白旭東 王志剛 谷巖

【摘要】 目的：建立頂空毛細(xì)管氣相色譜法測定格隆溴銨中7種有機(jī)溶劑殘留量的方法。方法：采用毛細(xì)管氣相色譜法。色譜柱為DB-624彈性石英毛細(xì)管柱（30 m×0.32 mm，1.8 μm）;載氣為氮?dú)?檢測器為FID;進(jìn)樣口和檢測器溫度均為250 ℃;柱溫為程序升溫，初始溫度40 ℃，保持15分鐘，以每分鐘20 ℃升溫至200 ℃。頂空進(jìn)樣：平衡溫度為80 ℃，平衡時間為30 min，分流比為10：1，水為溶劑，正丙醇為內(nèi)標(biāo)物。結(jié)果：被測物在考察的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r≥0.9990），平均回收率為90.7%～102.1%，檢測限分別為。結(jié)論：本法靈敏度高，簡單，易行，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，該法可用于格隆溴銨原料藥中有機(jī)溶劑殘留量的檢查。

【關(guān)鍵詞】 毛細(xì)管氣相色譜法;格隆溴銨;頂空進(jìn)樣;殘留溶劑

【DOI編碼】 10.3969/j.issn.1674-4977.2020.05.019

Determination of Residual Solvent in Glycopyrronium Bromide by Headspace Gas Chromatography

BAI Xu-dong，WANG Zhi-gang，GU Yan

（Liaoning Inspection，Examination & Certification Centre，Shenyang 110036，China）

Abstract： Objective A method for the determination of the residual amounts of seven organic solvents in glycopyrronium bromide by headspace capillary gas chromatography was established. Method Capillary gas chromatography is used. The chromatographic column is a DB-624 elastic quartz capillary column（30 m×0.32 mm，1.8 μm）;the carrier gas is nitrogen;the detector is FID;the inlet and detector temperature are both 250 ℃;the column temperature is the programmed temperature rise，the initial keep the temperature at 40°C for 15 minutes，and increase the temperature to 200 ℃ at 20 ℃ per minute. Headspace sampling：equilibrium temperature is 80 ℃，equilibrium time is 30 min，split ratio is 10：1，water is solvent， n-propanol is internal standard. Results The measured substances have a good linear relationship（r≥0.9990） within the range examined，with an average recovery rate of 90.7 to 102.1%，and the detection limits are respectively. Conclusion This method is high in sensitivity， simple，easy to implement，and the results are accurate and reliable. This method can be used for the inspection of the residual amount of organic solvents in glycopyrrolate bromide raw materials.

Key words： capillary gas chromatography;glycopyrronium bromide;headspace sampling;residual solvent

格隆溴銨（Glycopyrronium Bromide）是一種長效毒蕈堿受體拮抗劑，作用于副交感神經(jīng)支配效應(yīng)部位M受體，能夠抑制節(jié)后膽堿能神經(jīng)和平滑肌對乙酰膽堿的反應(yīng)，外周作用與阿托品類似，但無中樞性抗膽堿活性[1-3]。在臨床應(yīng)用中，可用于消化性潰瘍的輔助治療，或用于術(shù)前或術(shù)中，減少唾液腺、支氣管和咽的分泌物[4]。

目前國內(nèi)已有文獻(xiàn)報道格隆溴銨的含量測定，對格隆溴銨原料藥中有機(jī)溶劑殘留量測定未見報道，格隆溴銨合成工藝及后期的工藝優(yōu)化，并確定整個工藝中使用到有機(jī)溶劑，分別為：乙醇、乙醚、乙腈、二氯甲烷、正己烷、丁酮、四氫呋喃。鑒于上述溶劑基本為低沸點(diǎn)有機(jī)溶劑，本文依據(jù)中國藥典2020年版四部相關(guān)規(guī)定及人用藥品注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會（ICH）指導(dǎo)原則，需對這些有機(jī)溶劑殘留量進(jìn)行控制，本實驗建立了毛細(xì)管氣相色譜法測定上述溶劑在藥物中的殘留量，方法簡便、快速、結(jié)果準(zhǔn)確。

