張子怡

（仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院，廣州 510000）

0 引言

隨著人口的日益增長(zhǎng)，食物需求量不斷上升。據(jù)推測(cè)，到2030年，世界人口將增至80億，糧食需求量增加60%，然而現(xiàn)代工業(yè)的發(fā)展導(dǎo)致空氣水土污染逐年增加，全球氣候變暖，良田減少，自然災(zāi)害頻發(fā)，中國(guó)農(nóng)作物面臨越來(lái)越多的不良環(huán)境條件。水稻是重要的糧食作物，據(jù)推測(cè)，到2025 年水稻的總產(chǎn)量必須是現(xiàn)有的2倍才能滿足人口的需求，但20世紀(jì)以來(lái)，水稻產(chǎn)量的增長(zhǎng)水平一直處于徘徊不前的境地。MicroRNA（微小RNA）是20世紀(jì)才被人們發(fā)現(xiàn)的基因調(diào)控因子，有關(guān)其的研究也是日益增多，探明微小RNA在生物體內(nèi)調(diào)控生物生理行為的機(jī)理并將其合理運(yùn)用以達(dá)到對(duì)人類有用的目的是近幾年的研究熱點(diǎn)。同樣，在水稻抗逆性狀的研究上也應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注miRNA 對(duì)水稻所產(chǎn)生的影響。目前有關(guān)miRNA 在水稻抗逆性中起到的作用研究成果還不多，綜述更是少之又少，這與其研究的難度有關(guān)，但從現(xiàn)有的研究成果中不難看出miRNA在水稻抗逆性中起到的作用非常顯著，可見(jiàn)在未來(lái)這一領(lǐng)域必將是熱點(diǎn)與重點(diǎn)，故現(xiàn)作此研究進(jìn)展綜述，希望對(duì)未來(lái)miRNA 在水稻抗逆性方面的運(yùn)用研究有一定的幫助。

1 microRNA在植物中的應(yīng)用研究

成熟的microRNA是一類細(xì)胞內(nèi)普遍存在的長(zhǎng)度約為22個(gè)核苷酸的微小RNA，簡(jiǎn)稱miRNA，其通過(guò)形成miRISC（miRNA 誘導(dǎo)沉默復(fù)合物），并與靶mRNA結(jié)合進(jìn)而使靶mRNA 降解或是抑制靶mRNA 的翻譯的原理，達(dá)到調(diào)控相應(yīng)抗逆性相關(guān)基因的目的。

1990 年Napoli 等在一次意外的矮牽?；▽?shí)驗(yàn)首次發(fā)現(xiàn)了轉(zhuǎn)錄后沉默現(xiàn)象，而1993 年Ambros 等在秀麗線蟲(chóng)實(shí)驗(yàn)中通過(guò)對(duì)比2 個(gè)突變體的非編碼RNA 編碼情況，更加明確了轉(zhuǎn)錄后沉默的原理，這一系列突破性發(fā)現(xiàn)使人們的視線聚焦于miRNA 在生物機(jī)理中怎樣以及如何起作用上，開(kāi)辟了基因表達(dá)調(diào)控的新研究方向[1]。而植物miRNA 的研究起步要比動(dòng)物晚，2002年才首次在擬南芥中克隆到miRNA，由此開(kāi)始了對(duì)植物miRNA的大量研究，種種研究結(jié)果表明：miRNA在植物生長(zhǎng)發(fā)育（如葉形態(tài)發(fā)生、花的分化和發(fā)育、根的分化和發(fā)育等）、細(xì)胞周期調(diào)控、基因表達(dá)及抗逆性方面起到極為關(guān)鍵的重要作用。

影響作物的生長(zhǎng)因素有土壤、溫度、濕度、水質(zhì)、鹽堿等，根據(jù)Levitt的分類，非生物脅迫主要分為溫度脅迫、礦物脅迫和水分脅迫3 類，其中，溫度脅迫細(xì)分為低溫危害與高溫危害，礦物脅迫主要有鹽害、鋁害、重金屬危害、缺鐵、缺磷等，水分脅迫細(xì)分為干旱與漬害。

