翟曉虎，張風(fēng)榮，李 玲，趙學(xué)剛，賀衛(wèi)華

(1.江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院，江蘇 泰州 225300；2.山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院，山東 濰坊 261061)

巴貝斯蟲是由蜱蟲傳播的一種血液寄生蟲，全世界廣泛分布。筆者近期接診1例犬吉氏巴貝斯蟲感染的病例，使用阿托伐醌(Atovaquone)和阿奇霉素聯(lián)合治療，后期使用克林霉素和強力霉素聯(lián)合用藥方法進行鞏固，效果良好，診治過程介紹如下。

1 病例介紹

松獅犬，3歲，雄性未絕育，體重為26 kg，主述：該犬1周前開始出現(xiàn)精神不好，食欲減退，2 d前食欲廢絕，喝水量較之前減少，尿液呈棕褐色，不愿運動，嗜睡。

2 臨床檢查

聽診呼吸頻率為52 次/min，心率160 次/min，體溫40.1 ℃。視診可見該犬精神萎靡、喜臥、全身無力，鼻鏡干燥，被毛雜亂無光澤，可視黏膜蒼白、黃染。

3 實驗室檢驗

3.1 血常規(guī)檢測 頭靜脈采集血液，EDTA-K2(乙二胺四乙酸二鉀)抗凝。采用Mindray BC-5000 Vet獸用全自動血液細胞分析儀檢查血常規(guī)。結(jié)果顯示，紅細胞數(shù)(RBC)2.14× 1012/L(正常值5.5× 1012～8.5× 1012/L、紅細胞壓積(HCT)9.4%(正常值37%～55%)、血紅蛋白濃度(HGB)29 gL(正常值110～190 g/L)和血小板數(shù)(PLT)46× 109/L(正常值117× 109～490× 109/L)，均嚴重低于正常范圍，說明該犬有嚴重的貧血。其他檢測結(jié)果未見異常。

3.2 血涂片檢查 EDTA抗凝血制備血涂片，瑞氏吉姆薩染色鏡檢，結(jié)果見中插彩版圖1。在多個紅細胞內(nèi)見淡藍色的環(huán)形蟲體，疑似為犬吉氏巴貝斯蟲。另外可見紅細胞大小不均，存在少量大紅細胞、球形紅細胞、多染性紅細胞和有核紅細胞。白細胞大小、著色良好。

3.3 血液生化檢測 頭靜脈采集血液，肝素鋰抗凝，采用斯馬特SMT-120V全自動生化分析儀檢測血液生化指標。血液生化結(jié)果顯示，總膽紅素升高，其他未見異常，提示該犬有溶血的可能。

3.4 PCR檢測 采用蛋白酶K裂解、苯酚抽提的方法從EDTA抗凝血中提取該犬血液中的DNA，根據(jù)犬巴貝斯蟲18S rRNA 基因設(shè)計的犬吉氏巴貝斯蟲和犬巴貝斯蟲通用引物，上游引物：5′-GTCTTGTAATTGGAATGATGGTGAC-3′，下游引物：5′-ATGCCCCCAACCGTTCCTATTA-3′，擴增目的片段339 bp，引物由英濰捷基(上海)貿(mào)易有限公司合成[1]。25 μL PCR反應(yīng)體系：2×TaqPCR Master Mix 12.5 μL，10 mmol/L 上、下游引物各0.5 μL，模板DNA 2 μL，補水至25 μL。PCR 循環(huán)參數(shù):94 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃變性30 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，重復(fù)10個循環(huán)，每個循環(huán)退火溫度降0.5 ℃；然后94 ℃變性15 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，重復(fù)25個循環(huán)；最后72 ℃延伸5 min。PCR產(chǎn)物用1.5%的瓊脂糖凝膠電泳鑒定。鑒定結(jié)果如圖2所示，待檢樣品PCR擴增條帶大小為339 bp，與設(shè)計的理論值相符，與陽性對照一致，同時陰性對照沒有條帶擴增，說明沒有假陽性。因此可判定該犬感染了巴貝斯蟲。

圖2 PCR檢測電泳圖

結(jié)合臨床癥狀、血常規(guī)檢查、血涂片鏡檢可見紅細胞內(nèi)巴貝斯蟲蟲體和PCR可檢測到犬巴貝斯蟲基因片段，診斷為犬吉氏巴貝斯蟲感染。

4 治療與轉(zhuǎn)歸

治療犬吉氏巴貝斯蟲病的原則為殺蟲、補血、保肝、防止繼發(fā)感染。因該犬貧血情況較嚴重，危及生命，需要先給該犬輸血。采集健康犬血液進行交叉配血試驗。根據(jù)該交叉配血結(jié)果，輸入200 mL新鮮血液[2]，肌內(nèi)注射促紅細胞生成素5.0 mL(1 000 IU/mL)和右旋糖酐鐵3.0 mL(0.1 g/mL)以促進血液的生成。該病例使用阿托伐醌[13.3 mg/(kg·bw·d)，口服]和阿奇霉素[10 mg/(kg·bw·d)，口服]聯(lián)合治療，連用2周。

