王 鑫 李建英 陳 倩 王 斐 孫勝利 毛鐳篥 吳 衛(wèi)*

血液分析儀是臨床實(shí)驗(yàn)室最為常用的儀器之一，很多實(shí)驗(yàn)室備有多種血液分析儀，其優(yōu)勢(shì)在于檢測(cè)快速、能夠提供多種參數(shù)，為臨床提供準(zhǔn)確及時(shí)的診療依據(jù)，而分析其檢測(cè)質(zhì)量直接關(guān)系到臨床的診斷與治療。在日常檢驗(yàn)工作中冷凝集標(biāo)本會(huì)引起紅系參數(shù)的異常，目前在臨床工作中發(fā)現(xiàn)，有部分血液分析儀上的研究參數(shù)在冷凝集標(biāo)本的處理上有一定的應(yīng)用價(jià)值。為此，本研究將兩種血液分析儀的研究參數(shù)應(yīng)用到冷凝集標(biāo)本的處理，并與傳統(tǒng)冷凝集標(biāo)本處理方法37 ℃水浴法和血漿置換法進(jìn)行比較分析，旨在探討血液分析儀研究參數(shù)排除冷凝集現(xiàn)象干擾的應(yīng)用價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

采用ADVIA2120型自動(dòng)血細(xì)胞分析儀(德國(guó)BAYER公司)及配套原裝試劑，該儀器以過(guò)氧化物酶染色法加光散射法檢測(cè)白細(xì)胞(white blood cell，WBC)，二維光散射法測(cè)量紅細(xì)胞(red blood cell，RBC)及血小板(platelet，PLT)；單個(gè)細(xì)胞血紅蛋白(cell hemoglobin，CH)由RBC CH直方圖所得。XN9100型自動(dòng)血細(xì)胞分析儀(日本Sysmex公司)流水線及配套試劑，該儀器以細(xì)胞化學(xué)染色加光散射法檢測(cè)WBC，鞘流電阻抗法檢測(cè)RBC和PLT。網(wǎng)織紅細(xì)胞(reticulocyte，Ret)通道采用半導(dǎo)體激光流式細(xì)胞儀(flow cytometry，F(xiàn)CM)+核酸熒光染色法。RBC-O為XN9100(Ret通道)測(cè)得的研究參數(shù)。

1.2 標(biāo)本來(lái)源

收集2019年1-5月在北京協(xié)和醫(yī)院采集靜脈血進(jìn)行血常規(guī)檢查的22例患者的冷凝集樣本(22份)，冷凝集判斷標(biāo)準(zhǔn)，紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度(mean corpuscular hemoglobin concentration，MCHC)＞360 fl，放入4 ℃冰箱5 min觀察到肉眼可見(jiàn)的冷凝集現(xiàn)象。

1.3 標(biāo)本處理與質(zhì)量控制

對(duì)22份冷凝集標(biāo)本分別用以下4種處理方法檢測(cè)：①XN9100網(wǎng)織通道檢測(cè)法，在血液分析儀XN9100(網(wǎng)織通道)上機(jī)檢測(cè)，用RBC-O替換RBC并計(jì)算MCHC；②ADVIA2120檢測(cè)法，在血液分析儀ADVIA2120上機(jī)檢測(cè)，研究參數(shù)單個(gè)細(xì)胞血紅蛋白(CH)通過(guò)血紅蛋白/單個(gè)細(xì)胞血紅蛋白(HGB/CH)計(jì)算得到修正后的RBC和MCHC；③37 ℃水浴法，37 ℃水浴1 h后血液分析儀XN9100檢測(cè)；④血漿置換法，在標(biāo)本中加入1 ml生理鹽水，混勻后在離心機(jī)3000 r/min，離心3 min，吸取1 ml混有生理鹽水的血漿后，在血液分析儀XN9100上測(cè)定，并記錄結(jié)果。