1 儀器與材料

GC-2010氣相色譜儀配有FID檢測器（日本島津公司）;AOC5000頂空進(jìn)樣器（瑞士公司）;DB-624彈性石英毛細(xì)管柱（30 m×0.32 mm，1.8 μm）（迪馬科技有限公司），CP 225D電子天平（德國賽多利斯公司）。

乙醇、乙醚、乙腈、二氯甲烷、正己烷、丁酮、四氫呋喃和正丙醇（Sigma公司）均為色譜純，實驗用水為超純水。格隆溴銨原料（沈陽醫(yī)聯(lián)藥業(yè)有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件的選擇與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：DB-624彈性石英毛細(xì)管柱（30 m×0.32 mm，1.8 μm）;柱溫：程序升溫，初始溫度40 ℃，保持15分鐘，以每分鐘20 ℃升溫至200 ℃。進(jìn)樣口溫度：230 ℃;檢測器：FID;檢測器溫度：250 ℃;載氣為N2，柱流量：1.5 mL/min;進(jìn)樣方式：頂空進(jìn)樣;頂空條件：平衡溫度：80 ℃;平衡時間：30 min。分流比：1：10;進(jìn)樣體積：1000 μL。注入氣相色譜儀進(jìn)行分析，結(jié)果見圖1。

系統(tǒng)適應(yīng)性試驗：內(nèi)標(biāo)物正丙醇的保留時間為8.6 min，理論塔板數(shù)按正丙醇計算應(yīng)不低于30000，相鄰物質(zhì)的分離度大于1.5。

2.2 溶液的制備

2.2.1 內(nèi)標(biāo)貯備液的制備

取正丙醇約500 mg，精密稱定，置250 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為內(nèi)標(biāo)貯備液。

2.2.2 對照儲備溶液

精密稱取乙醇2500 mg、乙醚2500 mg、乙腈200 mg、二氯甲烷300 mg、正己烷150 mg、丁酮2500 mg、四氫呋喃350 mg置同一100 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為對照貯備液。精密量取對照貯備液0、0.2、0.5、1、2.5、5 mL，分別置100 mL量瓶中，分別精密量取內(nèi)標(biāo)貯備液10 mL置量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為系列對照溶液。

2.2.3 供試溶液

取格隆溴銨2.5 g，精密稱定，置25 mL量瓶中，加水使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液加入液的制備

精密量取供試品溶液2 mL，置20 mL頂空瓶中，分別精密加入2 mL“2.2.2”項下對照系列溶液，加蓋密封。

2.3 線性關(guān)系、檢出限和定量限的考察

取“2.2.4”項下系列標(biāo)準(zhǔn)溶液加入液，按上述色譜條件進(jìn)行檢測。以加入的供試品所含對照質(zhì)量濃度（ρ，mg/g）為橫坐標(biāo)，以目標(biāo)組分的峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積之比（A）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性擬合，得到7種殘留溶劑的線性方程、線性范圍及相關(guān)系數(shù)。以S/N≥3確定方法的檢出限（LOD），以S/N≥10確定方法的定量限（LQD），結(jié)果見表1。

2.4 回收率試驗

取格隆溴銨2.5 g（9份），精密稱定，置25 mL量瓶中，分別加入對照貯備液0.5 mL、1 mL和2.5 mL（每個濃度平行3份），加水使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為回收率高、中、低三個濃度的供試品溶液。

精密量取回收率供試品溶液2 mL，置20 mL頂空瓶中，分別精密加入2 mL“2.2.2”項下對照系列溶液，加蓋密封。按照標(biāo)準(zhǔn)加入法計算回收率，結(jié)果見表2。

2.5 精密度試驗

取加入對照品溶液2的標(biāo)準(zhǔn)溶液加入液，平行5份，按“2.1”項下色譜條件進(jìn)行分析，計算乙醇、乙醚、乙腈、二氯甲烷、正己烷、丁酮和四氫呋喃峰面積的RSD分別為1.66%，7.83%，2.88%，4.90%、3.96%、5.06%和4.35%，表明色譜系統(tǒng)重復(fù)性良好。