治療過程中需要不斷監(jiān)控患犬的血液學(xué)指標，紅細胞數(shù)量、血紅蛋白濃度和紅細胞壓積。治療第2天患犬出現(xiàn)嘔吐，皮下注射止吐寧0.1 mL/(kg·bw)(10 mg/mL)。治療第7天，患犬恢復(fù)食欲，血常規(guī)檢查紅細胞數(shù)4.3×1012/L、紅細胞壓積22.4%、血紅蛋白濃度77 g/L。治療第14天，紅細胞參數(shù)恢復(fù)到正常范圍。為防止復(fù)發(fā)，使用克林霉素[12.5 mg/(kg·bw·d)，口服]、強力霉素[10 mg/(kg·bw·d)，口服]聯(lián)合用藥方法進行鞏固治療1周。1個月后，該犬所有血液指標正常，PCR檢測呈陰性。

5 討論

巴貝斯蟲病在世界廣泛分布，在熱帶、亞熱帶和溫帶地區(qū)特別嚴重。犬感染吉氏巴貝斯蟲的臨床癥狀主要表現(xiàn)為高熱、黏膜蒼白、黃染、尿液深黃色或暗褐色。發(fā)病時間主要集中在春夏之交和夏秋之交，這也正是巴貝斯蟲的傳播者蜱蟲的活躍期[3]。近年來由于藥物的長期使用，部分巴貝斯蟲對藥物產(chǎn)生耐藥，導(dǎo)致該病治療周期較長[1]。目前在我國流行的犬巴貝斯蟲主要為犬吉氏巴貝斯蟲[4-5]。吉氏巴貝斯蟲感染是一種蜱傳播疾病，感染犬可能出現(xiàn)免疫介導(dǎo)性溶血性貧血，治療不及時可能迅速死亡[6]。該病的致病機理是蟲體會在紅細胞內(nèi)繁殖，破壞紅細胞引起溶血性貧血，并引起黃疸[7]?；既１憩F(xiàn)精神不佳、喜臥、貧血、發(fā)熱、黃疸、血紅蛋白尿、可視黏膜蒼白等癥狀。急性感染或初次感染巴貝斯蟲的犬，血涂片不一定發(fā)現(xiàn)蟲體，但作為傳染原會使感染擴散，只有嚴重患犬通常可通過血涂片鏡檢發(fā)現(xiàn)蟲體而確診。PCR技術(shù)為準確地診斷感染早期的病犬和帶蟲犬提供了敏感性高、特異性好、試劑容易獲得、檢測速度快的診斷方法[8]。18S rRNA基因常用于犬巴貝斯蟲的PCR檢測，結(jié)合PCR產(chǎn)物限制性多態(tài)性分析(PCR-RFLP)可以鑒別不同種的犬巴貝斯蟲[1]。因此，通過結(jié)合血涂片血液寄生蟲檢查和PCR檢測可大大提高巴貝斯蟲病的檢出率，并能區(qū)分所感染巴貝斯蟲的類型。

治療犬巴貝斯蟲病的殺蟲藥通常使用抗梨形蟲的藥物。貝尼爾被視為傳統(tǒng)上最為有效的治療犬巴貝斯蟲病的藥物，過去臨床使用較多。由于貝尼爾的肝毒性較大，使用該藥物殺蟲的同時需要使用保肝藥物，即便如此劑量掌控不好也容易導(dǎo)致患犬死亡。阿托伐醌是抗原蟲動物藥，用于治療人類肺孢子蟲感染，對于抗巴貝斯蟲感染也有一定效果，阿托伐醌聯(lián)合阿奇霉素治療吉氏巴貝斯蟲最有效，是目前使用較多的治療犬巴貝斯蟲病的藥物。近年來，有報道顯示，貝尼爾治療后患犬的復(fù)發(fā)率較高，阿托伐醌聯(lián)合阿奇霉素治療后為了降低復(fù)發(fā)率，最好使用克林霉素和強力霉素進行鞏固治療。鑒于犬巴貝斯蟲很難被完全清除，復(fù)發(fā)率較高，因此做好疾病的預(yù)防十分重要，尤其是生活于犬巴貝斯蟲病流行地區(qū)或是經(jīng)常在戶外運動的犬一定要定期體外驅(qū)蟲，切斷傳播途徑。