伍少欽，秦榮香，肖有恩，陸 江，盧 劍，蔣志疆，謝露露，吳志君

（廣西農(nóng)墾永新畜牧集團有限公司，廣西 南寧 530022）

2008年前我國大多數(shù)豬場豬群中豬偽狂犬?。≒orcine Pseudorabies，PR）野毒感染處在一個比較高的水平，由此導(dǎo)致豬群繁殖性能和生長水平的降低，同時引發(fā)豬群健康狀況惡化。PR的清除與凈化研究在歐美很多先進的養(yǎng)豬大國早已開展，并有了成功的案例；其中美國于1989年制訂了一項長達10年的豬偽狂犬病凈化方案，已在豬群成功地清除了PR。2003年前我國沒有成功清除豬偽狂犬病的案例，2008年前獸醫(yī)防疫部門也未頒布豬偽狂犬病控制和凈化操作規(guī)程，國內(nèi)科研機構(gòu)對PR研究基本停留在診斷和控制階段。為了探索與研究大型集約化種豬場豬偽狂犬病的控制與凈化工作，摸索一套適合國內(nèi)規(guī)模豬場PR凈化的操作規(guī)程（或PR凈化的經(jīng)驗與借鑒），良圻原種豬場2003年針對PR開展清除與凈化工作，經(jīng)過多年的努力，2004年成功地完成核心群PR凈化；2005年所有母豬場完成凈化工作[1，2]。

2011年底和2012年上半年國內(nèi)多個省市的養(yǎng)豬場出現(xiàn)豬偽狂犬病疫情，原來在2002年制定的PR凈化方案是否有效，能否做到豬偽狂犬病的凈化？這些都有待于臨床上進一步驗證。

1 材料與方法

1.1 血清

被檢血清采自所有基礎(chǔ)公母豬、后備豬、崗哨豬、產(chǎn)房仔豬、保育豬和育肥豬。

1.2 疫苗

豬偽狂犬病 gE 基因缺失弱毒疫苗和滅活疫苗，分別購自某動物保健品有限公司。

1.3 檢測試劑盒

豬偽狂犬病 gE 和gB抗體ELISA檢 測試劑盒， 購自國外某公司。

1.4 酶標(biāo)儀

美國伯樂 550S， 美國寶特Elx800等。

1.5 洗板機

Thermo WellWash 4 MK2和Biotek-50TS等。

1.6 方法

根據(jù)試劑盒的說明，S/N＜0.6的為抗體陽性，作淘汰處理；0.6～0.7之間為可疑，重檢，再次可疑作陽性處理；S/N≥0.7為抗體陰性。

2 控制與凈化原理

豬只一旦感染PR后，會終身帶毒，病毒會長期潛伏在三叉神經(jīng)節(jié)內(nèi)；豬只受到應(yīng)激后會造成排毒。通過高強度的疫苗免疫，會大幅度減少其排毒，甚至某些階段不在排毒。有免疫效果確實的gE 基因缺失疫苗和配套的鑒別診斷試劑，使應(yīng)用檢測淘汰法凈化豬偽狂犬病成為可能。

凈化工作開展前，首先評估群體內(nèi)PR野毒感染的陽性率。一般以10%為界限，如果陽性率低于10%，直接進入凈化模式；若大于10%，先通過不斷補充PR陰性的后備豬，同時加強疫苗免疫，當(dāng)群體野毒陽率低于10%，執(zhí)行凈化方案，詳見圖1。

