王茹，趙瑞婧，范亞莉，宋雅楠，張東升，王鴿，劉旭靜，王玉環(huán)

作者單位：1西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部，陜西 西安710061；2西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬中心醫(yī)院呼吸科，陜西 西安710003；3延安大學(xué)醫(yī)學(xué)院，陜西 延安716000；4西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科，陜西 西安710004；5延安大學(xué)咸陽(yáng)醫(yī)院心內(nèi)科，陜西 西安712000

類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）是一 種以對(duì)稱(chēng)性多關(guān)節(jié)炎為主要臨床表現(xiàn)的全身性、慢性、自身免疫性疾病。目前，其發(fā)病機(jī)制仍有待進(jìn)一步明確。該病為一種常見(jiàn)的自身免疫性疾病，我國(guó)RA的患病率為32%～36%［1］。RA病人的預(yù)后在很大程度上是由疾病活動(dòng)性決定的。

人類(lèi)嗅素結(jié)構(gòu)域家族蛋白4（olfcctomedin4，OLFM4）屬于olfcctomedin家族相關(guān)成員，是一種糖蛋白，可正常表達(dá)于人的多種組織及器官。其在腫瘤組織中表達(dá)具有特異性，在胰腺癌、宮頸癌、結(jié)腸癌、胃癌等中均為高表達(dá)。其與消化系統(tǒng)腫瘤的關(guān)系成為近年研究的熱點(diǎn)［2］。而本研究則通過(guò)檢測(cè)OLFM4在RA關(guān)節(jié)滑膜組織中的表達(dá)，探討其與人類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的臨床病理關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料收集2017年10月至2018年10月期間就診于西安市紅會(huì)醫(yī)院的13例確診RA病人滑膜組織存檔蠟塊。其中，男性5例，女性8例；年齡范圍為36～63歲，平均年齡55歲。所選病人均符合2010年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)（ACR）/歐洲抗風(fēng)濕聯(lián)盟（EULAR）修訂的RA分類(lèi)診斷標(biāo)準(zhǔn)。另選取14例骨關(guān)節(jié)炎病人作為對(duì)照。標(biāo)本經(jīng)10%中性甲醛固定、常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切片厚5μm。本研究符合《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會(huì)赫爾辛基宣言》相關(guān)要求，病人或近親屬對(duì)研究方案簽署知情同意書(shū)。

1.2方法采用SP法檢測(cè)OLFM4，一抗工作濃度1∶500，HRP-DAB顯色，操作嚴(yán)格按照免疫組化試劑使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。免疫組化試劑盒購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司，HRP-DAB顯色劑、兔抗OLFM4抗體（NBP2-24535）均購(gòu)自美國(guó)羅福斯生物制劑公司。

1.3結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)OLFM4陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞質(zhì)，染色為棕黃色［3］。隨機(jī)選取3個(gè)高倍鏡（40×）視野。染色強(qiáng)度分4級(jí)：無(wú)色為0分、淺黃色為1分、棕黃色為2分、黃褐色為3分。判斷0分為陰性，1分為弱陽(yáng)性，2分為陽(yáng)性，3分為強(qiáng)陽(yáng)性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法OLFM4在RA病人及骨關(guān)節(jié)炎病人滑膜組織表達(dá)，OLFM4與RA臨床病理關(guān)系比較均采用χ2檢驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)分析由SPSS 18.0軟件完成，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 OLFM4在骨關(guān)節(jié)炎、RA病人滑膜組織中的表達(dá)情況在骨關(guān)節(jié)炎病人滑膜組織中OLFM4細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核均未出現(xiàn)明顯的棕黃色或棕褐色顆粒，鏡下視野呈陰性表達(dá)（見(jiàn)圖1），而在RA病人中OLFM4表達(dá)時(shí)，陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞質(zhì)，染色為棕黃色（見(jiàn)圖2）。14例骨關(guān)節(jié)炎病人滑膜組織中，OLFM4陽(yáng)性表達(dá)1例（7.14%），其中弱陽(yáng)性1例（7.14%），陰性表達(dá)13例（92.86%）；13例RA病人滑膜組織中，OLFM4陽(yáng)性表達(dá)10例（76.92%），其中強(qiáng)陽(yáng)性5例（38.46%），弱陽(yáng)性5例（38.46%），陰性表達(dá)3例（23.08%），OLFM4在RA病人滑膜組織中的陽(yáng)性表達(dá)高于骨關(guān)節(jié)炎病人（χ2＝13.595，P＝0.012）。

