馮 平，折帥帥，尚 飛，張 艷，翟軍軍

(榆林學院 生命科學學院，陜西 榆林 719000)

根據(jù)世界糧食及農(nóng)業(yè)組織(FAO)的報告，中國是世界上最大的兔產(chǎn)品生產(chǎn)國，中國每年約生產(chǎn)70×104t,兔肉養(yǎng)兔業(yè)在全國具有非常重要的經(jīng)濟地位，兔肉產(chǎn)量占全球59.46%,兔毛產(chǎn)量占全球90%以上。比利時兔因被毛有天然光澤、皮張大、皮板柔性和彈性好，備受國內(nèi)市場青睞。比利時兔的主要優(yōu)點是體型大，體質(zhì)健壯，增重快，屠宰率高，尤其以肉味鮮美和皮質(zhì)好而聞名于世。在我國生產(chǎn)性能表現(xiàn)比其它大型兔好，備受養(yǎng)殖戶的歡迎。近年來，國內(nèi)養(yǎng)殖者將比利時兔進行大面積的圍欄放養(yǎng)，訓練返祖洞穴繁殖，取得了良好的經(jīng)濟效益。兔球蟲病是家兔中最常見的寄生蟲病，主要由寄生在腸道和膽管上皮細胞中的艾美爾球蟲引起，目前己發(fā)現(xiàn)、描述和命名超過25種艾美爾球蟲。而通過單卵囊分離技術(shù)、球蟲的純培養(yǎng)及分子生物學手段鑒定已確定的兔艾美爾球蟲共有11個種[1-3]。在分類上依據(jù)其卵囊的形態(tài)特征寄生部位及生活史特征，可將其分為大型艾美爾球蟲(E.magna)、中型艾美爾球蟲(E.media)、穿孔艾美爾球蟲(E.perforans)、腸艾美爾球蟲(E.intestinalis)、黃艾美爾球蟲(E.flavescens)、梨形艾美爾球蟲(E.piriformis)、維氏艾美爾球蟲(E.vejdovskyi)、斯氏艾美爾球蟲(E.stiedai)、無殘艾美爾球蟲(E.irresidua)、盲腸艾美爾球蟲(E.coecicola)、微小艾美爾球蟲(E.exigua)。其中斯氏艾美爾球蟲、腸艾美爾球蟲和黃艾美爾球蟲的致病性最強[4-5]。

本試驗通過飽和鹽水漂浮法和重鉻酸鉀培養(yǎng)法對榆林市散養(yǎng)比利時兔球蟲的感染情況及種類進行調(diào)查分析。通過對優(yōu)勢蟲種的致病性及所占比例來確定兔球蟲病的危害性，結(jié)合實際情況與其他地區(qū)作比較分析，為榆林市進一步研究、預防該病提供一定的數(shù)據(jù)參考和理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

隨機采集榆林市散養(yǎng)比利時幼齡兔糞便樣品21份，成年兔糞便樣品33份，每份約14～20 g，分別裝于一次性塑料袋中并標記，置4 ℃冰箱待檢。

1.2 方 法

1.2.1 糞便檢查 用飽和食鹽水漂浮法對樣品進行處理，在顯微鏡下觀察。觀察到球蟲蟲卵的玻片所對應的樣品標記為“+”，沒有觀察到線蟲卵的玻片所對應的樣品標記為“-”，以便計算感染率。

借鑒司陶爾蟲卵計數(shù)法對有球蟲蟲卵的糞樣進行蟲卵計數(shù)。制作三個樣本玻片在10×10倍鏡下以“弓”型觀察所有視野，三個玻片觀察完畢后，將每個玻片觀察到的線蟲卵進行總和，該試驗重復三組取平均數(shù)，計算感染強度[6]。

