楊麗菊，于克，朱云芳

揚(yáng)州大學(xué)附屬醫(yī)院，江蘇揚(yáng)州225000

宮頸癌是女性生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，可嚴(yán)重影響女性的身心健康，甚至危及生命[1]。近年來，隨著醫(yī)療水平的不斷發(fā)展，宮頸癌的治療方法越來越多，但其遠(yuǎn)期效果并未明顯改善，宮頸癌依舊是女性癌癥相關(guān)死亡的第二大原因[2-3]。目前，宮頸癌確切的發(fā)病機(jī)制尚不清楚。因此，探索宮頸癌的發(fā)病機(jī)制，尋找特異性治療靶點(diǎn)，對其防治具有重要意義。微小RNA(miRNA)是一種內(nèi)源性非編碼小分子RNA，長度為18～25個(gè)核苷酸，可參與多種生理和病理生理過程，如個(gè)體發(fā)育、免疫性疾病、腫瘤生成等[4-5]。有研究報(bào)道，miR-124-3p的啟動子在宮頸癌細(xì)胞中被高度甲基化，可能在宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展過程中起促進(jìn)作用[6]。但miR-124-3p在宮頸癌中的具體分子機(jī)制仍不十分清楚，尚需進(jìn)一步研究。叉頭框蛋白(FOX)家族是一類DNA結(jié)合區(qū)具有翼狀螺旋結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)錄因子，能夠調(diào)節(jié)多種細(xì)胞過程，如細(xì)胞增殖、分化和凋亡等[7]。叉頭框蛋白Q1(FOXQ1)是FOX家族成員之一，具有調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、侵襲等生物學(xué)功能，其在結(jié)腸癌、肺癌、胃癌等細(xì)胞中均異常表達(dá)[8-9]。但目前FOXQ1在宮頸癌中的具體作用機(jī)制仍不清楚。2016年1月—2019年12月，本研究觀察了宮頸癌組織miR-124-3p、FOXQ1 mRNA表達(dá)變化，并分析二者表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 以同期在揚(yáng)州大學(xué)附屬醫(yī)院住院并經(jīng)術(shù)后組織病理檢查確診的83例宮頸癌患者為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合宮頸癌診斷；②初次診治；③入院前未接受放化療、免疫或生物治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他宮頸疾病者；②有惡性腫瘤病史者；③伴心、肺、腎等臟器功能不全者?；颊吣挲g33～66(55.27±3.1)歲，其中<55歲37例、≥55歲46例；腫瘤直徑：<3 cm 56例，≥3 cm 27例；腫瘤浸潤深度：T1、T2期53例，T3、T4期30例；組織分化程度：低中分化44例，高分化39例；FIGO分期：Ⅰ、Ⅱ期67例，Ⅲ、Ⅳ期16例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移38例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移45例。本研究經(jīng)揚(yáng)州大學(xué)附屬醫(yī)院倫理委員會審核，患者或其家屬知情同意并簽署知情同意書。

1.2 miR-124-3p、FOXQ1 mRNA表達(dá)檢測 取宮頸癌組織及癌旁組織(距腫瘤組織邊緣3 cm以上且經(jīng)組織病理檢查證實(shí)為正常宮頸組織)，-70 ℃冰箱保存。取宮頸癌組織與癌旁正常組織各約50 mg，TRIzol法提總RNA。將總RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，逆轉(zhuǎn)錄條件：25 ℃ 10 min、50 ℃ 45 min、85 ℃ 5 min。以cDNA為模板，按Direct PCR Kit說明進(jìn)行PCR擴(kuò)增。所有引物由上海艾研生物科技有限公司設(shè)計(jì)合成。miR-124-3p上游引物5′-GGGTATTGAGGAAGGTGTT-3′、下游引物5′-CAGTGCGTGTCGTGGAGT-3′，內(nèi)參GAPDH上游引物5′-CGCAAAGGTCGGAGTCAACG-3′、下游引物5′-GCAGTTGTCATGGATGATCC-3′；FOXQ1上游引物5′-CGCGGACTTTGCACTTTGAA-3′、下游引物5′-AGCTTTAAGGCACGTTTGATGGAG-3′，內(nèi)參U6上游引物5′-GAGCCACAGCGTAACG-3′、下游引物5′-CTAGCACATAGTACAGG-3′。PCR反應(yīng)體系共20 μL：2×Direct PCR Mix 10 μL，DNA聚合酶1 μL，cDNA模板1 μL，上下游引物各1 μL，ddH2O補(bǔ)足至20 μL；反應(yīng)條件：95 ℃ 10 min，95 ℃ 15 s、60 ℃ 1 min共40個(gè)循環(huán)。以GAPDH或U6為內(nèi)參，采用2-ΔΔCT法計(jì)算目的基因相對表達(dá)量。

2 結(jié)果

2.1 不同組織miR-124-3p、FOXQ1 mRNA表達(dá)比較 宮頸癌組織miR-124-3p相對表達(dá)量低于癌旁正常組織，F(xiàn)OXQ1 mRNA相對表達(dá)量高于癌旁正常組織(t分別為82.192、85.643，P均<0.05)。見表1。