3 良圻原種豬場PR控制與凈化過程

3.1 PR凈化工作的前提

完善豬場生物安全體系，加強員工生物安全培訓(xùn)。要培訓(xùn)豬場管理人員和全體一線員工，讓員工意識到生物安全重要性，若有人不重視不遵守，其他人再重視再努力也白費勁，整個生物安全體系必定不堪一擊，這很符合“木桶理論”，生物安全的可靠性取決于整體最薄弱的環(huán)節(jié)，所以要經(jīng)常對員工培訓(xùn)生物安全，有內(nèi)容更新時要第一時間告訴全體員工[3]。定期檢查評估生物安全的薄弱環(huán)節(jié)，限期糾正存在問題。PR清除計劃的開始，必須把防疫管理措施放在首位，確保豬只能得到有效的防疫隔離， 避免接觸到傳染源而發(fā)生再次感染。

種豬場內(nèi)所有基礎(chǔ)公母豬、后備豬及種豬場內(nèi)70～80日齡育成/育肥豬均肌注豬偽狂犬病 gE 基因缺失弱毒苗，基礎(chǔ)公母豬每4個月免疫1次，后備豬配種前免疫2次，育肥/育成豬免1次。如有使用全基因豬偽狂犬病疫苗的豬場，為減少檢測干擾，鑒別診斷檢測在gE基因缺失疫苗使用一年后開展。

養(yǎng)豬場必須要有本場實驗室（可靠的試劑、設(shè)備和檢測人員），以便第一時間出結(jié)果，實時指導(dǎo)豬場的疾病凈化工作。

3.2 制定豬偽狂犬病的清除方案

3.2.1 主要的技術(shù)路線

1）路線一：豬偽狂犬病（PR）陽性率10%以內(nèi)的，采用連續(xù)3次，每隔4～6周一次全群采血檢測淘汰野毒感染的種豬。

2）路線二：豬偽狂犬病（PR）陽性率10%以上的，暫時不采取凈化措施，全群高強度連續(xù)免疫PRV基因缺失疫苗3次（3次時間：1周、4周、8周，每次每頭豬4頭份），以后堅持引入陰性后備種豬，2～3年后抽檢檢測評估群體陽性率，當(dāng)陽性率≤10%時，按路線一處理。

3次全群檢測完成前留取不免疫PR疫苗的崗哨豬（哨兵豬），同時不斷補充檢測合格的陰性后備種豬，從而達到全面清除凈化豬的偽狂犬病毒。

3.3 凈化方案執(zhí)行的前期準(zhǔn)備和輔助措施

3.3.1 淘汰隔離場的準(zhǔn)備

為杜絕陽性豬的交叉感染和減少陽性豬的淘汰損失，必須有一個獨立且方圓3～5 km沒有豬場的隔離場，用于存放檢測為野毒陽性的妊娠母豬。

3.3.2 大力開展滅鼠工作

偽狂犬gE基因缺失疫苗的應(yīng)用，提高了免疫豬群抵抗PRV感染的能力，提高感染PR所需的病毒含量，但不能完全阻止PRV野毒對豬的潛伏感染。由于老鼠會攜帶PRV等病毒，大量老鼠的存在會增加豬只再次感染PR的風(fēng)險。因此在凈化工作前中后期，都需要定期開展大規(guī)模的滅鼠工作：一是交替使用不同的滅鼠藥；二是清除豬場內(nèi)的雜草，使老鼠在場區(qū)無法藏身；最后全體員工行動，對豬場內(nèi)部所有的老鼠洞逐個進行排除，使用高壓噴槍噴水入老鼠洞，另外幾人守住鄰近的鼠洞，滅鼠率可達90%以上。一個豬場連續(xù)做3 d；做完一個輪回后再做一個回合。與滅鼠公司簽訂合同，要求用藥后有效減少90%以上的老鼠，同時積極發(fā)動員工參與滅鼠工作，清理現(xiàn)場與阻塞老鼠洞，通過以上的措施后，豬場內(nèi)的老鼠基本上很少看到。

