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        非配套生化檢測(cè)系統(tǒng)酶類項(xiàng)目吸光度閾值與自動(dòng)稀釋重測(cè)設(shè)定的臨床應(yīng)用*

        2020-12-05 12:10:46蔡永梅毛東英王志偉
        中國(guó)醫(yī)學(xué)裝備 2020年11期
        關(guān)鍵詞:檢測(cè)

        蔡永梅 劉 京 毛東英 王志偉*

        在臨床生化檢驗(yàn)中,當(dāng)樣本中待測(cè)物濃度大于檢測(cè)系統(tǒng)線性范圍(analytical measurement range,AM R)時(shí),需要稀釋重測(cè)(rerunon dilution),尤其是在進(jìn)行丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase,AST)、γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)肽酶(γ-glutamyl transpeptidase,GGT)、堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、乳酸脫氫酶(lactic dehydrogenase,LDH)、α-羥丁酸脫氫酶(alpha-hydroxybutyric dehydrogenase,HBDH)和肌酸激酶(creatine kinase,CK)等酶類項(xiàng)目檢測(cè),當(dāng)待測(cè)物濃度超過檢測(cè)系統(tǒng)線性區(qū)間時(shí),出現(xiàn)底物耗盡導(dǎo)致結(jié)果不可靠[1]。使用配套生化系統(tǒng)時(shí),制造商根據(jù)檢測(cè)系統(tǒng)的特點(diǎn),在大量實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的基礎(chǔ)上事先確定吸光度閾值和自動(dòng)稀釋重測(cè)條件,實(shí)現(xiàn)超出線性范圍檢測(cè)結(jié)果的自動(dòng)識(shí)別、篩選并通過稀釋重測(cè)(手動(dòng)或自動(dòng)),獲得準(zhǔn)確檢測(cè)結(jié)果[2]。使用第三方試劑組成非配套生化檢測(cè)系統(tǒng)時(shí),往往忽視吸光度閾值和自動(dòng)稀釋重測(cè)的設(shè)定,采用系統(tǒng)默認(rèn)參數(shù),存在潛在質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)、影響檢驗(yàn)工作效率。非配套生化檢測(cè)系統(tǒng)也應(yīng)當(dāng)根據(jù)所使用試劑特點(diǎn)正確設(shè)置吸光度閾值,自動(dòng)識(shí)別并標(biāo)記底物耗盡時(shí)的異常檢測(cè)結(jié)果,具備自動(dòng)稀釋重測(cè)功能的全自動(dòng)生化分析儀,還應(yīng)正確設(shè)置稀釋倍數(shù)和稀釋重測(cè)條件,實(shí)現(xiàn)自動(dòng)稀釋重測(cè),避免異常高值結(jié)果漏檢和誤檢。本研究通過吸光度閾值和自動(dòng)稀釋重測(cè)的設(shè)定和應(yīng)用,保證酶類項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性,提高檢驗(yàn)工作效率,實(shí)現(xiàn)對(duì)酶類反應(yīng)過程的監(jiān)控,使非配套生化檢測(cè)系統(tǒng)具備媲美配套系統(tǒng)的檢測(cè)質(zhì)量。

        1 材料與方法

        1.1 一般材料

        選取2017年6-9月在寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院住院或門診患者,檢測(cè)其ALT、AST、GGT、ALP、LDH、HBDH和CK7個(gè)項(xiàng)目結(jié)果接近試劑說明書提供線性高限(±10%)的樣本各10份;另選取超過線性上限的高值結(jié)果樣本各30份。

        1.2 儀器與試劑

        SIEMNES ADVIA 2400型全自動(dòng)生化分析儀(德國(guó)西門子醫(yī)學(xué)診斷產(chǎn)品有限公司),酶類項(xiàng)目檢測(cè)試劑、標(biāo)準(zhǔn)品(北京利德曼生化股份有限公司)。

        1.3 檢測(cè)方法

        利德曼酶類項(xiàng)目試劑檢測(cè)范圍分別為:ALT和AST各為0~600 U/L,ALP為25~750 U/L,GGT為10~500 U/L,CK為25~1000 U/L,LDH和HBDH各為25~750 U/L。將各項(xiàng)目大于線性上限結(jié)果按自動(dòng)稀釋與手動(dòng)稀釋方式分為兩組,并上機(jī)檢測(cè)。

