盧竹陽

利用GB 5009.86-2016標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定食品中抗壞血酸時(shí)，在前處理工作中我們經(jīng)常會(huì)遇到一些問題，下面筆者針對(duì)這些問題提出優(yōu)化措施，為抗壞血酸的檢測(cè)提供一些參考。

一、前處理過程中遇到的問題

1.配制流動(dòng)相時(shí)，6.8g磷酸二氫鉀和0.91g十六烷基三甲基溴化銨，用水溶解并定容至1L（用磷酸調(diào)pH至2.5-2.8），產(chǎn)生很多泡沫，難定容。

2.對(duì)上述流動(dòng)相（用A表示）進(jìn)行抽濾脫氣時(shí)，發(fā)現(xiàn)試劑很難過濾下來。

3.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，發(fā)現(xiàn)C18色譜柱出現(xiàn)堵塞現(xiàn)象。

二、優(yōu)化措施

1.針對(duì)流動(dòng)相產(chǎn)生很多泡沫難定容的問題，筆者建議應(yīng)在接近定容線的時(shí)候先讓溶液靜置一會(huì)兒，待泡沫漸漸消退后再緩慢加水定容。

2.針對(duì)抽濾流動(dòng)相A時(shí)難過濾的問題，首先先確定濾膜選擇是否正確，如果濾膜正確那就是流動(dòng)相的問題。對(duì)于實(shí)驗(yàn)涉及到流動(dòng)相A和流動(dòng)相B，有時(shí)候會(huì)采取雙通道按一定比例進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，也有時(shí)候會(huì)先按一定比例混合，再單通道（100%）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，所以，既然抽濾流動(dòng)相A時(shí)難抽濾，那可以按標(biāo)準(zhǔn)上A：甲醇（98：2）的比例，進(jìn)行混合抽濾脫氣，便會(huì)發(fā)現(xiàn)很容易抽濾下來。這時(shí)也需要注意應(yīng)緩慢抽濾，減少泡沫的產(chǎn)生，結(jié)束時(shí)靜置一會(huì)兒，待泡沫消掉。

3.關(guān)于色譜柱堵塞問題，主要來源于三個(gè)方面：流動(dòng)相、固定相、樣品。首先分析流動(dòng)相。本次實(shí)驗(yàn)的色譜柱：Eclipse XDB-C18、粒徑5μm、長度4.6×250mm，建議的pH范圍：2.0-9.0，最高操作溫度：60℃，新開啟使用的色譜柱，100%甲醇激活，流動(dòng)相均超聲或抽濾脫氣，現(xiàn)配現(xiàn)用，流動(dòng)相的pH在2.5-2.8，柱溫25℃，色譜柱使用條件符合要求，所以流動(dòng)相導(dǎo)致色譜柱堵塞的可能性較小。

接下來分析固定相。生成硅膠材料的純度、微量金屬的含量、硅醇基的活性，都可能影響硅膠固定相的色譜行為。硅膠表面的硅醇基與堿性化合物反應(yīng)可導(dǎo)致峰形拖尾和色譜分離度的損失。硅膠中含有的痕失量金屬雜質(zhì)，是引起色譜峰形拖尾和柱效損失的另一個(gè)因素。樣品中的一些組分還會(huì)與固定相產(chǎn)生反應(yīng)，特別是胺基柱表現(xiàn)最為明顯，因?yàn)榘坊着c醛、酮的羰基反應(yīng)形成席夫（Schiff）堿而減少活性點(diǎn)，使樣品的保留時(shí)間縮短。綜合以上因素，都不會(huì)導(dǎo)致色譜柱堵塞，所以固定相導(dǎo)致色譜柱堵塞的可能性較小。

最后分析樣品。樣品中含有一些對(duì)分析不利的物質(zhì)，這些非目標(biāo)物能夠被檢測(cè)器檢測(cè)到而形成色譜峰、氣泡、基線漂移或負(fù)峰。其中保留值弱的物質(zhì)，一般能快速從色譜柱洗脫出來，對(duì)分析不產(chǎn)生干擾；中等保留強(qiáng)度的雜質(zhì)能被緩慢沖洗出來，對(duì)分析產(chǎn)生一定干擾；強(qiáng)保留雜質(zhì)通常難以被洗脫，多次上樣后，聚集在柱頭或色譜柱中，有的分析物甚至可能在通過色譜柱時(shí)與固定相發(fā)生作用，這些被吸附的雜質(zhì)累積到一定程度后就會(huì)引起色譜柱堵塞。測(cè)定抗壞血酸的前處理過程中，涉及到主要試劑是偏磷酸溶液（200g/L、20 g/L），所以有可能是偏磷酸溶液引起了色譜柱的堵塞。為了防止其堵塞色譜柱，配制偏磷酸溶液時(shí)應(yīng)快速攪拌，加速溶解，并對(duì)其進(jìn)行抽濾脫氣，可以減少檢測(cè)干擾，更有效地分離，降低分析誤差。