非生物脅迫下植物細(xì)胞能夠形成一些脅迫蛋白來(lái)抵抗逆境，如低溫脅迫下合成抗凍蛋白，通過(guò)抑制冰晶生長(zhǎng)從而減輕冰晶對(duì)類囊體的傷害，又如高溫脅迫下合成熱激蛋白以提高抗熱性等。面對(duì)逆境脅迫，不僅只有脅迫蛋白在植物體內(nèi)發(fā)揮作用，調(diào)節(jié)滲透機(jī)制也是提高抗逆性的一大手段[2]。大量實(shí)驗(yàn)表明[3-7]，低溫、高溫、干旱、洪澇、鹽堿等不良條件下，逆境會(huì)誘導(dǎo)參與滲透相關(guān)基因的表達(dá)，形成一些可提高細(xì)胞溶質(zhì)濃度的物質(zhì)如氨基酸、有機(jī)酸、無(wú)機(jī)離子等，使植物能從外界持續(xù)獲取水分。人們繼而發(fā)現(xiàn)了無(wú)論在何種逆境條件下，植物體內(nèi)的脫落酸含量都會(huì)增加，如面對(duì)10℃以下的低溫，水稻幼苗葉片和黃瓜子葉的脫落酸含量明顯增加，因此認(rèn)為脫落酸是一種脅迫激素，即應(yīng)激激素，它在植物抗逆原理中發(fā)揮了極大作用[8-9]。Wei等[10]利用miRNA 芯片對(duì)干旱脅迫下13 個(gè)物種的miRNA的表達(dá)情況進(jìn)行了對(duì)比分析，發(fā)現(xiàn)了只有含有脫落酸的miRNA靶基因才會(huì)對(duì)干旱脅迫做出反應(yīng)，如miR167、miR168、miR528 在干旱條件下表達(dá)下調(diào)，從而導(dǎo)致其各自的靶基因（磷脂酶D，促分裂原活化蛋白激酶，過(guò)氧化物酶）表達(dá)上調(diào)，進(jìn)而導(dǎo)致植物葉片氣孔關(guān)閉以及多種抗氧化系統(tǒng)活性的增加，最終提高了對(duì)干旱的抵抗能力。

據(jù)研究[11-15]，植物機(jī)體內(nèi)已自然進(jìn)化出一系列應(yīng)對(duì)非生物脅迫的機(jī)制，而miRNA在這些機(jī)制中起到關(guān)鍵作用，對(duì)脅迫敏感的miRNA可能通過(guò)應(yīng)激反應(yīng)控制靶基因的表達(dá)，而最新研究表明植物抗逆性與抗逆性相關(guān)基因及其啟動(dòng)子在堿基序列上的GC含量有一定關(guān)系，含量越高則基因穩(wěn)定性越高，抗逆性越強(qiáng)[16]。

2 mircoRNA在水稻抗逆性中的應(yīng)用研究

2.1 抗旱

在所有谷類作物中，水稻對(duì)干旱因素最為敏感，尤其在生長(zhǎng)期時(shí)，即使是溫和的干旱脅迫，也會(huì)導(dǎo)致不同程度的不育和減產(chǎn)。據(jù)統(tǒng)計(jì)，每年栽培水稻的用水量占每年農(nóng)業(yè)總用水量的70%，在水資源日益匱乏的現(xiàn)狀下，具有干旱抗性的水稻品種越來(lái)越受人們歡迎。

研究表明，miRNA 家族中的不同miRNA 功能并不完全一樣，例如在水稻體內(nèi)的miR169 家族中僅有miR169g 是在水稻抗旱脅迫中起作用的，且不同植物體內(nèi)的miRNA 面對(duì)逆境脅迫時(shí)采取的對(duì)應(yīng)措施也不一定相同，如擬南芥體內(nèi)的miR169 家族中，miR169a和miR169c 的調(diào)節(jié)方式剛好與水稻相反，干旱會(huì)抑制它們的表達(dá)，卻提高了擬南芥的抗旱性[17]。

miR393 是很多植物在抵抗干旱脅迫中起重要作用的miRNA，miR393通過(guò)對(duì)靶基因TIR1（轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑反應(yīng)蛋白1）進(jìn)行調(diào)控使介導(dǎo)的生長(zhǎng)素信號(hào)受到抑制而達(dá)到抗旱目的。