3.3.3 豬偽狂犬病免疫程序的制定

基礎(chǔ)母豬根據(jù)疫苗公司推薦的免疫程序，在產(chǎn)前4周免疫，同時監(jiān)測疫苗抗體的保護期，試驗表明疫苗足夠保護一個妊娠周期，后備豬和部分育肥豬則根據(jù)PRV-gB抗體監(jiān)測結(jié)果進行免疫，發(fā)現(xiàn)母源抗體能保護到10～12周，因而選擇在第11周進行測定豬（生長育肥豬）的首次免疫，留種后備豬在175日齡再次免疫PRV基因缺失疫苗。

3.3.4 車流、豬流和人流的控制

3.3.4.1 車流的控制

內(nèi)部車流：配備專用運輸車輛，分別用于飼料、豬只運送和物資的采購等；不得交叉使用。在豬場內(nèi)部運輸飼料和豬只的車輛，嚴(yán)格按照規(guī)定線路和時間順序操作。車輛每次運輸后都要充分清洗、消毒和干燥。外部車流：所有不必要車輛嚴(yán)禁停在豬場，外來車輛停放在生物安全區(qū)的周圍之外。外來買豬車輛，必須在公司指定的消毒點嚴(yán)格清洗消毒。持有第一次消毒單的車輛才能進到場區(qū)進行第二次消毒，在第二消毒區(qū)經(jīng)消毒人員驗收第一次消毒單后，再經(jīng)過3～5 min的噴淋消毒才能真正進入場區(qū)，到各場裝豬的車輛還必須經(jīng)過該場門衛(wèi)進行第三次消毒后才能靠近裝豬臺。裝豬人員必須憑借三次的消毒證明才能進行裝豬。

3.3.4.2 豬流的控制

豬群的流向采用單向流動，哺乳仔豬→保育豬→育肥豬，每批豬只全進全出，不同來源的豬只能流向特定的豬場，嚴(yán)禁隨意交叉。

3.3.4.3 人流的控制

內(nèi)部人流：嚴(yán)格限制人員的流動，本場內(nèi)各豬舍的飼養(yǎng)員禁止互相竄欄；技術(shù)人員進入不同豬舍要洗手更衣?lián)Q鞋；工作人員定期體檢，豬場獸醫(yī)人員不準(zhǔn)對外診療疾病；豬場配種人員不準(zhǔn)對外開展配種工作。公司員工及其家屬不得購買市場上的生肉，也不得到賣生肉的地方停留，公司定期供給員工本場豬肉。外部人流：所有外來人員及非生產(chǎn)人員不得進入生產(chǎn)區(qū)，特殊情況下，必須隔離凈化3～5 d，經(jīng)淋浴消毒，更換豬場的防護服后方可入場，并嚴(yán)格遵守場內(nèi)的防疫制度。參觀人員進場前必須有領(lǐng)導(dǎo)簽字。

3.4 豬偽狂犬病凈化方案執(zhí)行過程和結(jié)果

3.4.1 豬偽狂犬病實驗室檢測結(jié)果

根據(jù)2003年抽檢發(fā)現(xiàn)3個母豬場的總體陽性和可疑率共為4.7%，因此按方案一進行。分階段對3個豬場的種豬采血檢測。從2003年-2005年，通過對全體基礎(chǔ)公、母豬采血檢測淘汰陽性豬、嚴(yán)格的防疫措施、加強管理、嚴(yán)把后備豬質(zhì)量關(guān)等技術(shù)措施，共檢測血清44 648頭份（其中3次全群血清檢測12 631頭份），每年對自留的后備種豬、部分對外銷售種豬、種公豬、有問題的種豬以及設(shè)置崗哨豬定期檢測，共監(jiān)測26 628頭份血清，檢測結(jié)果全為陰性，成功地完成豬偽狂犬病的凈化工作。

