呂紫璇++車早紅++唐瑜++陳建++張傳平++劉前林

摘要：目的 HPLC法測(cè)定6省各等級(jí)天麻中天麻素和對(duì)羥基苯甲醇的含量。方法 色譜柱Agilent XDB-C18柱（250mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相乙腈-0.05%磷酸溶液（3：97），流速1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)220nm，柱溫35℃。結(jié)果 天麻素進(jìn)樣量在0.04102～0.8204ug范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好；對(duì)羥基苯甲醇進(jìn)樣量在0.02504～0.5008ug范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。結(jié)論 檢測(cè)出天麻6省各等級(jí)中天麻素和對(duì)羥基苯甲醇的含量。

關(guān)鍵詞：天麻；高效液相色譜法；天麻素對(duì)羥基苯甲醇

天麻為蘭科植物天麻（Gastrodia elata Blume）的干燥塊莖，具息風(fēng)止痙；平肝陽；祛風(fēng)通絡(luò)功效。現(xiàn)全國(guó)各地均有栽培，以甘肅、云南、湖北、貴州、安徽、陜西、四川等為大產(chǎn)區(qū)?！吨袊?guó)藥典》2015版新增對(duì)羥基苯甲醇含量為天麻質(zhì)量的控制指標(biāo)，本課題對(duì)6省各等級(jí)天麻中天麻素和對(duì)羥基苯甲醇的含量進(jìn)行檢測(cè)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

島津LC-20A高效液相色譜儀；Sartorius-ME215S電子天平。天麻素對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110807-200205）；對(duì)羥基苯甲醇對(duì)照品（Lot No：NJ141012-17，USA）；色譜乙腈，超純水，其余試劑為分析純；天麻樣品為6省基地采集加工后的成品。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件 色譜柱Agilent XDB-C18柱（250mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相乙腈-0.05%磷酸溶液（3：97），流速1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)220nm，柱溫35℃；進(jìn)樣量：5μl。

2.2溶液制備

2.2.1對(duì)照品溶液的制備精密稱取對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含天麻素0.04102mg、對(duì)羥基苯甲醇0.02504mg的混合溶液，即得。

2.2.2供試品溶液的制備取本品粉末（過三號(hào)篩）約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，稱定重量，超聲處理（功率120W，頻率40kHz）30min，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，精密量取續(xù)濾液10ml，濃縮至近干無醇味，殘?jiān)右译?水（3：97）混合溶液溶解，轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中，用乙腈-水（3：97）混合溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3方法學(xué)考察

2.3.1系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)取上述溶液進(jìn)樣，記錄色譜圖。理論塔板數(shù)按天麻素峰計(jì)算大于5000，分離度大于1.5，見圖1。

2.3.2線性關(guān)系考察取混合對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣1μl、2μl、4μl、10μl、20μl，以進(jìn)樣量（X）對(duì)峰面積（Y）作線性回歸，天麻素得回歸方程為：Y=2000000.0000x+5464.2000，r=0.9997表明進(jìn)樣量在0.04102～0.8204ug范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；對(duì)羥基苯甲醇得回歸方程為：Y=3000000.0000x+9823.1000，r=0.9999表明進(jìn)樣量在0.02504～0.5008ug范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.3精密度試驗(yàn)：取混合對(duì)照品溶液，連續(xù)測(cè)定6次，結(jié)果天麻素、對(duì)羥基苯甲醇的峰面積的RSD分別為0.3%、0.3%（n=6）。

2.3.4重復(fù)性試驗(yàn)：精密取同一批天麻，按供試品溶液的制備方法制備6份供試品溶液測(cè)定，天麻素、對(duì)羥基苯甲醇含量的RSD分別為0.2%、0.1%（n=6）。表明此方法重復(fù)性良好。

2.3.5穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，分別在0、2、4、8、12、24h進(jìn)樣5μl，結(jié)果天麻素、對(duì)羥基苯甲醇峰面積的RSD分別為0.2%、0.2%。表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.6加樣回收試驗(yàn)：取已知含量天麻6份，精密加入對(duì)照品適量，按供試品溶液制備方法制備溶液并測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果對(duì)天麻素、羥基苯甲醇平均回收率分別為98.37%、98.85%，RSD%分別為0.27%、0.69%（n=6），見表1。

2.4樣品測(cè)定 取天麻樣品，測(cè)定，見表2。

由上結(jié)果可以得出：①按《中國(guó)藥典》2015版一部標(biāo)準(zhǔn)，按干燥品計(jì)算，含天麻素（C13H18O7）和對(duì)羥基苯甲醇（C7H8O2）的總量不得少于0.25%，所有天麻含量均合格；②從等級(jí)含量來看，天麻等級(jí)和其含量并不成正比，如甘肅產(chǎn)特級(jí)、四川產(chǎn)特級(jí)與陜西產(chǎn)特級(jí)，均為同批天麻的最低水平，而四川產(chǎn)三級(jí)為同批天麻最高。

3 討論

云南產(chǎn)為烏天麻，四川產(chǎn)為烏紅天麻，其余各省天麻均為紅天麻，從上數(shù)據(jù)來看，烏天麻與烏紅天麻天麻素和對(duì)羥基苯甲醇的總量與紅天麻并無太大差異；云南產(chǎn)與四川產(chǎn)天麻比較厚實(shí)，水分比較高，干燥難度較大，對(duì)天麻素和對(duì)羥基苯甲醇含量有一定影響。

參考文獻(xiàn)：

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版，2015.

編輯/安樺