Zhou 等[18]于2010 年利用芯片掃描首次發(fā)現(xiàn)了19個(gè)新的在水稻抗旱性中發(fā)揮作用的miRNA，其中11個(gè)為上調(diào)表達(dá)，分別是miR170、miR172、miR397、miR408、miR529、miR896、miR1030、miR1035、miR1050、miR1088、miR1126；8個(gè)為下調(diào)表達(dá)，分別為miR395、miR474、miR845、miR851、miR854、miR903、miR901、miR1125。同時(shí)，Zhou 發(fā)現(xiàn)，ptc-miR474 與ath-miR854a 家族均在干旱脅迫下表現(xiàn)出嚴(yán)格的上調(diào)表達(dá)，ath-miR170 和ath-miR396 家族則表現(xiàn)為嚴(yán)格下調(diào)表達(dá)[19]。Sun 等于2017 年用DK151 和IR64 作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，發(fā)現(xiàn)在干旱脅迫下DK151 產(chǎn)量明顯高于IR64，DK151體內(nèi)響應(yīng)干旱逆境的已知miRNA數(shù)量相較于IR64 高出265 個(gè)，Sun 等通過(guò)熒光定量PCR 技術(shù)預(yù)測(cè)了其中12個(gè)miRNA對(duì)應(yīng)的220個(gè)靶基因，但只有miR1425-5p、miR1861b、miR1861h、miR1490、miR396e-5p、miR398p 和miR5521 這8 個(gè)miRNA 檢測(cè)到了剪切片段，同時(shí)他們也發(fā)現(xiàn)降低一些miRNA的表達(dá)可能會(huì)導(dǎo)致一些受干旱誘導(dǎo)而發(fā)生調(diào)控的轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)呈上升或下降趨勢(shì)，這將導(dǎo)致一些其他的非生物脅迫響應(yīng)能力上升或下降。

2.2 抗冷害

水稻喜高溫，種子發(fā)芽最低溫度8℃～14℃，最適30～35℃，最高38～42℃。分蘗期日均20℃以上,穗分化適溫30℃左右；低溫會(huì)使枝梗和穎花分化延長(zhǎng)，抽穗適溫25～35℃，開(kāi)花最適溫30℃左右，低于20℃或高于40℃時(shí)，授粉會(huì)受嚴(yán)重影響，可見(jiàn)水稻對(duì)低溫抗性不高，故培育抗冷害的水稻品種能有效降低環(huán)境溫度對(duì)水稻生長(zhǎng)的阻礙作用，使種植難度降低，可播種時(shí)間擴(kuò)寬，進(jìn)而增加產(chǎn)量，提高質(zhì)量。

截至目前的研究，水稻中對(duì)冷害脅迫起響應(yīng)的miRNA 主要有24 種，分別為miR157、miR159、miR160、miR162、miR164、miR166、miR167、miR169、miR172、miR319、miR393、miR395、miR396、miR397、miR398、miR408、miR446、miR528、miR530、miR535、miR812、miR814、miR1425和miR1436[20-23]。

根據(jù)報(bào)道出來(lái)的文獻(xiàn)，擬南芥中miR167 與miR319面對(duì)冷害脅迫時(shí)均上調(diào)表達(dá)，而在水稻幼苗體內(nèi)卻是上調(diào)表達(dá)，待miRNAs成熟后再表現(xiàn)下調(diào)[24]。

從real-time PCR 的測(cè)試分析可得出，osa-miR393基因在水稻受到冷脅迫之后有持續(xù)表達(dá)上調(diào)的趨勢(shì)，而osa-miR396c 基因的表達(dá)趨勢(shì)是先上調(diào)再回落的，雖然2 個(gè)基因在冷脅迫后的表達(dá)模式不同，且表達(dá)量與實(shí)驗(yàn)對(duì)照組差距不大，但總的來(lái)說(shuō)這2 個(gè)基因是能響應(yīng)冷脅迫的，推測(cè)原因可能有2點(diǎn)：一是實(shí)驗(yàn)中冷脅迫處理時(shí)間長(zhǎng)短未能達(dá)到要求，二是由于一個(gè)RISC復(fù)合體可以和多個(gè)靶mRNA結(jié)合并完成剪切過(guò)程，故無(wú)需miRNA 表達(dá)量很大即可達(dá)到使靶基因表達(dá)發(fā)生變化的目的[25]。

Jeong 等[26]發(fā)現(xiàn)了miR1425 在水稻面對(duì)冷害脅迫時(shí)會(huì)下調(diào)表達(dá)來(lái)調(diào)節(jié)RF-1（生育恢復(fù)基因）的表達(dá)，從而提高水稻耐冷性。

