蔡永梅 劉 京 毛東英 王志偉*

在臨床生化檢驗(yàn)中，當(dāng)樣本中待測(cè)物濃度大于檢測(cè)系統(tǒng)線性范圍(analytical measurement range，AM R)時(shí)，需要稀釋重測(cè)(rerunon dilution)，尤其是在進(jìn)行丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase，ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase，AST)、γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)肽酶(γ-glutamyl transpeptidase，GGT)、堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)、乳酸脫氫酶(lactic dehydrogenase，LDH)、α-羥丁酸脫氫酶(alpha-hydroxybutyric dehydrogenase，HBDH)和肌酸激酶(creatine kinase，CK)等酶類項(xiàng)目檢測(cè)，當(dāng)待測(cè)物濃度超過檢測(cè)系統(tǒng)線性區(qū)間時(shí)，出現(xiàn)底物耗盡導(dǎo)致結(jié)果不可靠[1]。使用配套生化系統(tǒng)時(shí)，制造商根據(jù)檢測(cè)系統(tǒng)的特點(diǎn)，在大量實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的基礎(chǔ)上事先確定吸光度閾值和自動(dòng)稀釋重測(cè)條件，實(shí)現(xiàn)超出線性范圍檢測(cè)結(jié)果的自動(dòng)識(shí)別、篩選并通過稀釋重測(cè)(手動(dòng)或自動(dòng))，獲得準(zhǔn)確檢測(cè)結(jié)果[2]。使用第三方試劑組成非配套生化檢測(cè)系統(tǒng)時(shí)，往往忽視吸光度閾值和自動(dòng)稀釋重測(cè)的設(shè)定，采用系統(tǒng)默認(rèn)參數(shù)，存在潛在質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)、影響檢驗(yàn)工作效率。非配套生化檢測(cè)系統(tǒng)也應(yīng)當(dāng)根據(jù)所使用試劑特點(diǎn)正確設(shè)置吸光度閾值，自動(dòng)識(shí)別并標(biāo)記底物耗盡時(shí)的異常檢測(cè)結(jié)果，具備自動(dòng)稀釋重測(cè)功能的全自動(dòng)生化分析儀，還應(yīng)正確設(shè)置稀釋倍數(shù)和稀釋重測(cè)條件，實(shí)現(xiàn)自動(dòng)稀釋重測(cè)，避免異常高值結(jié)果漏檢和誤檢。本研究通過吸光度閾值和自動(dòng)稀釋重測(cè)的設(shè)定和應(yīng)用，保證酶類項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，提高檢驗(yàn)工作效率，實(shí)現(xiàn)對(duì)酶類反應(yīng)過程的監(jiān)控，使非配套生化檢測(cè)系統(tǒng)具備媲美配套系統(tǒng)的檢測(cè)質(zhì)量。

1 材料與方法

1.1 一般材料

選取2017年6-9月在寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院住院或門診患者，檢測(cè)其ALT、AST、GGT、ALP、LDH、HBDH和CK7個(gè)項(xiàng)目結(jié)果接近試劑說明書提供線性高限(±10%)的樣本各10份；另選取超過線性上限的高值結(jié)果樣本各30份。

1.2 儀器與試劑

SIEMNES ADVIA 2400型全自動(dòng)生化分析儀(德國(guó)西門子醫(yī)學(xué)診斷產(chǎn)品有限公司)，酶類項(xiàng)目檢測(cè)試劑、標(biāo)準(zhǔn)品(北京利德曼生化股份有限公司)。

1.3 檢測(cè)方法

利德曼酶類項(xiàng)目試劑檢測(cè)范圍分別為：ALT和AST各為0～600 U/L，ALP為25～750 U/L，GGT為10～500 U/L，CK為25～1000 U/L，LDH和HBDH各為25～750 U/L。將各項(xiàng)目大于線性上限結(jié)果按自動(dòng)稀釋與手動(dòng)稀釋方式分為兩組，并上機(jī)檢測(cè)。

1.3.1 吸光度閾值的獲取與設(shè)置

選取ALT、AST、GGT、ALP、LDH、HBDH和CK接近說明書提供線性高限(±10%以內(nèi))各10份樣本上機(jī)檢測(cè)，讀取各項(xiàng)目起始讀點(diǎn)時(shí)主波長(zhǎng)的吸光度并計(jì)算均值，將其設(shè)為北京利德曼試劑在ADVIA 2400型全自動(dòng)生化分析儀吸光度閾值。ADVIA 2400設(shè)置樣品上升反應(yīng)上限為“u”，下降反應(yīng)下限為“d”。

