趙國康，李 焰，張樹武，徐秉良，劉 佳

（甘肅農(nóng)業(yè)大學植物保護學院，甘肅省農(nóng)作物病蟲害生物防治工程實驗室，蘭州 730070）

蘋果斑點落葉病是蘋果上的主要病害，主要為害幼葉，嚴重時也可為害葉柄、1年生枝條和果實[1]，不僅削弱樹勢，而且還降低蘋果的產(chǎn)量和品質(zhì)，造成巨大的經(jīng)濟損失[2]。目前，蘋果斑點落葉病多采用化學防治，如5%己唑醇微乳劑、80%代森錳鋅可濕性粉劑、三唑類殺菌劑戊唑醇和苯醚甲環(huán)唑等藥劑[3-5]。然而，化學防治雖然效果較好，但是對環(huán)境介質(zhì)（大氣、土壤和水體）、農(nóng)作物和環(huán)境生物的污染較為嚴重，而且破壞果園的生態(tài)環(huán)境，影響果實品質(zhì)，甚至產(chǎn)生食品安全問題。因此，尋找低毒、高效、對環(huán)境友好的農(nóng)藥變得極為重要[6-7]。

植物源殺菌劑是利用植物中的某些抗菌物質(zhì)或誘導產(chǎn)生的植物防衛(wèi)素，殺死或有效抑制某些病原菌的生長[8-10]。植物源殺菌劑具有毒性弱、無持久性殘留和對環(huán)境友好等特點，已成為新農(nóng)藥研發(fā)的熱點。相關(guān)研究表明，植物源農(nóng)藥種類較多，其中，乙蒜素是20世紀60年代我國自行研制開發(fā)的廣譜高效殺菌劑，80%乙蒜素可抑制糧油、棉花、蔬菜、花卉、藥材、茶葉等作物以及漁業(yè)、蠶業(yè)的數(shù)十種病菌[11-12]；小檗堿是從中草藥黃連中提取分離的喹啉類生物堿，對細菌和真菌都有抑制效果[13]。劉祥東等[14]研究表明，植物源殺菌劑對桃葉片穿孔病防效較好。關(guān)于植物源殺菌劑防治蘋果斑點落葉病的研究，目前為止鮮有報道。

本試驗采用菌絲生長速率法和離體葉片刺傷法測定了5種植物源農(nóng)藥對蘋果斑點落葉病菌菌落生長的抑制作用和離體葉片的保護作用，旨在篩選防治蘋果斑點落葉病的最佳藥劑。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

供試的蘋果斑點落葉病菌（Alternaria mali）菌株由甘肅農(nóng)業(yè)大學植物保護學院植物病原學實驗室分離保存。供試葉片采集于甘肅省蘭州市西固區(qū)蘋果園‘新紅星’樹上，樹齡20年。

供試藥劑：20%乙蒜素乳油，河南省南陽臥龍農(nóng)藥廠生產(chǎn)；0.3%丁子香酚可溶液劑，南通神雨綠色藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；5%香芹酚水劑，蘭州世創(chuàng)生物科技有限公司生產(chǎn)；1.3%苦參堿水劑，恒源偉業(yè)生物科技發(fā)展有限公司生產(chǎn)；0.5%小檗堿水劑，濰坊奧豐作物病害防治有限公司生產(chǎn)。

1.2 試驗方法

（1）藥劑對蘋果斑點落葉病菌菌落生長的抑制作用。初篩試驗，采用半倍稀釋法[15]將5種藥劑配制成表1所示的推薦質(zhì)量濃度，然后，分別加入滅菌后冷卻至50 ℃的PDA培養(yǎng)基中，充分振蕩混勻，均勻倒入培養(yǎng)皿中，以加等量無菌水的培養(yǎng)基為空白對照。培養(yǎng)基凝固完全后，用直徑為5 mm的打孔器在培養(yǎng)5 d后的蘋果斑點落葉病菌菌落邊緣打取菌餅，接種在每個處理的培養(yǎng)基中央。接種后在25 ℃恒溫光照培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng)5 d，采用十字交叉法測量菌落直徑，計算生長抑制率。