3.4.2 豬偽狂犬病凈化前后對生產(chǎn)經(jīng)營的影響（2003-2008年）

凈化方案從2003年開始，至2008年共實施6年，期間共出欄商品豬523 111頭，平均87 185頭/年，比執(zhí)行前3年平均增加57 459頭/年，增長1.93倍；推廣PR陰性種豬70 366頭，平均11 728頭/年，比前3年平均增加4 088頭/年，增長53.5%；平均每頭基本母豬年產(chǎn)2.22胎，年產(chǎn)活仔21.07頭；比前3年窩產(chǎn)活仔提高1.12頭，提高5.61%；哺乳豬死亡率 2.79%，比前3年平均3.65%降低0.86個百分點；保育豬死亡率3.42%，比前3年平均上升0.26個百分點；育肥豬死亡率2.41%，比前3年平均上升0.37個百分點；全群豬死亡率5.98%，比前3年平均6.81%下降12.9%。部分指標(biāo)上升原因是受2007和2008年自然冰凍災(zāi)害的影響。全群增重料重比平均為3.11:1，比前3年平均下降了0.19，下降5.76%；每頭基礎(chǔ)母豬年提供商品豬18.96頭，比前3年平均17.9頭增加了1.06頭，增長5.92%。項目實施6年，實現(xiàn)利潤5 412.88萬元，年均利潤902.15萬元, 比前3年平均110.84萬元增長7.14倍（詳見表1）。

3.5 豬偽狂犬病凈化小結(jié)

采用全群采血檢測、淘汰野毒感染種豬、強化豬偽狂犬病gE基因缺失疫苗免疫、引入陰性后備種豬群、嚴(yán)格執(zhí)行生物安全防疫體制及管理等綜合性措施，成功地在大于6 000頭母豬的種豬場凈化了豬偽狂犬病，構(gòu)建了陰性種豬群。在國內(nèi)首家建立了豬偽狂犬病毒感染低陽性率的大型種豬場的豬偽狂犬病凈化模式。

4 2011年P(guān)R毒株出現(xiàn)變異時的應(yīng)對措施

2011年底和2012年國內(nèi)多個省市的養(yǎng)豬場出現(xiàn)豬偽狂犬病疫情，先是從北方開始，后面逐漸漫延至南方。為應(yīng)對這波疫情，主要開展如下工作：疫苗篩選試驗；母源抗體檢測試驗；中和抗體試驗；免疫程序優(yōu)化試驗；PR新感染場凈化方案的優(yōu)化。

4.1 疫苗篩選試驗

因2011年中國北方地區(qū)PR疫情較復(fù)雜，為應(yīng)對將來可能出現(xiàn)的疫情，2012年12月再次開展不同疫苗的比對試。B苗和M苗二種疫苗，在后備豬（育肥豬）、母豬等免疫對比試驗，整體分析后M苗優(yōu)于B苗。因此2012年豬群的PR免疫改用M苗。

4.2 母源抗體檢測試驗

2013年進一步開展母源抗體衰減試驗。理論上M疫苗母源抗體在仔豬可以持續(xù)14周齡左右，2013年的檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)母源抗體在7周齡就衰減至只有22%為陽性（當(dāng)時懷疑與方法有關(guān)系？）

2014年3-4月的試驗（表2）證實當(dāng)時是操作問題（2013年當(dāng)時的被檢樣品被稀釋40倍）。2014年3-4月的母源抗體衰減試驗證實M苗的母源抗體可持續(xù)14周（14周60%豬只gB抗體陽性）。通過母源抗體試驗，表明在14周齡進行首免是合理的。2015年進一步抽檢部分豬場檢測母源抗體，驗證使用M疫苗仔豬可在14周進行首免（表3）。

4.3 PR疫苗的中和抗體試驗

鑒于目前國內(nèi)各個地區(qū)的PR疫情變得復(fù)雜，周邊的感染壓力在加大，2014-2015年開展中和抗體試驗。針對不同疫苗（活疫苗/滅活疫苗）的組合試驗和不同免疫方式進行試驗，應(yīng)用中和抗體評估疫苗的質(zhì)量和免疫程序的合理性。把試驗血清一式三份送到3個不同省份檢測機構(gòu)，進行PR的中和抗體檢測，3個單位的檢測結(jié)果基本一致。