1.3.2 吸光度閾值的驗(yàn)證

將另選取并檢測(cè)的ALT、AST、GGT、ALP、LDH、HBDH和CK的7個(gè)項(xiàng)目大于線性上限樣本各30份，確認(rèn)所有超過線性的結(jié)果均被有效識(shí)別，驗(yàn)證所設(shè)吸光度閾值的正確性。

1.3.3 自動(dòng)稀釋重測(cè)設(shè)置

ADVIA 2400型全自動(dòng)生化分析儀具有自動(dòng)稀釋重測(cè)功能，根據(jù)實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證的不同項(xiàng)目最大稀釋倍數(shù)，進(jìn)行自動(dòng)稀釋重測(cè)倍數(shù)和自動(dòng)稀釋重測(cè)條件的設(shè)置。分別用手工稀釋和自動(dòng)稀釋的方式檢測(cè)ALT、AST、GGT、ALP、LDH、HBDH和CK的7個(gè)項(xiàng)目大于線性上限樣本各30份，進(jìn)行兩種稀釋方式結(jié)果的比較。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS16.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，將兩種稀釋方式結(jié)果進(jìn)行成對(duì)雙樣本均值分析的t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 吸光度閾值

正確設(shè)置北京利德曼生化試劑和ADVIA2400型全自動(dòng)生化分析儀組成的非配套檢測(cè)系統(tǒng)酶類項(xiàng)目吸光度閾值參數(shù)后，儀器自動(dòng)識(shí)別所有超線性上限的結(jié)果，上升反應(yīng)結(jié)果并附帶警示標(biāo)志“u”，下降反應(yīng)結(jié)果并附帶警示標(biāo)志“d”，提示檢測(cè)結(jié)果超過線性上線，可能存在底物耗盡而不可靠，需要稀釋重測(cè)。各檢測(cè)項(xiàng)目的吸光度閾值見表1。

表1 各檢測(cè)項(xiàng)目的吸光度閾值

2.2 自動(dòng)稀釋與手工稀釋濃度比較

設(shè)置吸光度閾值可實(shí)現(xiàn)超高限酶類檢測(cè)結(jié)果自動(dòng)識(shí)別，在此基礎(chǔ)上設(shè)置自動(dòng)稀釋重測(cè)倍數(shù)和自動(dòng)稀釋重測(cè)條件，可完成此類結(jié)果的自動(dòng)識(shí)別、自動(dòng)稀釋重測(cè)，重測(cè)過程不需要人為干預(yù)，進(jìn)一步提高工作效率。所有項(xiàng)目P值均＞0.05，自動(dòng)稀釋結(jié)果與手動(dòng)稀釋結(jié)果無顯著性差異，一致性良好，可優(yōu)先選用自動(dòng)稀釋方式重測(cè)酶類超高限異常結(jié)果。儀器自動(dòng)稀釋與手工稀釋濃度見表2。

表2 儀器自動(dòng)稀釋與手工稀釋濃度比較()

表2 儀器自動(dòng)稀釋與手工稀釋濃度比較()

注：表中ALT為丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶；AST為天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶；GGT為γ-谷氨?；D(zhuǎn)肽酶；ALP為堿性磷酸酶；LDH為乳酸脫氫酶；HBDH為α-羥丁酸脫氫酶；CK為肌酸激酶

3 討論

國(guó)內(nèi)許多臨床實(shí)驗(yàn)室選用由進(jìn)口全自動(dòng)生化分析儀和國(guó)產(chǎn)第三方試劑組成非配套(開放)生化檢測(cè)系統(tǒng)。第三方試劑應(yīng)用于不同制造商多種型號(hào)儀器，其工程技術(shù)人員只能給用戶提供基本分析參數(shù)設(shè)置，僅滿足第三方試劑在各種分析儀上的基本使用要求，而不能針對(duì)每種分析儀的特征更進(jìn)一步對(duì)相關(guān)參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化設(shè)置，一些高階參數(shù)均選用儀器默認(rèn)值，不能對(duì)分析檢測(cè)過程進(jìn)行有效監(jiān)控，這是目前非配套系統(tǒng)應(yīng)用存在的普遍問題和主要缺陷[3]?；诖?，本研究開展非配套生化檢測(cè)系統(tǒng)酶類項(xiàng)目吸光度閾值與自動(dòng)稀釋重測(cè)設(shè)定和臨床應(yīng)用。

