趙新霞　陳雙慶

摘要：為了解貴州省豬場(chǎng)主要病毒性疫病的流行情況，運(yùn)用熒光PCR方法對(duì)2016年1月至2019年12月收集的1 679 份無害化處理廠的樣品進(jìn)行豬瘟病毒（CSFV）、豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）、豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）、豬偽狂犬病毒（PRV）、豬細(xì)小病毒（PPV）、豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）、豬流行性腹瀉病毒（PEDV）共7種病原樣品檢測(cè)，結(jié)果表明，CSFV、PRRSV、PCV2、PRV、PPV、TGEV、PEDV的陽性率分別為1.32%、20.65%、20.43%、21.91%、2.25%、4.60%、3.99%;PCV2+PPV、PCV2+PRV、PPV+PRV、TGEV+PEDV病原混合感染率為5.24%、6.44%、8.95%、3.38%;3種病原PCV2+PPV+PRV混合感染率為2.62%;這7種疫病在不同的季節(jié)感染率差異均顯著（P<0.05），不同疫病的陽性率在同一季上差異均顯著（P<0.05）。按照不同病種間平均陽性率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，除了豬偽狂犬病和流行性腹瀉病的陽性率差異顯著之外（P<0.05），其他病種間的差異不顯著（P>0.05）。從調(diào)查結(jié)果可以看出，貴州省規(guī)?；i場(chǎng)重要疫病中，以圓環(huán)2型的感染最為嚴(yán)重，其次是藍(lán)耳病和偽狂犬病，并伴有2種以上病原混合感染的現(xiàn)象存在，因此，下一步應(yīng)加強(qiáng)動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)和防控工作。

關(guān)鍵詞：貴州;流行病學(xué);豬;檢測(cè);病毒

中圖分類號(hào)：S858.28?? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號(hào)：1002-1302（2020）19-0177-04

收稿日期：2020-07-16

基金項(xiàng)目：2019年度六盤水師范學(xué)院高層次人才科研啟動(dòng)基金（編號(hào)：LPSSYKYJJ201903）。

作者簡介：趙新霞（1988—），女，河南周口人，博士，主要從事動(dòng)物遺傳育種與繁殖。E-mail：1327372534@qq.com。

我國是世界上養(yǎng)豬業(yè)比較發(fā)達(dá)的大國，目前我國豬肉供應(yīng)在全球豬肉供應(yīng)鏈當(dāng)中成為重要組成部分[1]。當(dāng)前，隨著豬病病原的不斷發(fā)展和變異、境內(nèi)境外貿(mào)易交流頻繁，我國養(yǎng)豬場(chǎng)的豬源病毒性疾病由單一性和地方小流行，逐漸發(fā)展為多樣性和地方流行、大流行，乃至全國性的暴發(fā)[2-3]。豬瘟病毒、豬圓環(huán)病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒、豬傳染性胃腸炎病毒、豬流行性腹瀉病毒、豬細(xì)小病毒、豬口蹄疫病毒、豬偽狂犬病毒等常見的豬源型病毒仍是危害養(yǎng)豬業(yè)的主要病原。段群棚等用RT-PCR/PCR方法對(duì)2014—2018年采集的349份樣品進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征、豬圓環(huán)病毒、豬偽狂犬病毒、豬細(xì)小病毒、豬乙型腦炎病毒的陽性檢出率在不同的年份和不同的季節(jié)之間差異很明顯，且這幾種病原的陽性檢出率依次是6%、5%、35%、13%、32%、15%[4]。孫秋艷等對(duì)2014—2016年收集的2 289份發(fā)病豬的病料進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，如豬繁殖與呼吸綜合征、豬圓環(huán)病毒2型等的檢出率在77.9%，其中單純性感染一種病原的檢出率為66.5%，混合感染的檢出率為11.4%。在不同月份，單純性感染的陽性檢出率差異非常明顯，且從2014—2016年單純性感染陽性率逐年遞增[5]。除這些常發(fā)病外，新的疫病也在不斷發(fā)展和蔓延，尤其是從2010年以來，我國許多豬場(chǎng)發(fā)生常見豬源性病毒病地方流行，甚至全國大流行的現(xiàn)象。如2010年我國許多省份相繼出現(xiàn)的豬流行性腹瀉病，發(fā)病率和死亡率都非常高，尤其是仔豬，出現(xiàn)嚴(yán)重的嘔吐、腹瀉，直至脫水死亡，新生仔豬的發(fā)病率和死亡率幾乎是100%[6]。2016年報(bào)道的部分地區(qū)新發(fā)現(xiàn)的豬圓環(huán)病毒3型，在我國某些豬場(chǎng)也相繼出現(xiàn)，并傳播至全國各個(gè)地區(qū)[7]。2018年由俄羅斯傳播至我國的非洲豬瘟病毒，致使我國養(yǎng)豬場(chǎng)經(jīng)濟(jì)損失極為慘重，市場(chǎng)生豬存欄量約為發(fā)病前的1/3，豬肉價(jià)格上調(diào)幅度為原來肉價(jià)的3倍以上，給人們的生活帶來很大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。本研究對(duì)2019年貴州部分地市采集的樣品進(jìn)行7種常見病毒性疫病檢測(cè)和分析，以期為貴州省豬源性病毒病的綜合防控提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品來源