2.3 抗鹽

在全球范圍內(nèi)，土壤鹽化都存在逐漸加劇的問(wèn)題，中國(guó)約有2000 萬(wàn)km2的鹽堿地，大約占耕地面積的10%，如能提高現(xiàn)有作物的耐鹽能力或是開(kāi)發(fā)出耐鹽新品種，那必然會(huì)大幅度減輕當(dāng)前糧食短缺的程度。鹽脅迫會(huì)影響到植物幾乎所有的生命進(jìn)程，盡管植物先天擁有一些耐鹽的能力，但是鹽脅迫仍然會(huì)造成作物產(chǎn)量大幅下降以及質(zhì)量不達(dá)標(biāo)。因此研究植物的耐鹽機(jī)制、開(kāi)發(fā)利用耐鹽植物資源有著重要的意義。

植物抗鹽實(shí)際就是在鹽濃度遠(yuǎn)高于正常生長(zhǎng)環(huán)境下的鹽濃度這一條件下，如何保證自身仍能獲取足夠的水分與養(yǎng)分，以到達(dá)正常新陳代謝與生長(zhǎng)發(fā)育的需求。不同種類的植物抗鹽方式和抗鹽程度不同，同一植物的不同生育期抗鹽能力也不同，耐鹽范圍在1.5%～2.0%的稱為鹽生植物，而耐鹽范圍僅在0.2%～0.8%表達(dá)的則是甜土植物，水稻就是典型的甜土植物。面對(duì)鹽脅迫植物采取的應(yīng)對(duì)措施有避鹽和耐鹽2 種，避鹽即減少體內(nèi)積累的鹽分，如檉柳屬會(huì)通過(guò)莖葉表面的鹽腺排出體內(nèi)多余的鹽分，耐鹽則是通過(guò)生理機(jī)制如改變滲透調(diào)節(jié)和加強(qiáng)新陳代謝等忍受進(jìn)入細(xì)胞的鹽分。近年來(lái)人們研究發(fā)現(xiàn)，NaCl 脅迫會(huì)誘導(dǎo)H+-ATPase基因表達(dá)以達(dá)到水解ATP排出H+的目的，使質(zhì)膜上的Na+/H+反向運(yùn)輸器利用跨膜H+濃度將Na+排出細(xì)胞再將H+重新運(yùn)輸回來(lái)[27]。

研究證明miRNA 是通過(guò)調(diào)控與耐鹽性相關(guān)的基因這一途徑來(lái)間接參與植物耐鹽響應(yīng)的。miR397 可作用于LACs和CKB3等相關(guān)抗鹽蛋白使其下調(diào)表達(dá)，從而提高植物耐鹽性。miR393 作用于靶基因TIR1，間接調(diào)控耐鹽相關(guān)基因P5CDH和SR05的表達(dá)以達(dá)到明顯增強(qiáng)植物耐鹽性的目的。Jung 和Kang 研究發(fā)現(xiàn)miR417的下調(diào)表達(dá)會(huì)降低植物幼苗生存率，進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)證明其與鹽脅迫對(duì)抗也密切相關(guān)。Zhu等[16]通過(guò)高通量測(cè)序技術(shù)發(fā)現(xiàn)水稻幼苗在鹽脅迫條件下體內(nèi)共有85 個(gè)內(nèi)含子miRNAs 表達(dá)，其中差異表達(dá)的有24個(gè)。最新研究證明了in-miRNAs與宿主基因的轉(zhuǎn)錄加工表達(dá)相關(guān)度并不高，這意味著部分miRNAs 可能有著相對(duì)獨(dú)立的一套基因表達(dá)原理，Chun 等[28]利用RTPCR 技術(shù)驗(yàn)證了水稻中的miR-3026、miR3028 和mi-R3029 就可能具有獨(dú)立啟動(dòng)子。Dong 等于2016 年克隆了水稻內(nèi)含子miRNA-3026的啟動(dòng)子。

