盧竹陽

利用GB 5009.86-2016標準測定食品中抗壞血酸時，在前處理工作中我們經常會遇到一些問題，下面筆者針對這些問題提出優(yōu)化措施，為抗壞血酸的檢測提供一些參考。

一、前處理過程中遇到的問題

1.配制流動相時，6.8g磷酸二氫鉀和0.91g十六烷基三甲基溴化銨，用水溶解并定容至1L（用磷酸調pH至2.5-2.8），產生很多泡沫，難定容。

2.對上述流動相（用A表示）進行抽濾脫氣時，發(fā)現(xiàn)試劑很難過濾下來。

3.實驗結束后，發(fā)現(xiàn)C18色譜柱出現(xiàn)堵塞現(xiàn)象。

二、優(yōu)化措施

1.針對流動相產生很多泡沫難定容的問題，筆者建議應在接近定容線的時候先讓溶液靜置一會兒，待泡沫漸漸消退后再緩慢加水定容。

2.針對抽濾流動相A時難過濾的問題，首先先確定濾膜選擇是否正確，如果濾膜正確那就是流動相的問題。對于實驗涉及到流動相A和流動相B，有時候會采取雙通道按一定比例進行實驗，也有時候會先按一定比例混合，再單通道（100%）進行實驗，所以，既然抽濾流動相A時難抽濾，那可以按標準上A：甲醇（98：2）的比例，進行混合抽濾脫氣，便會發(fā)現(xiàn)很容易抽濾下來。這時也需要注意應緩慢抽濾，減少泡沫的產生，結束時靜置一會兒，待泡沫消掉。

3.關于色譜柱堵塞問題，主要來源于三個方面：流動相、固定相、樣品。首先分析流動相。本次實驗的色譜柱：Eclipse XDB-C18、粒徑5μm、長度4.6×250mm，建議的pH范圍：2.0-9.0，最高操作溫度：60℃，新開啟使用的色譜柱，100%甲醇激活，流動相均超聲或抽濾脫氣，現(xiàn)配現(xiàn)用，流動相的pH在2.5-2.8，柱溫25℃，色譜柱使用條件符合要求，所以流動相導致色譜柱堵塞的可能性較小。

接下來分析固定相。生成硅膠材料的純度、微量金屬的含量、硅醇基的活性，都可能影響硅膠固定相的色譜行為。硅膠表面的硅醇基與堿性化合物反應可導致峰形拖尾和色譜分離度的損失。硅膠中含有的痕失量金屬雜質，是引起色譜峰形拖尾和柱效損失的另一個因素。樣品中的一些組分還會與固定相產生反應，特別是胺基柱表現(xiàn)最為明顯，因為胺基易與醛、酮的羰基反應形成席夫（Schiff）堿而減少活性點，使樣品的保留時間縮短。綜合以上因素，都不會導致色譜柱堵塞，所以固定相導致色譜柱堵塞的可能性較小。

最后分析樣品。樣品中含有一些對分析不利的物質，這些非目標物能夠被檢測器檢測到而形成色譜峰、氣泡、基線漂移或負峰。其中保留值弱的物質，一般能快速從色譜柱洗脫出來，對分析不產生干擾；中等保留強度的雜質能被緩慢沖洗出來，對分析產生一定干擾；強保留雜質通常難以被洗脫，多次上樣后，聚集在柱頭或色譜柱中，有的分析物甚至可能在通過色譜柱時與固定相發(fā)生作用，這些被吸附的雜質累積到一定程度后就會引起色譜柱堵塞。測定抗壞血酸的前處理過程中，涉及到主要試劑是偏磷酸溶液（200g/L、20 g/L），所以有可能是偏磷酸溶液引起了色譜柱的堵塞。為了防止其堵塞色譜柱，配制偏磷酸溶液時應快速攪拌，加速溶解，并對其進行抽濾脫氣，可以減少檢測干擾，更有效地分離，降低分析誤差。