2016年1月至2019年12月，每月從無害化處理廠采集的病死豬組織樣品，樣品總數(shù)為1 232份，組織樣品包括病死豬的肝臟、脾臟、腎臟、肺臟、肌肉、全血等。將采集的樣品置于-20 ℃冰箱，當(dāng)月完成檢測(cè)并統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。

1.2 使用試劑

本研究所使用的試劑為豬瘟病毒核酸熒光RT-PCR 檢測(cè)試劑盒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒核酸熒光RT-PCR檢測(cè)試劑盒、豬圓環(huán)病毒2型核酸熒光RT-PCR檢測(cè)試劑盒、豬細(xì)小病毒核酸熒光RT-PCR檢測(cè)試劑盒、豬傳染性胃腸炎病毒核酸熒光RT-PCR檢測(cè)試劑盒、豬流行性腹瀉病毒核酸熒光RT-PCR檢測(cè)試劑盒，分別購自北京世紀(jì)元亨動(dòng)物防疫技術(shù)有限公司、洛陽萊普生信息科技有限公司、上海之江生物科技股份有限公司、武漢科前生物股份有限公司。

1.3 樣品處理和核酸提取

對(duì)于組織樣品：從樣品3個(gè)不同的部位共取出0.05 g并放入組織研磨管中，加入1 mL PBS溶液和1個(gè)鋼絲球，放入研磨儀進(jìn)行研磨，之后1 500 r/min 離心3 min，上清作為核酸提取用原料。核酸提取：按照核酸提取試劑盒和全自動(dòng)核酸提取儀的操作規(guī)程進(jìn)行提取。

1.4 7種病毒性疫病的檢測(cè)

這7種病原均采用熒光PCR方法進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)過程中嚴(yán)格按照檢測(cè)試劑盒內(nèi)部說明書進(jìn)行每種疫病的程序設(shè)置和結(jié)果的判定。出現(xiàn)可疑樣品時(shí)，需要重新檢測(cè)。

2 結(jié)果分析

2.1 組織樣本的采集情況

2016年1月至2019年12月，采集豬組織樣品和其他樣品共計(jì)1 679份，其中常見疫病的樣品采集情況如表1和表2所示。

2.2 病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果

本研究對(duì)采集的1 679份病死豬組織樣品，用熒光PCR檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果（表3）表明，CSFV、PCV2、PPV、PRV、PRRSV、TGEV、PEDV共7種常見疫病的陽性率分別為1.32%、20.65%、20.43%、21.91%、2.25%、4.60%、3.99%。同一種動(dòng)物疫病在不同年份其陽性率之間差異不顯著（P>0.05），不同病種之間的感染率具有差異性，如豬瘟與圓環(huán)2型、豬細(xì)小病毒和豬偽狂犬病毒之間的感染率差異顯著（P<0.05），與豬繁殖與呼吸綜合征（藍(lán)耳病）、流行性腹瀉和傳染性胃腸炎之間沒有顯著性差異（P>0.05）。

對(duì)不同區(qū)域樣本之間陽性感染率進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，不同區(qū)域不同病種對(duì)感染率的影響均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表4）。如豬瘟感染陽性率為1.32%，豬圓環(huán)病毒2型陽性率為20.65%，兩者之間差異顯著（P<0.05）。但與豬藍(lán)耳病、傳染性胃腸炎和流行性腹瀉的陽性感染率差異不顯著（P>0.05）。黔東地區(qū)與黔中、黔西地區(qū)之間總體陽性率之間差異均顯著（P<0.05）。

2.3 7種疫病在時(shí)間上的分布

將1 679份組織樣品檢測(cè)結(jié)果按照不同的季節(jié)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，從統(tǒng)計(jì)結(jié)果（表5）可以看出，這7種疫病在不同的季節(jié)差異均不顯著（P>0.05）。