根據(jù)目前的研究，水稻miRNA中參與耐鹽性調(diào)控的有miR156、miR159、miR160、miR162、miR164、miR165、miR167、miR169、miR171、miR319、miR393、miR395、miR396、miR397、miR398、miR530、miR1436、miR1848，隨著鹽脅迫處理的時(shí)間增加，水稻中的miR156、miR164、miR167、miR169、miR171 在根部表達(dá)量增加，miR159、miR160、miR319、miR398、miR1484 先減少后增加。而能確定的水稻miRNA 對(duì)鹽脅迫應(yīng)對(duì)的機(jī)理有：miR156 作用于靶基因SPL 與SPB，miR159 作用于靶基因MYB，miR160 和miR167作用于靶基因ARF，miR162 作用于靶基因P450，miR164作用于靶基因NAC，miR165和miR530作用于靶基因HD-ZIP，miR169作用于靶基因NF-YA，miR171作用于靶基因SCC，miR319 作用于靶基因MYB，miR393 作用于靶基因TIR1、E3 泛素連接酶、F-box 蛋白，miR395作用于靶基因APS，miR396作用于靶基因GRL，miR397 作用于靶基因Laccase，miR398 作用于靶基因CSD，miR1436作用于靶基因WRKY[29-31]。

2.4 缺營(yíng)養(yǎng)元素及抗重金屬危害等

植物作為地球上生命主要形態(tài)之一，相對(duì)于動(dòng)物而言，無(wú)法選擇生存環(huán)境，并且不易移動(dòng)，故其所處的周圍環(huán)境對(duì)其生長(zhǎng)發(fā)育影響比較大。土壤中的鐵、氮、硫、磷、鉀等元素是參與水稻生長(zhǎng)發(fā)育的重要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，然而自然界所提供的營(yíng)養(yǎng)元素量有限，故通過(guò)人工調(diào)節(jié)水稻面臨缺營(yíng)養(yǎng)元素時(shí)的反映機(jī)制有利于提高水稻的產(chǎn)量與質(zhì)量，通過(guò)miRNA簡(jiǎn)介調(diào)控水稻體內(nèi)參與營(yíng)養(yǎng)運(yùn)輸?shù)牡鞍踪|(zhì)表達(dá)量是一個(gè)有效方法。而土壤中的微量元素也有很多會(huì)對(duì)水稻幼苗的生長(zhǎng)造成抑制，如銅、鎘等，故通過(guò)miRNA 調(diào)節(jié)水稻體內(nèi)脅迫蛋白的表達(dá)也有助于提高水稻的抗重金屬脅迫能力[32]。

研究表明，植物在面對(duì)缺磷條件下，體內(nèi)的miR395、miR399、miR398、miR827 均會(huì)做出反應(yīng)，水稻體內(nèi)的AtPHR1 的同源基因OsPHR2 被認(rèn)為是缺磷脅迫下調(diào)節(jié)miR399 表達(dá)的重要調(diào)控因子，根據(jù)05 年Fujii 等[33]的研究，miR399 是通過(guò)下調(diào)表達(dá)抑制了PHO2 的表達(dá)以此來(lái)調(diào)控磷元素在水稻根部的運(yùn)輸。有報(bào)道顯示，水稻D3 同源基因MAX2 能在磷脅迫條件下做出響應(yīng)。Yang 等的研究顯示，水稻中miR528潛在靶mRNA很多，Yang通過(guò)5'RLM-RACE在日本晴水稻中驗(yàn)證得到miR528對(duì)OsAO和D3的調(diào)控作用。

Bartel[34]、Jeong等[35]的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，miR395在水稻和擬南芥面臨低硫脅迫時(shí)會(huì)下調(diào)表達(dá)，這是由于轉(zhuǎn)錄因子SLIM1的調(diào)控作用，miR395能夠調(diào)節(jié)硫轉(zhuǎn)運(yùn)體基因以及硫代謝相關(guān)基因APS1、APS3 和APS4 的表達(dá)。另有研究表明，盡管miR395和硫轉(zhuǎn)運(yùn)體基因在擬南芥根中的表達(dá)都受缺硫誘導(dǎo)，但它們被誘導(dǎo)表達(dá)的細(xì)胞定位并不同，miR395主要在韌皮部薄壁細(xì)胞中被誘導(dǎo)，而硫轉(zhuǎn)運(yùn)體基因的表達(dá)主要在木質(zhì)部薄壁細(xì)胞中被誘導(dǎo)。但是目前為止更精確的miR395 表達(dá)模式還未被解釋清楚。