4.3.1 活苗多次免疫后的中和抗體試驗

選擇不同胎次的妊娠母豬，分兩種方法跟胎免疫。A組連續(xù)免疫3次2頭份活疫苗，B組連續(xù)3次免疫1頭份同批號的活疫苗，中和抗體的結(jié)果如表4。

4.3.2 后備豬加強免疫試驗

選擇后備母豬30頭，分為兩組，A組只免疫活疫苗；B組在活疫苗的基礎(chǔ)上4周再加強免疫1針滅活苗，試驗結(jié)果如表5。

4.3.3 后備豬免疫方式的對比試驗

試驗分兩組，每組25頭，試驗前所有后備豬已免疫過2頭份活苗。第1組，3周后加強免疫1次滅活苗，4周后采血檢測中和抗體；第2組，間隔3周連續(xù)免疫2次滅活苗，3周后檢測中和抗體。檢測結(jié)果如表6。

表1 PR凈化前后對生產(chǎn)經(jīng)營的影響

表2 2014年3-4月免M疫苗后母源PRVgB抗體檢測結(jié)果

表3 2015年P(guān)R母源抗體（PRVgB）檢測結(jié)果

4.4 免疫程序優(yōu)化試驗

因篇幅限制，不做表格。僅使用上部分試驗結(jié)論：當(dāng)豬場周邊或內(nèi)部有疫情危脅時，使用滅活苗進行加強免疫，能夠獲得更高的中和抗體。育肥豬使用進口滅活苗做二免要優(yōu)于國產(chǎn)活苗（2014-2015年的試驗數(shù)據(jù)）。

4.5 PR新感染場的凈化

2014-2016年3年來，與良圻公司緊密合作的部分規(guī)模豬場新感染了PR。按良圻公司的凈化方案，在相關(guān)技術(shù)人員的指導(dǎo)下，成功地完成了豬偽狂犬病凈化。進一步驗證原來的方案和措施是行之有效的。

4.5.1 案例一： 僅使用活疫苗的凈化模式（見表7）。

4.5.2 案例二：使用進口滅活疫苗的凈化模式（見表8）

5 討論

5.1 疫苗的選擇

開展PR的凈化，必須要篩選質(zhì)量可靠的gE基因缺失疫苗；疫苗的批間差異要小。企業(yè)必須了解并驗證疫苗的特點，開展疫苗的相關(guān)試驗，比如疫苗的保護力試驗、疫苗效價持續(xù)時間等。企業(yè)用上一個疫苗之后，不要輕易更換疫苗品牌，除非此疫苗出現(xiàn)質(zhì)量問題或臨時有其他方面的特殊要求等。

5.2 疫苗免疫程序的制定與優(yōu)化

根據(jù)疫苗的特點，要制定適合本場的免疫程序。比如選擇水佐劑疫苗或油佐劑疫苗，二者抗體的持續(xù)時間會有一定的差異。母豬場執(zhí)行一刀切或跟胎免疫，其對應(yīng)仔豬的免疫也會有差異。這些都需要養(yǎng)殖企業(yè)根據(jù)實際情況進行相應(yīng)的優(yōu)化。

5.3 企業(yè)實驗室的建立與完善

把檢測結(jié)果第一時間服務(wù)于養(yǎng)豬生產(chǎn)，規(guī)模豬場的獸醫(yī)實驗室必須要配置，建設(shè)在豬場或周邊，讓檢測結(jié)合生產(chǎn)一線，真正指導(dǎo)并服務(wù)于一線；更加有利于豬場日常疾病監(jiān)測或某項疾病的控制與凈化。