        1.3.1 吸光度閾值的獲取與設(shè)置

        選取ALT、AST、GGT、ALP、LDH、HBDH和CK接近說明書提供線性高限(±10%以內(nèi))各10份樣本上機(jī)檢測(cè),讀取各項(xiàng)目起始讀點(diǎn)時(shí)主波長(zhǎng)的吸光度并計(jì)算均值,將其設(shè)為北京利德曼試劑在ADVIA 2400型全自動(dòng)生化分析儀吸光度閾值。ADVIA 2400設(shè)置樣品上升反應(yīng)上限為“u”,下降反應(yīng)下限為“d”。

        1.3.2 吸光度閾值的驗(yàn)證

        將另選取并檢測(cè)的ALT、AST、GGT、ALP、LDH、HBDH和CK的7個(gè)項(xiàng)目大于線性上限樣本各30份,確認(rèn)所有超過線性的結(jié)果均被有效識(shí)別,驗(yàn)證所設(shè)吸光度閾值的正確性。

        1.3.3 自動(dòng)稀釋重測(cè)設(shè)置

        ADVIA 2400型全自動(dòng)生化分析儀具有自動(dòng)稀釋重測(cè)功能,根據(jù)實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證的不同項(xiàng)目最大稀釋倍數(shù),進(jìn)行自動(dòng)稀釋重測(cè)倍數(shù)和自動(dòng)稀釋重測(cè)條件的設(shè)置。分別用手工稀釋和自動(dòng)稀釋的方式檢測(cè)ALT、AST、GGT、ALP、LDH、HBDH和CK的7個(gè)項(xiàng)目大于線性上限樣本各30份,進(jìn)行兩種稀釋方式結(jié)果的比較。

        1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

        采用SPSS16.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析,將兩種稀釋方式結(jié)果進(jìn)行成對(duì)雙樣本均值分析的t檢驗(yàn),以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 吸光度閾值

        正確設(shè)置北京利德曼生化試劑和ADVIA2400型全自動(dòng)生化分析儀組成的非配套檢測(cè)系統(tǒng)酶類項(xiàng)目吸光度閾值參數(shù)后,儀器自動(dòng)識(shí)別所有超線性上限的結(jié)果,上升反應(yīng)結(jié)果并附帶警示標(biāo)志“u”,下降反應(yīng)結(jié)果并附帶警示標(biāo)志“d”,提示檢測(cè)結(jié)果超過線性上線,可能存在底物耗盡而不可靠,需要稀釋重測(cè)。各檢測(cè)項(xiàng)目的吸光度閾值見表1。

        表1 各檢測(cè)項(xiàng)目的吸光度閾值

        2.2 自動(dòng)稀釋與手工稀釋濃度比較

        設(shè)置吸光度閾值可實(shí)現(xiàn)超高限酶類檢測(cè)結(jié)果自動(dòng)識(shí)別,在此基礎(chǔ)上設(shè)置自動(dòng)稀釋重測(cè)倍數(shù)和自動(dòng)稀釋重測(cè)條件,可完成此類結(jié)果的自動(dòng)識(shí)別、自動(dòng)稀釋重測(cè),重測(cè)過程不需要人為干預(yù),進(jìn)一步提高工作效率。所有項(xiàng)目P值均>0.05,自動(dòng)稀釋結(jié)果與手動(dòng)稀釋結(jié)果無顯著性差異,一致性良好,可優(yōu)先選用自動(dòng)稀釋方式重測(cè)酶類超高限異常結(jié)果。儀器自動(dòng)稀釋與手工稀釋濃度見表2。

        表2 儀器自動(dòng)稀釋與手工稀釋濃度比較()

        表2 儀器自動(dòng)稀釋與手工稀釋濃度比較()

        注:表中ALT為丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶;AST為天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶;GGT為γ-谷氨?;D(zhuǎn)肽酶;ALP為堿性磷酸酶;LDH為乳酸脫氫酶;HBDH為α-羥丁酸脫氫酶;CK為肌酸激酶