ADVIA型2120自動(dòng)血細(xì)胞分析儀和XN9100型自動(dòng)血細(xì)胞分析儀均在校準(zhǔn)周期內(nèi)，每日測(cè)定配套質(zhì)量控制，結(jié)果均在控。

1.4 觀察評(píng)價(jià)指標(biāo)

以血漿置換法為參考方法，計(jì)算其他方法在RBC、MCHC、平均紅細(xì)胞體積(mean corpusular volume，MCV)、WBC和PLT的5項(xiàng)結(jié)果相對(duì)偏差(%)，依據(jù)本研究實(shí)驗(yàn)室的允許偏差標(biāo)準(zhǔn)(RBC3%、MCHC3.5%、WBC7.5%、PLT12.5%)確定糾正效果，試驗(yàn)以5項(xiàng)數(shù)值糾正結(jié)果在允許偏差內(nèi)為完全糾正，有一項(xiàng)不符合視為未糾正。

2 結(jié)果

2.1 四種方法數(shù)據(jù)比較

(1)RBC比較：采用XN9100網(wǎng)織通道檢測(cè)法、ADVIA2120檢測(cè)法、37 ℃水浴法和血漿置換法的4種方法進(jìn)行RBC比較，其中37 ℃水浴法整體低于其他方法，見(jiàn)圖1。

圖1 四種方法RBC比較結(jié)果

(2)MCV比較：采用XN9100網(wǎng)織通道檢測(cè)法、ADVIA2120檢測(cè)法、37 ℃水浴法和血漿置換法的4種方法進(jìn)行MCV比較，XN9100網(wǎng)織通道檢測(cè)法及37 ℃水浴法部分病例高于其他兩種方法，見(jiàn)圖2，XN9100相關(guān)直方圖見(jiàn)圖3。

圖2 四種方法MCV比較

圖3 兩種典型冷凝集標(biāo)本紅細(xì)胞直方圖

(3)MCHC比較：采用XN9100網(wǎng)織通道檢測(cè)法、ADVIA2120檢測(cè)法、37 ℃水浴法和血漿置換法的4種方法進(jìn)行MCHC比較，37 ℃水浴法部分病例高于其他3種方法，見(jiàn)圖4。

表1 22份冷凝集標(biāo)本3種方法與血漿置換法比較超過(guò)允許偏差(例)

圖4 四種方法MCHC比較

(4)PLT比較：采用XN9100網(wǎng)織通道檢測(cè)法、ADVIA2120檢測(cè)法、37 ℃水浴法和血漿置換法的4種方法進(jìn)行MCHC比較，XN9100檢測(cè)法與ADVIA2120檢測(cè)法無(wú)明顯差異，血漿置換法整體低于其他3種方法，見(jiàn)圖5。XN9100相關(guān)散點(diǎn)圖見(jiàn)圖6。

圖5 四種方法PLT比較

圖6 血漿置換法前后PLT直方圖血小板碎片對(duì)比

(5)WBC比較：采用XN9100網(wǎng)織通道檢測(cè)法、ADVIA2120檢測(cè)法、37 ℃水浴法和血漿置換法的4種方法進(jìn)行WBC比較，4種方法檢測(cè)結(jié)果整體水平無(wú)明顯差異，見(jiàn)圖7。

圖7 四種方法WBC比較

2.2 血漿置換法為參考方法的比較

以血漿置換法為參考方法對(duì)其他3種方法比較：①XN9100檢測(cè)法，XN9100型自動(dòng)血細(xì)胞分析儀上研究參數(shù)RBC-O超過(guò)允許偏差分別為1例RBC、3例MCHC、1例MCV及1例PLT；WBC在允許偏差內(nèi)；②ADVIA2120檢測(cè)法，ADVIA2120型自動(dòng)血細(xì)胞分析儀上的參數(shù)CH，通過(guò)(HGB/CH)反算得到RBC、MCHC和MCV結(jié)果，其均在允許偏差內(nèi)，超過(guò)允許偏差分別為1例WBC、1例PLT；③37 ℃水浴法，超過(guò)允許偏差分別為87例RBC、4例MCHC、1例MCV、1例PLT；WBC在允許偏差內(nèi)。血漿置換法與其他3種方法比較見(jiàn)表1。