5.4 PR凈化陽性率的界定

通常來說，10%是較好的一個指標(biāo)。超過10%需要淘汰較多的感染豬群，有時有些豬群還處于妊娠階段，淘汰的代價是很高的，尤其是2019-2020這兩年，豬價相當(dāng)高。但10%不是固定不變的，企業(yè)可以根據(jù)自己的實際情況和市場情況，可以調(diào)高或降低相應(yīng)的設(shè)定陽性比例，比如5%或15%。

5.5 PR控制與凈化中滅活疫苗的使用和全群檢測頻率

凈化開始后，加強疫苗的免疫劑量和頻率，有助于減少部分潛伏感染豬只的排毒，有利于快速完成PR的凈化。通過試驗和臨床凈化經(jīng)驗，在活疫苗的基礎(chǔ)上，間隔2～4周加強免疫一針滅活疫苗，可顯著提高中和抗體水平，十分有益于豬群提高抗感染的風(fēng)險，降低被感染的概率（注意滅活疫苗免疫后僅僅是降低被感染的風(fēng)險；當(dāng)接觸的高含量病毒時，還是有可能被感染）。開始凈化方案時，至少每個月要開展一次的全群檢測，在條件許可時，最好能15 d全群檢測一次（《豬病學(xué)》第11版第560頁：IgG 抗體在感染后7 d開始出現(xiàn)，接種后10 d開始出現(xiàn)）。由于PR病毒在體內(nèi)排毒持續(xù)時間久（《豬病學(xué)》第11版第554頁：感染后18～25 d可以在口咽拭子中檢測到，病毒感染后1～2 d開始散毒, 2～5 d到達高峰，可持續(xù)17 d）[4]，全群檢測至少要連續(xù)檢測3次，連續(xù)2次陰性后，才能設(shè)置崗哨豬，進入假定陰性和驗證階段。

表4 活苗不同劑量多次免疫后中和抗體結(jié)果

表5 后備豬加強免疫監(jiān)測結(jié)果

表6 后備豬不同免疫次數(shù)的中和抗體檢測結(jié)果

表7 某豬場PR全群檢測結(jié)果匯總

表8 某豬場PR全群檢測結(jié)果匯總

5.6 生物體系的完善

一般來說疾病的凈化不是最難，更難的是凈化后的維持，繼續(xù)多年保持陰性。這就需要企業(yè)不斷地完善生物安全措施，同時根據(jù)周邊疫情情況，調(diào)整本場生物安全體系，能適應(yīng)周邊最新形勢的變化。如果最基本的生物安全措施都無法保障，建議先建立和完善本場的生物安全體系，再考慮某項疾病的清除與凈化工作。

6 結(jié)論

良圻原種豬場2003年實施的豬偽狂犬病凈化方案，通過完善并嚴(yán)格執(zhí)行生物安全措施，采用全群檢測淘汰法、加強豬偽狂犬病gE基因缺失疫苗免疫、不斷引入PR陰性后備種豬群和加強日常飼養(yǎng)管理等綜合性措施，成功地在大于6 000頭母豬的種豬場凈化了豬偽狂犬病。在國內(nèi)首家建立豬偽狂犬病毒感染低陽性率的大型種豬場的豬偽狂犬病凈化模式，為規(guī)?；i場開展豬偽狂犬病的控制與凈化提供了寶貴的經(jīng)驗與借鑒。在此凈化方案的基礎(chǔ)上，加上對基礎(chǔ)豬群免疫滅活疫苗，可縮短基礎(chǔ)豬群PR的凈化進程，進而表明多年前制定的PR凈化方案依然有效。

致謝

感謝明尼蘇達大學(xué)HanSoo Joo和Bob Morrsion二位教授對良圻公司PR凈化方案的修改和指導(dǎo)，感謝閆之春博士的技術(shù)指導(dǎo)，也感謝良圻原種豬全體員工的辛苦付出，尤其是早年第二原種豬場全體員工和獸醫(yī)實驗室全體成員不辭辛勞奮戰(zhàn)精神。