生長抑制率（%）=［（對照菌落直徑-處理菌落直徑）/（對照菌落直徑-0.5）］×100

根據(jù)初篩試驗中含藥培養(yǎng)基上蘋果斑點落葉病菌的生長情況確定供試藥劑的5個稀釋質(zhì)量濃度（表2），如上述方法測定生長抑制率，測定毒力。

（2）藥劑對蘋果斑點落葉病菌菌絲干重的影響。將5種藥劑分別配制成如表3濃度的PDB培養(yǎng)液各100 mL，以加入等量無菌水為對照。在PDB培養(yǎng)液中加入培養(yǎng)7 d的蘋果斑點落葉病菌菌餅，在27 ℃下?lián)u床培養(yǎng)7 d，烘干，稱菌絲干重。

（3）藥劑對蘋果斑點落葉病離體葉片的保護作用。選取新鮮葉片，先用自來水沖洗干凈，后用75%酒精消毒15 s，再用無菌水沖洗，置于超凈工作臺晾干。將0.3%丁子香酚可溶液劑2.14 μg/mL、5%香芹酚水劑12.50 μg/mL、20%乙蒜素乳油5.56 μg/mL、1.3%苦參堿水劑26.00 μg/mL、0.5%小檗堿水劑100.00 μg/mL分別涂抹于葉片上，晾干后接種培養(yǎng)5～7 d的蘋果斑點落葉病菌菌餅（直徑5 mm），每處理接種3片葉，每片葉接種2個點，每處理共6次重復(fù)，對照葉片先涂抹無菌水，后接種病原菌。接種的葉片在25 ℃培養(yǎng)箱中保濕培養(yǎng)10 d后，用十字交叉法測量病斑長度，利用橢圓公式計算病斑面積。

病斑面積（mm2）=1/4×π×長徑×短徑

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用Excel 2010制作相關(guān)表格，采取DPS軟件將抑制率轉(zhuǎn)換成幾率值，將質(zhì)量濃度轉(zhuǎn)變成質(zhì)量濃度的對數(shù)，以各個藥劑質(zhì)量濃度的對數(shù)值為x，相應(yīng)的幾率值為y，得到毒力回歸方程y=a+bx，計算供試藥劑有效中濃度EC50值，比較各藥劑的相對抑制效果[16]。

2 結(jié)果與分析

2.1 5種植物源農(nóng)藥推薦濃度對蘋果斑點落葉病菌生長的抑制作用

從表1可以看出，5種植物源農(nóng)藥對蘋果斑點落葉病菌均具有抑制作用。其中，0.3%丁子香酚可溶液劑、5%香芹酚水劑和20%乙蒜素乳油的抑制率最高，其次為1.3%苦參堿水劑，0.5%小檗堿水劑的抑制率最低，僅為17.0%，故篩去，選擇剩余4種藥劑進行毒力測定。

表1 5種植物源農(nóng)藥推薦濃度對蘋果斑點落葉病病菌的抑制率

2.2 4種植物源農(nóng)藥不同稀釋濃度對蘋果斑點落葉病菌生長的抑制作用

從表2和圖1均可以看出，4種植物源農(nóng)藥各濃度處理對蘋果斑點落葉病菌菌落生長均有一定的抑制作用。其中，0.3%丁子香酚可溶液劑對菌落生長的抑制率最高，EC50為1.18 μg/mL；20%乙蒜素乳油和5%香芹酚水劑對菌落生長的抑制率次之，EC50分別為4.86、5.56 μg/mL；1.3%苦參堿水劑對菌落生長的抑制率最差，EC50為7.97 μg/mL。