        3 討論

        國(guó)內(nèi)許多臨床實(shí)驗(yàn)室選用由進(jìn)口全自動(dòng)生化分析儀和國(guó)產(chǎn)第三方試劑組成非配套(開放)生化檢測(cè)系統(tǒng)。第三方試劑應(yīng)用于不同制造商多種型號(hào)儀器,其工程技術(shù)人員只能給用戶提供基本分析參數(shù)設(shè)置,僅滿足第三方試劑在各種分析儀上的基本使用要求,而不能針對(duì)每種分析儀的特征更進(jìn)一步對(duì)相關(guān)參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化設(shè)置,一些高階參數(shù)均選用儀器默認(rèn)值,不能對(duì)分析檢測(cè)過程進(jìn)行有效監(jiān)控,這是目前非配套系統(tǒng)應(yīng)用存在的普遍問題和主要缺陷[3]?;诖?,本研究開展非配套生化檢測(cè)系統(tǒng)酶類項(xiàng)目吸光度閾值與自動(dòng)稀釋重測(cè)設(shè)定和臨床應(yīng)用。

        全自動(dòng)生化分析儀速率法一般設(shè)定在固定循環(huán)點(diǎn)讀取吸光度,由于方法學(xué)及檢測(cè)系統(tǒng)的限制,當(dāng)待測(cè)物酶活度高于檢測(cè)線性上限時(shí),吸光度每分鐘的變化率急劇增大,底物迅速耗盡、反應(yīng)提前結(jié)束進(jìn)入平臺(tái)期,讀點(diǎn)區(qū)間內(nèi)反應(yīng)曲線不成線性而“失真”,導(dǎo)致結(jié)果計(jì)算錯(cuò)誤[4-5]。這種異常高值結(jié)果約占每日檢測(cè)數(shù)的千分之幾,在非配套系統(tǒng)應(yīng)用中若無設(shè)置吸光度閾值參數(shù),實(shí)驗(yàn)室工作人員通過查閱歷史結(jié)果、查看儀器反應(yīng)曲線以及儀器結(jié)果是否有異常標(biāo)志[6-7]以及臨床診斷并結(jié)合工作經(jīng)驗(yàn)等措施,進(jìn)行超線性異常檢測(cè)結(jié)果的篩選與復(fù)查,工作效率低,容易漏檢,導(dǎo)致檢驗(yàn)結(jié)果錯(cuò)誤報(bào)告[8]。針對(duì)此現(xiàn)象,高小文等[9]報(bào)道,設(shè)置檢測(cè)項(xiàng)目的線性范圍上限值進(jìn)行攔截或通過反應(yīng)曲線斜率進(jìn)行結(jié)果的糾正計(jì)算,但仍存在漏檢或誤差。依據(jù)酶類檢測(cè)項(xiàng)目的反應(yīng)原理,進(jìn)行吸光度閾值參數(shù)的優(yōu)化設(shè)置,通過設(shè)定上升反應(yīng)(u)或下降反應(yīng)(d)[10]進(jìn)行超高限結(jié)果的識(shí)別,攔截效率高,可杜絕漏檢和誤檢。

        ADVIA 2400全自動(dòng)生化分析儀具有自動(dòng)稀釋重測(cè)功能,根據(jù)ALT、AST、GGT、ALP、LDH、HBDH及CK檢測(cè)方法的反應(yīng)類型,設(shè)置自動(dòng)稀釋重測(cè)倍數(shù)和條件[12]。結(jié)合吸光度閾值的應(yīng)用,實(shí)現(xiàn)超限結(jié)果自動(dòng)識(shí)別、攔截,自動(dòng)稀釋重測(cè),提高了檢驗(yàn)工作效率[13]。通過儀器自動(dòng)稀釋與手動(dòng)方式稀釋比較,證實(shí)兩者結(jié)果無顯著性差異,一致性良好,保證檢測(cè)結(jié)果的正確性[13-14]。

        4 結(jié)論

        通過吸光度閾值的設(shè)定和應(yīng)用,有效攔截、標(biāo)識(shí)超過線性上限酶類結(jié)果的同時(shí),實(shí)現(xiàn)對(duì)非配套生化檢測(cè)系統(tǒng)酶類項(xiàng)目反應(yīng)過程的監(jiān)控,結(jié)合自動(dòng)稀釋重測(cè),實(shí)現(xiàn)自動(dòng)識(shí)別、自動(dòng)稀釋重測(cè)。杜絕異常高值結(jié)果的漏報(bào)、誤報(bào),保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、可靠,提高檢驗(yàn)質(zhì)量;有效自動(dòng)篩選出高于限值的檢測(cè)結(jié)果減少繁復(fù)、無必要的工作,降低工作人員勞動(dòng)強(qiáng)度,縮短樣本TAT,提高檢驗(yàn)工作效率,使非配套生化檢測(cè)系統(tǒng)具備媲美配套系統(tǒng)的檢測(cè)質(zhì)量和檢測(cè)效率。

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