2.5 混合感染情況

在所檢測(cè)的1 679份樣品中，出現(xiàn)2種疫病混合感染的感染率為20.63%，其中PCV2+PPV混合感染率為5.24%;PCV2+PRV混合感染率為6.44%;PPV+PRV混合感染率最高，達(dá)到8.95%。3種疫病混合感染的陽性率為2.62%（表6）。

3 討論與結(jié)論

近年來，隨著我國養(yǎng)豬業(yè)的蓬勃發(fā)展，一些規(guī)?；图s化的現(xiàn)代養(yǎng)豬企業(yè)在不斷興起和發(fā)展，但對(duì)我國養(yǎng)豬業(yè)有嚴(yán)重影響的因素有很多，其中包括養(yǎng)豬業(yè)常常面臨的動(dòng)物疫病，且患病豬感染單一病原的現(xiàn)象和多重病原的現(xiàn)象在不斷增加，尤其是感染多種病原的情況下，容易造成豬死亡[8]。在多種病原混合感染的病例中，有細(xì)菌與細(xì)菌混合感染引起的，也有病毒與病毒混合感染引起的，也有細(xì)菌與病毒混合感染引起的。白凈等在2006年對(duì)河南省10個(gè)豬場(chǎng)重要?jiǎng)游镆卟∵M(jìn)行為期1年的檢測(cè)和流行病學(xué)動(dòng)態(tài)分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，所調(diào)查的豬場(chǎng)雖然進(jìn)行了部分豬重要?jiǎng)游镆卟〉拿庖?，但免疫效果比較差。豬瘟抗體陽性率只達(dá)到60%或者65%，且在監(jiān)測(cè)的10個(gè)豬場(chǎng)當(dāng)中，有4個(gè)豬場(chǎng)的豬瘟病毒核酸陽性。在7個(gè)未進(jìn)行豬藍(lán)耳病免疫的豬場(chǎng)當(dāng)中，豬藍(lán)耳病的抗體陽性率達(dá)到57.1%。在8個(gè)未免疫豬偽狂犬病的豬場(chǎng)當(dāng)中，豬偽狂犬病的抗體陽性率達(dá)到84.4%[9]。曲哲會(huì)等用PCR和RT-PCR 方法對(duì)豫南地區(qū)規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)采集的病料進(jìn)行豬瘟、豬圓環(huán)病毒2型、豬繁殖與呼吸綜合征和豬偽狂犬病進(jìn)行調(diào)查發(fā)現(xiàn)，在調(diào)查的豬場(chǎng)當(dāng)中，圓環(huán)病毒2型的感染率最高，達(dá)到70.5%，偽狂犬病的陽性率最低，為32.4%;此外，這些被調(diào)查的豬場(chǎng)4種病混合感染的情況非常嚴(yán)重，其中，有74.6%的豬場(chǎng)存在2種或者2種以上病毒病的混合感染[10]。王懷禹等用血清學(xué)和病原學(xué)的檢測(cè)方法對(duì)南充地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)的1 857份血清樣品和152份臨床病料進(jìn)行豬瘟、豬藍(lán)耳病、豬偽狂犬病和豬圓環(huán)病毒2型監(jiān)測(cè)，發(fā)現(xiàn)這幾種病的抗體免疫合格率均在70%以上，病原陽性感染率分別是9.21%、17.11%、18.42%、22.37%。病原總單獨(dú)感染率為38.16%，病原總混合感染率為13.82%[11]。在本研究中對(duì)1 679 份樣品進(jìn)行病原學(xué)研究，發(fā)現(xiàn)豬瘟病毒（CSFV）、豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）、豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）、豬偽狂犬病毒（PRV）、豬細(xì)小病毒（PPV）、豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）、豬流行性腹瀉病毒（PEDV）的陽性感染率分別為1.32%、20.65%、20.43%、21.92%、2.25%、4.60%、3.99%。2種病原PCV2+PPV、PCV2+PRV、PPV+PRV、TGEV+PEDV的混合感染率分別是5.24%、6.44%、8.95%、3.38%;3種病原PCV2+PPV+PRV混合感染率為2.62%。在2種病原混合感染的病例中，以豬細(xì)小病毒和豬偽狂犬病毒的混合感染率最高，以傳染性胃腸炎和流行性腹瀉病毒的混合感染率最低。此外，在被調(diào)查的這7種主要的豬病當(dāng)中，不同病種、不同區(qū)域之間均存在顯著差異。從調(diào)查結(jié)果可以看出，貴州省規(guī)?；i場(chǎng)重要疫病中，以圓環(huán)病毒2型的感染最為嚴(yán)重，其次是藍(lán)耳病和偽狂犬病，并伴有2種以上病原混合感染的現(xiàn)象存在，因此，下一步應(yīng)加強(qiáng)動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)和防控工作。

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