3 討論

冷凝集素又稱(chēng)冷型自身抗體，于低溫時(shí)造成紅細(xì)胞凝集，以IgM為主，罕見(jiàn)情況下為IgA或IgG[1]。血清中冷凝集素的滴度，即在冷卻狀態(tài)下仍可見(jiàn)到紅細(xì)胞凝集的血清標(biāo)本的最大稀釋度在不同患者中差異很大，但在同一患者中通常相當(dāng)恒定。正常情況下，幾乎所有個(gè)體都有低滴度的冷凝集素(＜1∶64，通常＜1∶10)，并且無(wú)年齡和季節(jié)性差異[2]。冷凝集現(xiàn)象大多是因?yàn)槔淠匦r(jià)異常增高引起，其中多為繼發(fā)性，也可見(jiàn)于冷凝集素效價(jià)不高，但活性強(qiáng)的情況[3-4]。冷凝集現(xiàn)象常見(jiàn)于支原體肺炎、傳染性單核細(xì)胞增多癥，也可見(jiàn)于慢性淋巴細(xì)胞白血病和淋巴瘤等，該類(lèi)患者的血液離體后，溫度降低導(dǎo)致高效價(jià)或高活性的冷凝集素與RBC表面的相應(yīng)抗原結(jié)合，使RBC自身發(fā)生凝集，導(dǎo)致血常規(guī)紅系參數(shù)受到干擾，有時(shí)甚至?xí)绊懙絎BC及PLT計(jì)數(shù)[5]。除冷凝集素外，冷球蛋白、冷纖維蛋白原等也可產(chǎn)生冷凝集現(xiàn)象，對(duì)血常規(guī)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生影響[6]。在體外RBC與冷凝集素發(fā)生特異性結(jié)合的最大反應(yīng)溫度在4 ℃，復(fù)溫到37 ℃時(shí)該反應(yīng)消退[7]。

冷凝集標(biāo)本在電阻抗方法的血液分析儀上檢測(cè)時(shí)，聚集的RBC通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)孔常被認(rèn)為是大紅細(xì)胞，或不計(jì)入有效體積紅細(xì)胞，引起RBC總數(shù)減少。正常體積范圍內(nèi)測(cè)得的紅細(xì)胞MCV值，因此MCV會(huì)受到較小影響。

實(shí)驗(yàn)室處理冷凝集標(biāo)本常用的方法有37 ℃水浴法，血漿置換法。37 ℃水浴法是將有冷凝集現(xiàn)象的血常規(guī)標(biāo)本在37 ℃作用下使聚集的RBC散開(kāi)，血漿置換法是通過(guò)生理鹽水置換血漿從而降低血中冷凝集素的含量，本實(shí)驗(yàn)室使用的XN9100型自動(dòng)血細(xì)胞分析儀研究參數(shù)RBC-O、ADVIA2120型自動(dòng)血細(xì)胞分析儀研究參數(shù)CH對(duì)于冷凝集干擾的排除均有幫助。

本研究以血漿置換的結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，比較其他3種方法。試驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，采用37 ℃水浴法排除冷凝集現(xiàn)象干擾的結(jié)果中共有8例標(biāo)本不符合允許偏差，大多數(shù)冷凝集標(biāo)本經(jīng)過(guò)37 ℃水浴后就能得到滿意結(jié)果，表明37 ℃水浴法僅能排除部份冷凝集現(xiàn)象的干擾，但是高效價(jià)冷凝集素等原因引起的較為嚴(yán)重的冷凝集現(xiàn)象，37 ℃水浴法并不能解決干擾[3，8]。

利用XN9100型自動(dòng)血細(xì)胞分析儀RET通道上的RBC-O研究參數(shù)得到的紅系結(jié)果，有3例不符合允許偏差，此方法較37 ℃水浴法及血漿置換法快捷，效果優(yōu)于37 ℃水浴法但是仍有少部分標(biāo)本未能排除冷凝集現(xiàn)象的干擾。