2.6 供試品測定

取供試品批號為3樣品按“2.2 溶液的制備”項下溶液制備，按上述色譜條件進(jìn)行檢測，結(jié)果：三批樣品中除乙醚與檢測限接近，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于標(biāo)準(zhǔn)曲線最低點(diǎn)外，其余均未檢出。

3 討論

1）進(jìn)樣方式的選擇

中國藥典2020版四部 （殘留溶劑測定法）規(guī)定，進(jìn)樣方式分為頂空進(jìn)樣和直接進(jìn)樣兩種模式。由于本文所檢測的溶劑均為沸點(diǎn)較低容易揮發(fā)性的溶劑，因此，為避免儀器與色譜柱的污染采用了頂空進(jìn)樣方式

2）定量方式的選擇

當(dāng)采用頂空進(jìn)樣技術(shù)時，由于供試品和對照品處于不完全相同的基質(zhì)中， 故可采用標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法以消除基質(zhì)效應(yīng)的影響;當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法與其他定量方法結(jié)果不一致時，應(yīng)以標(biāo)準(zhǔn)加入法結(jié)果為準(zhǔn)。本實驗也曾用外標(biāo)法對原料藥格隆溴胺中有機(jī)溶劑殘留量進(jìn)行過測定，發(fā)現(xiàn)采用外標(biāo)法測定時，由于受基質(zhì)效應(yīng)影響較大，回收率偏差較大，特別是乙醚、正己烷和二氯甲烷，所以最后采用標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法對原料藥格隆溴胺中有機(jī)溶劑殘留量進(jìn)行了測定。

3）頂空條件的選擇

作者考察了不同平衡溫度（70、80、90 ℃）與平衡時間（20、30、40 min）對殘留溶劑檢查的影響，將“2.2.4”標(biāo)準(zhǔn)溶液加入液的制備的中間濃度分別在70、80、90 ℃下平衡20、30、40 min進(jìn)樣分析進(jìn)樣分析，結(jié)果表明70 ℃下平衡20、30 min和80 ℃下平衡20 min的峰面積較低，其余條件各成分的峰面積基本一致，這表明頂空的氣-液兩相已達(dá)平衡，為避免水蒸氣的分壓過高，故選擇頂空溫度為80 ℃，頂空平衡時間為30 min。

4）本實驗共檢測7種有機(jī)溶劑，其中乙醇、乙醚、正丁醇為三類溶劑，其限度為0.5%，其余四種為二類溶劑，其限度乙腈為0.041%，二氯甲烷為0.06%，正己烷為0.029%，四氫呋喃為0.072%。實驗中的最低檢測濃度均低于上述限度，因此本法能有效控制以上殘留溶劑。

【參考文獻(xiàn)】

[1] ALI-MELKKIL?T，KANTO J，IISALO E.Pharmacokinetics and related pharmacodynamics of anticholinergic drugs[J].Acta Anaesthesiologica Scandinavica，1993，37：633-642.

[2] 江波.格隆溴銨臨床前藥效學(xué)和藥代動力學(xué)研究[D].杭州：浙江大學(xué)，2018.

[3] Chabicovsky M. Pharmacology， toxicology and clinical safety of glycopyrrolate[J].Toxicology and Applied Pharmacology，2019，370：154-169.

[4] 郭海英，周新.新抗膽堿能藥物格隆溴銨[J].上海醫(yī)藥，2013（15）：10-12.

【作者簡介】

白旭東（1973-），男，副主任中藥師，學(xué)士，研究方向為食品，藥品和醫(yī)療器械的檢驗與審評。

王志剛（1973-），男，教1授級高級工程師，碩士，研究方向為食品檢驗與食品安全。

通訊作者：谷巖（1975-），女，碩士，研究方向為食品檢驗與食品安全，E-mail：591131710@qq.com。