表2 4種植物源農(nóng)藥不同稀釋濃度對蘋果斑點落葉病菌的抑制率

圖1 4種植物源農(nóng)藥對蘋果斑點落葉病菌菌落生長的抑制效果

2.3 5種植物源農(nóng)藥對蘋果斑點落葉病菌菌絲干重的影響

從表3可以看出，5種植物源農(nóng)藥處理的蘋果斑點落葉病菌菌絲干重均顯著小于對照。其中，0.3%丁子香酚可溶液劑2.14 μg/mL處理干重為1.2 mg，5%香芹酚水劑12.50 μg/mL處理干重為3.3 mg，這2種藥劑效果較好，而0.5%小檗堿水劑100.00 μg/mL、20%乙蒜素乳油5.56 μg/mL和1.3%苦參堿水劑26.00 μg/mL處理效果略差。

表3 加入5種植物源農(nóng)藥PDB培養(yǎng)液的蘋果斑點落葉病菌菌絲干重

2.4 5種植物源農(nóng)藥對蘋果斑點落葉病菌的離體葉片保護作用

從表4可以看出，與對照相比，5種植物源農(nóng)藥對接種蘋果斑點落葉病菌的離體葉片均有顯著的保護作用。其中，5%香芹酚水劑12.50 μg/mL處理對接種蘋果斑點落葉病菌的離體葉片的保護作用最好，病斑擴展面積最小，為19.63 mm2，且與對照相比差異顯著；其次為0.3%丁子香酚可溶液劑2.14 μg/mL、1.3%苦參堿水劑26.00 μg/mL和20%乙蒜素乳油5.56 μg/mL處理，0.5%小檗堿水劑100.00 μg/mL處理效果最差，病斑擴展面積最大，為82.43 mm2。

表4 5種植物源農(nóng)藥對接種蘋果斑點落葉病菌葉片的保護作用

3 結(jié)論與討論

近年來，植物源農(nóng)藥在農(nóng)作物病害的防治研究中越來越重要。單承鶯等[17]對我國植物源農(nóng)藥的發(fā)展概況研究發(fā)現(xiàn)，我國植物源農(nóng)藥的研究深度與廣度均不夠，而且有些品種的作用機理是空白。邱德文[18]概述了我國已開發(fā)的一些用于農(nóng)作物病蟲害防治的植物源農(nóng)藥種類，如苦參堿、煙堿、魚藤酮、大蒜素、苦皮藤素、蛇床子素、丁子香酚、香芹酚、藜蘆堿、黃芩甙+黃酮、茴蒿素、百部堿、除蟲菊素等，但是有關(guān)植物源農(nóng)藥對蘋果斑點落葉病的防治方面目前報道較少。

本試驗發(fā)現(xiàn)，5種植物源農(nóng)藥對蘋果斑點落葉病菌的菌落生長和菌絲干重均具有抑制作用，其中，0.3%丁子香酚可溶液劑對蘋果斑點落葉病菌菌落和菌絲生長的抑制作用最為顯著。魏曉兵等[19]研究表明，0.3%丁子香酚可溶液劑在田間對人參灰霉病的防效可達到70.07%。蘭成忠等[20]研究表明，丁子香酚對辣椒疫病的田間防治效果達86.28%，顯著優(yōu)于常用化學殺菌劑克露（代森錳鋅·霜脲氰）等。

此外，本試驗結(jié)果表明，5%香芹酚水劑對接種蘋果斑點落葉病菌的離體蘋果葉片的保護作用顯著好于其他4種藥劑。董芳等[21]研究表明，5%香芹酚水劑500倍液對葡萄霜霉病的田間防效較好，處理后的葡萄增產(chǎn)16.13%。席金鳳[22]研究表明，5%香芹酚水劑對馬鈴薯早疫病的防效為57.07%，對馬鈴薯晚疫病的防效為53.60%。植物源藥劑與化學藥劑混合使用或多種植物源藥劑混合使用能否有效提升對蘋果斑點落葉病的防治效果，有待于進一步的研究。