XN9100型自動(dòng)血細(xì)胞分析儀因?yàn)镽ET通道有40 ℃液體加熱器硬件[9]的特性，因此其測(cè)出的研究參數(shù)RBC-O，可以幫助排除冷凝集干擾，但仍有部分標(biāo)本干擾未能排除，所以RBC-O是否可以作為最終的RBC結(jié)果仍需判斷。通過(guò)工作中的摸索，本研究發(fā)現(xiàn)可以將RET通道的另一個(gè)研究參數(shù)HGB-O(血紅蛋白作為一個(gè)判斷條件，RET通道的HGB-O與正常HGB無(wú)明顯差別(cv＜3.5%)，RBC-O結(jié)果可采用。

ADVIA2120型自動(dòng)血細(xì)胞分析儀測(cè)量RBC的方法為二維光散射法，其原理為當(dāng)RBC一個(gè)一個(gè)通過(guò)激光照射區(qū)時(shí)，在兩個(gè)角度進(jìn)行測(cè)定，高角度(5°～15°)主要測(cè)細(xì)胞折射指數(shù)，其和細(xì)胞密度相關(guān)，低角度(2°～3°)主要測(cè)細(xì)胞大小[10]。由于其測(cè)定的多角度，一些較弱冷凝集現(xiàn)象的標(biāo)本可直接排除干擾，由于其RBC CH直方圖不受細(xì)胞體積影響，是按每個(gè)細(xì)胞中存在的血紅蛋白含量顯示RBC分布，因此利用直方圖的參數(shù)CH反推(HGB/CH)得RBC及MCHC與血漿置換法相比較，均可接受。本研究發(fā)現(xiàn)，ADVIA2120型自動(dòng)血細(xì)胞分析儀的MCV因?yàn)榉椒▽W(xué)優(yōu)勢(shì)基本不受冷凝集現(xiàn)象干擾。

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)血漿置換法對(duì)RBC參數(shù)雖能很好地糾正，卻會(huì)導(dǎo)致PLT的丟失。血漿置換法PLT雖然與其他各法比較，除1例PLT增高以外，都符合允許偏差，但與其他相比都偏低，這可能與血漿置換過(guò)程中吸棄血漿時(shí)PLT被吸掉有關(guān)，因?yàn)檠弘x心后，自上而下分別為血漿層、血小板層、白細(xì)胞層和紅細(xì)胞層，且離心力較低時(shí)，上層血漿富含PLT，本研究試驗(yàn)中存在的1例PLT異常標(biāo)本，分析數(shù)據(jù)得知是因?yàn)檠獫{置換法的PLT高于其他3種方法所致。本研究通過(guò)觀察其散點(diǎn)圖發(fā)現(xiàn)，可能是因?yàn)椴糠制扑榈募?xì)胞碎片導(dǎo)致PLT結(jié)果增多。由于血漿置換法主要影響PLT，因此，PLT值可采用置換前的檢測(cè)數(shù)值，通過(guò)以上的處理能得到滿意的效果。

4 結(jié)論

在處理血常規(guī)檢測(cè)中遇到的冷凝集標(biāo)本時(shí)，37 ℃水浴法適用于弱冷凝集現(xiàn)象的標(biāo)本；血漿置換法是目前排除冷凝集干擾結(jié)果的傳統(tǒng)方法，但其易受操作手法的干擾，如能測(cè)研究參數(shù)CH值，通過(guò)計(jì)算可以得到消除干擾的RBC值；如能測(cè)研究參數(shù)RBC-O值，可用RBC-O替代RBC，但是否直接采用需對(duì)相關(guān)參數(shù)進(jìn)行判斷；兩者相對(duì)傳統(tǒng)的37 ℃水浴法及血漿置換法更省時(shí)省力，有較好的應(yīng)用價(jià)值。