全自動(dòng)生化分析儀速率法一般設(shè)定在固定循環(huán)點(diǎn)讀取吸光度，由于方法學(xué)及檢測(cè)系統(tǒng)的限制，當(dāng)待測(cè)物酶活度高于檢測(cè)線性上限時(shí)，吸光度每分鐘的變化率急劇增大，底物迅速耗盡、反應(yīng)提前結(jié)束進(jìn)入平臺(tái)期，讀點(diǎn)區(qū)間內(nèi)反應(yīng)曲線不成線性而“失真”，導(dǎo)致結(jié)果計(jì)算錯(cuò)誤[4-5]。這種異常高值結(jié)果約占每日檢測(cè)數(shù)的千分之幾，在非配套系統(tǒng)應(yīng)用中若無設(shè)置吸光度閾值參數(shù)，實(shí)驗(yàn)室工作人員通過查閱歷史結(jié)果、查看儀器反應(yīng)曲線以及儀器結(jié)果是否有異常標(biāo)志[6-7]以及臨床診斷并結(jié)合工作經(jīng)驗(yàn)等措施，進(jìn)行超線性異常檢測(cè)結(jié)果的篩選與復(fù)查，工作效率低，容易漏檢，導(dǎo)致檢驗(yàn)結(jié)果錯(cuò)誤報(bào)告[8]。針對(duì)此現(xiàn)象，高小文等[9]報(bào)道，設(shè)置檢測(cè)項(xiàng)目的線性范圍上限值進(jìn)行攔截或通過反應(yīng)曲線斜率進(jìn)行結(jié)果的糾正計(jì)算，但仍存在漏檢或誤差。依據(jù)酶類檢測(cè)項(xiàng)目的反應(yīng)原理，進(jìn)行吸光度閾值參數(shù)的優(yōu)化設(shè)置，通過設(shè)定上升反應(yīng)(u)或下降反應(yīng)(d)[10]進(jìn)行超高限結(jié)果的識(shí)別，攔截效率高，可杜絕漏檢和誤檢。

ADVIA 2400全自動(dòng)生化分析儀具有自動(dòng)稀釋重測(cè)功能，根據(jù)ALT、AST、GGT、ALP、LDH、HBDH及CK檢測(cè)方法的反應(yīng)類型，設(shè)置自動(dòng)稀釋重測(cè)倍數(shù)和條件[12]。結(jié)合吸光度閾值的應(yīng)用，實(shí)現(xiàn)超限結(jié)果自動(dòng)識(shí)別、攔截，自動(dòng)稀釋重測(cè)，提高了檢驗(yàn)工作效率[13]。通過儀器自動(dòng)稀釋與手動(dòng)方式稀釋比較，證實(shí)兩者結(jié)果無顯著性差異，一致性良好，保證檢測(cè)結(jié)果的正確性[13-14]。

4 結(jié)論

通過吸光度閾值的設(shè)定和應(yīng)用，有效攔截、標(biāo)識(shí)超過線性上限酶類結(jié)果的同時(shí)，實(shí)現(xiàn)對(duì)非配套生化檢測(cè)系統(tǒng)酶類項(xiàng)目反應(yīng)過程的監(jiān)控，結(jié)合自動(dòng)稀釋重測(cè)，實(shí)現(xiàn)自動(dòng)識(shí)別、自動(dòng)稀釋重測(cè)。杜絕異常高值結(jié)果的漏報(bào)、誤報(bào)，保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，提高檢驗(yàn)質(zhì)量；有效自動(dòng)篩選出高于限值的檢測(cè)結(jié)果減少繁復(fù)、無必要的工作，降低工作人員勞動(dòng)強(qiáng)度，縮短樣本TAT，提高檢驗(yàn)工作效率，使非配套生化檢測(cè)系統(tǒng)具備媲美配套系統(tǒng)的檢測(cè)質(zhì)量和檢測(cè)效率。