漿IgA 含量無明顯變化，與本試驗結(jié)果相反，原因可能是家禽與反芻動物生理代謝上存在差異。

TNF-α是一種單核因子，主要由活化的巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，主要作用為抗腫瘤和抗感染，LPS 是TNF-α的激活劑。研究發(fā)現(xiàn)，ω-3 多不飽和脂肪酸能夠抑制T 淋巴細(xì)胞增殖分化，并且在基因水平上降低炎癥因子表達(dá)，降低炎癥因子分泌，起到抗炎和促進(jìn)炎癥消退的作用[22]。本試驗中，RSO 能夠發(fā)揮ω-3 多不飽和脂肪酸抗炎的作用，日糧添加RSO 能降低LPS 刺激蛋雞血漿TNF-α水平。在LPS 誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷模型中，DHA 代謝產(chǎn)物能夠抑制中性粒細(xì)胞的浸潤和黏附，降低炎癥因子TNF-α和IL-6的生成，與本試驗中RSO 緩解蛋雞LPS 誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)結(jié)果一致。同時，本試驗對照組和RSO 組之間血漿TNF-α水平無顯著差異，與Pi 等[7]在奶牛上的研究結(jié)果相反，該結(jié)果顯示，基礎(chǔ)日糧中添加RSO 后，奶牛血漿TNF-α水平顯著下降。在其他ω-3 多不飽和脂肪酸研究中，不同劑量魚油補(bǔ)充能夠降低中老年人血液C-反應(yīng)蛋白水平，但對TNF-α和IL-6 含量無顯著影響[23]。RSO 作為一種ω-3 多不飽和脂肪酸植物油，可能通過影響LPS 刺激蛋雞肝臟和脾臟中NF-κB和TLR4基因表達(dá)，進(jìn)而調(diào)控TLR4/NF-κB信號通路中下游炎癥因子表達(dá)，從而調(diào)節(jié)炎癥因子表達(dá)量。

表6 RSO 對LPS 刺激蛋雞回腸絨毛高度和隱窩深度的影響

3.3 RSO 對LPS 刺激蛋雞免疫器官基因mRNA 表達(dá)的影響 TLR 是天然免疫受體家族，其中TLR4是自然免疫系統(tǒng)識別病原微生物的最主要受體，主要表達(dá)于樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等表面[24]。腸道上皮細(xì)胞TLR4 蛋白是LPS 的結(jié)合受體，LPS 是TLR4 蛋白的激活劑，細(xì)胞是否能對LPS 的刺激發(fā)生反應(yīng)與該細(xì)胞膜上TLR4基因表達(dá)水平有密切的關(guān)系[20,25]。本試驗中，LPS 刺激蛋雞后，蛋雞肝臟、回腸和脾臟TLR4基因mRNA 表達(dá)量顯著上升。Avlas 等[25]研究發(fā)現(xiàn)，LPS 誘導(dǎo)了小鼠腸道炎癥因子釋放和腸道黏膜結(jié)構(gòu)損傷，而TLR4敲除（TLR4-/-）小鼠受到LPS 誘導(dǎo)后，腸道炎癥因子表達(dá)量顯著降低。LPS 誘導(dǎo)動物產(chǎn)生炎癥反應(yīng)通過TLR4/NF-κB信號通路發(fā)揮作用[26-27]。LPS 進(jìn)入機(jī)體后，首先與LPS 結(jié)合蛋白（LBP）結(jié)合成LPSLBP 復(fù)合物，使LPS 的生物活性顯著增強(qiáng)[28]。LPSLBP 復(fù)合物能夠被細(xì)胞表面的CD14 和髓樣分化蛋白2（MD2）受體識別并結(jié)合，接著CD14 將LPS-LBP 復(fù)合物遞呈給TLR4，TLR4 通過髓樣分化因子88（myeloid differentiation factor 88，MyD88）的介導(dǎo)，激活I(lǐng)L-1受體相關(guān)激酶（IL-1 receptor-associated kinase，IRAK），激活的IRAK 進(jìn)一步激活NF-κB，其與相關(guān)基因的啟動子作用，從而促進(jìn)細(xì)胞因子和炎性介質(zhì)的合成和釋放，如TNF-α、INF-γ、IL-1β、IL-6 和氧自由基等，引起炎癥反應(yīng)[24,27]。因此，本試驗中LPS 刺激蛋雞后，蛋雞回腸、肝臟和脾臟NF-κB、IL-6、IL-1β基因mRNA 表達(dá)量顯著上升。前人研究發(fā)現(xiàn)，ω-3 多不飽和脂肪酸能夠介導(dǎo)TLR4/NF-κB信號通路調(diào)控動物腸道炎癥反應(yīng)[11]，降低TNF-α、IL-1β和IL-6 等炎癥因子的生成[13-14]。RSO 能夠促進(jìn)蛋雞ω-3 多不飽和脂肪酸蓄積[9]，降低LPS 刺激蛋雞組織IL-6、NF-κB和TLR4基因mRNA表達(dá)量，與前人研究結(jié)果一致。綜上所述，日糧RSO能夠通過TLR4/NF-κB信號通路緩解蛋雞LPS 誘導(dǎo)產(chǎn)生的炎癥反應(yīng)。