2.2 OLFM4表達(dá)與類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人臨床病理的關(guān)系13例類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎滑膜組織標(biāo)本中OLFM4表達(dá)與病人類(lèi)風(fēng)濕因子表達(dá)有關(guān)（P＜0.05），但與病人性別、年齡、ESR、CRP、及抗環(huán)瓜氨酸肽（CCP）抗體并不具有明顯的相關(guān)性（P＞0.05），見(jiàn)表1。

表1 OLFM4的表達(dá)與類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人臨床病理參數(shù)的關(guān)系/例

3 討論

RA對(duì)女性的影響較男性多3倍以上，于各年齡層次均可發(fā)病，但患病者年齡多集中于40～60歲之間。RA的早期臨床表現(xiàn)為關(guān)節(jié)腫脹及疼痛，人們往往可于體檢時(shí)發(fā)現(xiàn)，因此快速準(zhǔn)確地轉(zhuǎn)診到風(fēng)濕病專(zhuān)科對(duì)于早期緩解疼痛癥狀和預(yù)防或減少殘疾至關(guān)重要［4］。近年來(lái)，針對(duì)該疾病的相關(guān)研究不斷深入，但仍尚無(wú)特異性的臨床診斷方法［5］。因此，如何能夠早期、迅速，且特異性的確診RA是我們所迫切需要解決的問(wèn)題。

OLFM4，又稱(chēng)為 hOLfD［6］、GW112［7］，OLFM4 是olfcctomedin家族成員之一，該家族成員總數(shù)超過(guò)100多種，可分為7個(gè)亞族，因?yàn)槎季哂杏梢粋€(gè)250個(gè)氨基酸構(gòu)成的C-末端序列，故被叫做“olfcctomedin結(jié)構(gòu)域”。在細(xì)胞增殖、黏附和周期調(diào)節(jié)、神經(jīng)發(fā)育及腫瘤發(fā)生、發(fā)展中均發(fā)揮著非常重要的作用［6］，OLFM4最初發(fā)現(xiàn)于人的結(jié)腸炎黏膜隱窩上皮細(xì)，它位于人類(lèi)第13號(hào)染色體q14.3，含有5個(gè)外顯子，跨度為23 000 bp，大小在156～801 bp，內(nèi)含子大小在980～7 400 bp［2］。OLFM4 在許多癌癥腫瘤細(xì)胞中已被證明有著密切的相關(guān)性，如胃癌［8］、胰腺癌［9-10］、結(jié)直腸癌［11］、非小細(xì)胞肺癌［12］等，其更是結(jié)直腸癌不同階段的定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法中新的非轉(zhuǎn)移性腫瘤標(biāo)記物［13］。同時(shí)，其對(duì)于小腸干細(xì)胞分化也有一定的作用［14-15］。此外，其參與人髓系細(xì)胞白血病細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化、凋亡等過(guò)程［16-17］。但OLFM4在自身免疫性疾病特別是RA分子研究方面仍較為新穎，以往少見(jiàn)報(bào)道。本課題組通過(guò)檢測(cè)OLFM4在RA病人滑膜組織中的表達(dá)，旨在研究其表達(dá)是否會(huì)與RA的發(fā)病有關(guān)。進(jìn)一步的研究分析發(fā)現(xiàn)，RA病人滑膜組織OLFM4水平與部分臨床病理學(xué)參數(shù)有關(guān)［17］，如病人RF是否異常，提示OLFM4在RA的發(fā)生發(fā)展中可能發(fā)揮相關(guān)作用。

本研究嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)規(guī)范執(zhí)行，但仍可能存在以下幾方面的局限：首先，納入研究的病人數(shù)較少，故而可能會(huì)導(dǎo)致匯總結(jié)果偏高。其次，同樣由于研究對(duì)象數(shù)量較少，導(dǎo)致本研究未能分析OLFM4表達(dá)與病人預(yù)后之間的關(guān)系。再次，研究結(jié)果可見(jiàn)OLFM4在骨關(guān)節(jié)炎病人的滑膜組織表達(dá)幾乎均為陰性。因此，仍需更大量、更多樣本、更高質(zhì)量的研究來(lái)科學(xué)、客觀、全面的評(píng)價(jià)OLFM4在診斷RA方面的價(jià)值。

通過(guò)以上的實(shí)驗(yàn)，我們可以看到OLFM4在確診為RA病人的滑膜組織中的表達(dá)與骨關(guān)節(jié)炎病人滑膜組織表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提議對(duì)疑似RA的成人進(jìn)行OLFM4表達(dá)檢測(cè)?？傊?，OLFM4在提示RA的病情發(fā)展中具有重要作用，可為RA及骨關(guān)節(jié)炎的早期檢測(cè)、診斷、治療、預(yù)防提供新的靶點(diǎn)和分子標(biāo)志物。

（本文圖1，2見(jiàn)插圖12-1）