表1 宮頸癌組織與癌旁正常組織miR-124-3p和FOXQ1 mRNA相對表達(dá)量比較

2.2 宮頸癌組織miR-124-3p、FOXQ1 mRNA表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系 見表2。

2.3 宮頸癌組織miR-124-3p表達(dá)與FOXQ1 mRNA表達(dá)的關(guān)系 宮頸癌組織miR-124-3p表達(dá)與FOXQ1 mRNA表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.539，P<0.05)。

3 討論

宮頸癌是全球女性第三大常見惡性腫瘤。我國每年宮頸癌新發(fā)病例約13.2萬例，死亡達(dá)5.3萬例，已成為當(dāng)前嚴(yán)重威脅我國女性健康的重要疾病之一[10]。目前，宮頸癌仍然以手術(shù)、放療、化療為主要治療手段，但治療效果并不能令人滿意[11]。分子靶向治療是近年發(fā)展起來的一種新的腫瘤治療方式。但宮頸癌發(fā)生、發(fā)展確切的分子機(jī)制尚不清楚，缺少相應(yīng)的分子治療靶點(diǎn)。因此，深入研究與宮頸癌發(fā)生、發(fā)展相關(guān)的分子生物標(biāo)志物，對其靶向治療具有重要意義。

近年研究表明，miRNA能夠參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，可作為腫瘤早期診斷的生物標(biāo)志物和潛在的治療靶點(diǎn)[12]。miR-124-3p是高度保守的miRNA，在動植物細(xì)胞中廣泛表達(dá)。研究表明，miR-124-3p

在多種腫瘤細(xì)胞中異常表達(dá)，如胃癌、結(jié)腸癌、乳腺等[13]。本研究發(fā)現(xiàn)，宮頸癌組織miR-124-3p低表達(dá)，并且其表達(dá)與腫瘤浸潤深度、組織分化程度、FIGO分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，提示miR-124-3p可能參與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展。有研究報(bào)道，miR-124-3p表達(dá)缺失可導(dǎo)致SphK1介導(dǎo)的卵巢癌細(xì)胞侵襲和遷移，使腫瘤惡性程度進(jìn)一步增加[14]，本研究結(jié)論與其相似。miR-124-3p可能通過下調(diào)靶基因星形細(xì)胞上調(diào)基因1表達(dá)，對腫瘤細(xì)胞增殖和分化產(chǎn)生抑制作用，從而延緩腫瘤惡性進(jìn)展[13]。有研究發(fā)現(xiàn)，miR-124-3p表達(dá)上調(diào)的HeLa、SiHa細(xì)胞遷移能力明顯降低，對腫瘤細(xì)胞的侵襲和遷移具有一定抑制作用；同時(shí)，宮頸癌細(xì)胞E-鈣黏蛋白、β-連環(huán)蛋白過表達(dá)，而N-鈣黏蛋白、MMP-9低表達(dá)[14]。提示miR-124-3p能夠通過抑制宮頸癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，間接抑制宮頸癌的侵襲和轉(zhuǎn)移。

FOX家族是一種功能廣泛的轉(zhuǎn)錄因子家族。FOXQ1是FOX家族的重要成員之一，具有多種生物學(xué)功能，如調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲、遷移等[15]。KANEDA等[16]研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)OXQ1在結(jié)腸癌組織中表達(dá)上調(diào)，可通過調(diào)控下游靶基因E-鈣黏蛋白表達(dá)，促進(jìn)結(jié)腸癌進(jìn)展。有研究報(bào)道，胃癌組織FOXQ1表達(dá)上調(diào)，其表達(dá)上調(diào)能夠降低p21表達(dá)，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞惡性增殖以及凋亡受阻[17]。本研究發(fā)現(xiàn)，宮頸癌組織FOXQ1 mRNA高表達(dá)，其表達(dá)與腫瘤浸潤深度、組織分化程度、FIGO分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，提示FOXQ1可能參與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展。有研究報(bào)道，F(xiàn)OXQ1實(shí)質(zhì)上是一種癌基因，能夠通過調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)化生長因子β表達(dá)，進(jìn)而影響惡性腫瘤進(jìn)展[18]。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化是腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵步驟。FOXQ1在調(diào)節(jié)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程中起重要作用。FOXQ1蛋白與E-鈣黏蛋白的啟動子區(qū)域相互作用可促進(jìn)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，繼而促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的侵襲和遷移。此外，F(xiàn)OXQ1還可抑制細(xì)胞凋亡、延長細(xì)胞生長周期、上調(diào)靶基因細(xì)胞周期蛋白D表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。本研究相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，在宮頸癌組織中miR-124-3p表達(dá)與FOXQ1 mRNA表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。其原因可能是FOXQ1是miR-124-3p調(diào)控的下游靶基因，miR-124-3p可能通過負(fù)向調(diào)控FOXQ1促進(jìn)宮頸癌進(jìn)展。

綜上所述，宮頸癌組織miR-124-3p低表達(dá)、FOXQ1 mRNA高表達(dá)，二者表達(dá)變化與腫瘤惡性進(jìn)展密切相關(guān)，并且二者表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。但二者在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展過程中的具體分子機(jī)制還需要進(jìn)一步探索。