3.4 RSO 對LPS 刺激蛋雞回腸形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響 家禽腸道是營養(yǎng)物質(zhì)消化和吸收的主要場所，也是體內(nèi)最大的免疫器官，是機(jī)體防御體系的第一道屏障，在維持機(jī)體正常營養(yǎng)代謝和免疫防御等方面發(fā)揮著重要作用。腸道黏膜作為家禽機(jī)體最重要的黏膜系統(tǒng)，其形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能的完整性，是維護(hù)腸道健康的有效屏障[29]。小腸絨毛高度和隱窩深度是評價腸道黏膜功能的敏感指標(biāo)。本試驗中，LPS 誘導(dǎo)蛋雞回腸組織絨毛單層柱狀上皮細(xì)胞脫落、斷裂，杯狀細(xì)胞結(jié)構(gòu)消失，損傷累積隱窩淺層，LPS 組蛋雞回腸絨毛高度降低，隱窩深度加深，絨毛高度和隱窩深度比值降低，表明LPS 刺激能夠引起蛋雞腸道炎癥反應(yīng)，炎癥因子大量釋放損壞腸道黏膜結(jié)構(gòu)，腸道組織炎癥基因表達(dá)量升高，這與在肉雞[20]和豬[26]上研究結(jié)果一致。同時，RSO 能夠緩解蛋雞LPS 誘導(dǎo)的腸道損傷狀況，RSO+LPS 組蛋雞回腸組織絨毛上皮細(xì)胞的單層柱狀上皮細(xì)胞排列規(guī)則有序，杯狀細(xì)胞數(shù)量豐富，隱窩結(jié)構(gòu)清晰，黏膜層及黏膜下層結(jié)構(gòu)均正常，小腸結(jié)構(gòu)整體較正常。Chwen 等[30]研究發(fā)現(xiàn)，日糧添加中鏈脂肪酸能夠緩解LPS 誘導(dǎo)的豬腸道結(jié)構(gòu)損傷，可增加豬十二指腸、空腸和回腸絨毛高度。RSO 能夠緩減LPS 刺激蛋雞腸道黏膜損傷，原因可能是ω-3 多不飽和脂肪酸除了能夠抑制炎癥緩減腸道損傷外，也是細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)成分，能通過改變膜磷脂的脂肪酸結(jié)構(gòu)進(jìn)而改變膜流動性，達(dá)到調(diào)節(jié)膜相關(guān)信號分子受體功能[22]。

4 結(jié) 論

本試驗條件下，日糧中添加RSO 能夠緩減蛋雞LPS 誘導(dǎo)的產(chǎn)蛋性能下降和腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)損傷，其機(jī)制是通過TLR4/NF-κB信號通路抑制炎癥相關(guān)基因表達(dá)，提高機(jī)體免疫機(jī)能。