水稻在面對(duì)低氮環(huán)境時(shí)有63 個(gè)保守miRNAs，26個(gè)新miRNAs 具有表達(dá)差異，表明這些調(diào)控miRNAs可能與水稻應(yīng)對(duì)低氮脅迫有關(guān)，但目前對(duì)這些共調(diào)控miRNA 的功能尚不清楚。值得注意的是，miR169 經(jīng)常被報(bào)道出與植物的抗低氮有關(guān)，擬南芥中面對(duì)低氮脅迫時(shí)會(huì)抑制miR169的表達(dá)，從而調(diào)節(jié)靶基因NFYA家族轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)。同時(shí)也有報(bào)道說(shuō)miR169 和NFYA 基因與干旱脅迫有關(guān)，可能表明在低氮環(huán)境下植物的耐旱性會(huì)有所提高[36]。

植物面對(duì)Cu脅迫時(shí)miR398會(huì)誘導(dǎo)超氧化物歧化酶SOD增加表達(dá)量以合成更多的Cu/Zn-SOD酶，從而達(dá)到提高Cu抗性的目的。而在少Cu條件下，miR398卻會(huì)上調(diào)表達(dá)使CSD1 和CSD2 減少，故適量的Cu 其實(shí)有益于植物生長(zhǎng)[37-40]。朱子亮等[25]指出植物面對(duì)鎘脅迫時(shí)miR171 和miR393 率先做出反應(yīng)，而不同植物面對(duì)重金屬脅迫時(shí)率先做出反應(yīng)miRNA種類也不同，如在蒺藜苜蓿應(yīng)對(duì)重金屬脅迫中做出反應(yīng)的miRNA有miR171、miR319、miR393、miR529，且均表達(dá)上調(diào)。實(shí)驗(yàn)證明，與水稻應(yīng)對(duì)鎘脅迫密切相關(guān)的miRNA主要有miR165 家族，miR171a、miR171b、miR408 家族、miR604、miR2122、miR528、miR397b、miR167j、miR1856、miR398a和miR5808等。

水稻是重要的模式作物，自完成了基因組測(cè)序后，研究miRNAs對(duì)水稻抗重金屬危害的作用于機(jī)理成為可能，但目前對(duì)于水稻體內(nèi)特定的抗重金屬相關(guān)miRNAs的種類與功能的研究取得的成果較少[41-43]，因此參考文獻(xiàn)也較少，可見(jiàn)未來(lái)在這一方面應(yīng)會(huì)有更大更重要的突破。

3 展望

原來(lái)QTL 的研究大多集中在孤立的蛋白質(zhì)編碼基因上，很明顯現(xiàn)在還需考慮轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的非編碼RNA，如miRNA，越來(lái)越多的研究表明miRNA是在研究作物抗逆機(jī)制中應(yīng)當(dāng)重點(diǎn)關(guān)注的QTL，并且合理運(yùn)用它可以很大程度地提高作物抗逆性，降低環(huán)境對(duì)作物的影響和種植難度，提高作物產(chǎn)量與質(zhì)量[44]。

MiRNA作為較晚被發(fā)現(xiàn)的一種基因調(diào)控手段，是時(shí)下的研究熱點(diǎn)，而miRNA在水稻抗逆性中的應(yīng)用近幾年在國(guó)內(nèi)也是如火如荼地展開(kāi)，雖說(shuō)在一些方面取得了比較成功的研究成果，但相較于其他提高水稻抗逆性手段的研究階段來(lái)說(shuō)，其還處于剛起步的階段，筆者總結(jié)了目前存在的問(wèn)題及其對(duì)應(yīng)的解決方法：（1）很多水稻特異的miRNA種類尚未被發(fā)現(xiàn)。MiRNA總數(shù)十分龐大，約占總基因的1%，要解決這一問(wèn)題，研發(fā)高效快速的檢測(cè)、測(cè)序、分析技術(shù)（例如CRISPR 敲除miRNA 或其靶位點(diǎn)）十分重要[45-48]。（2）對(duì)于已發(fā)現(xiàn)的miRNAs中還有很多尚未清楚其功能或是其對(duì)應(yīng)的靶基因，解決此問(wèn)題需要科研工作者的努力。（3）對(duì)于已經(jīng)探明靶基因和其所負(fù)責(zé)的功能的miRNA，要找尋運(yùn)用它的方法，切實(shí)有效地將它運(yùn)用于生產(chǎn)中。