1.2.2 卵囊的收集與培養(yǎng) 采用飽和鹽水漂浮法，將每份糞便樣本放入干凈的燒杯中，并加適量的水搗碎，充分攪拌均勻，用100目篩紗布過濾，濾液以3 000 r/min離心10 min，倒掉上清液取沉淀，用飽和鹽水漂浮，經(jīng)2 000 r/min離心10 min，取上清液1/3～1/2液體，加清水4倍，經(jīng)3 000 r/min離心10 min，沉積物為收集到的球蟲卵囊。將收集的球蟲卵囊置于培養(yǎng)皿中，根據(jù)培養(yǎng)皿體積加入適量2.5%重鉻酸鉀溶液混勻，液體深度3～6 mm為宜，置于27 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。每天吹打并搖動平皿兩次，保證平皿內(nèi)有足夠氧氣[7]。

1.2.3 蟲種鑒定 在顯微鏡40倍鏡下觀察球蟲卵囊的大小、形態(tài)、顏色、卵膜孔的有無、內(nèi)外殘體的有無、孢子囊的形態(tài)和斯氏體的有無，根據(jù)有關(guān)資料進行種類鑒定[8-13]。卵囊孢子化后，觀察91個孢子化卵囊，統(tǒng)計不同種類球蟲卵囊數(shù)目并計算不同種類球蟲卵囊數(shù)占所檢查卵囊數(shù)的比例。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計和分析

通過Excel2010軟件對檢測所得數(shù)據(jù)進行整理。數(shù)據(jù)表示:“平均值±標準差”。用SPSS 21.0 軟件幼齡兔及成年兔球蟲感染強度進行獨立樣本T檢驗。(P>0.05表示差異不顯著，P<0.05表示差異顯著)。

2 結(jié)果與分析

本試驗共檢測54份糞便樣品，其中感染樣品34份，感染率為62.3%。其中，成年兔樣品糞便33份，感染樣品19份，感染率是57.6%，感染強度為500；幼齡兔樣品糞便21份，感染樣品15份，感染率是71.4%，感染強度為800。幼齡兔球蟲感染強度顯著高于成年兔(P<0.05)。詳見表1-2。

本試驗共檢測出8種球蟲，分別為盲腸艾美爾球蟲(E.coecicolaCheissin,1947)、納格浦爾艾美爾球蟲(E.nagpurensisGuil et Ray,1966)、斯氏艾美爾球蟲(E.stiedaeKiss kalt et Hartmann,1907)、梨形艾美爾球蟲(E.piriformisKotlan et Pospesch,1934)、腸艾美爾球(E.intestinalisCheissin,1948)、馬氏艾美爾球蟲(E.matsubayashiiTsunoda,1952)、小型艾美爾球蟲 (E.imeriaexiguaYakimoff,1934)、中型艾美爾球蟲(E.mebiaKcsscl,1929)其中盲腸艾美爾球蟲、納格浦爾艾美爾球蟲、斯氏艾美爾球蟲為優(yōu)勢種，所占比例分別為：25.3%、23.1%、14.3%，詳見表3及圖1。各蟲種幼蟲形態(tài)學調(diào)查詳見表4。

表1 不同年齡比利時兔感染結(jié)果Table 1 Coccidiosis of Belgian rabbits at different ages

表2 不同年齡比利時兔球蟲感染強度差異分析Table 2 Differential analysis of infection intensity of Belgian rabbits in different ages

3 討 論

球蟲病是家兔養(yǎng)殖中常見的一種流行性疾病，患有球蟲病的家兔其他疾病的感染機率也會增加，幼齡兔的生長發(fā)育受到阻礙，且致死率高，嚴重時會導致批量死亡，且球蟲感染一般為混合感染。本試驗結(jié)果顯示成年兔、幼齡兔均患球蟲病，且幼齡兔感染率高于成年兔幼齡，感染強度也顯著高于成年兔(P<0.05)?？赡苁怯捎谕饨鐪囟炔町愝^大、剛出生幼齡兔免疫力較低、未做到嚴格的消毒，導致病菌與幼齡兔之間交叉感染。兔只所排出的含球蟲卵囊糞便也會污染圈舍環(huán)境、飲食設施等，使幼齡兔接觸到球蟲卵囊的機率增加，導致幼齡兔比成年兔更易患球蟲病。張嘉等[12]對福建某場 20～90 日齡肉兔進行調(diào)查，發(fā)現(xiàn)以 50 日齡兔球蟲感染率最高，糞便中球蟲 OPG 值以 40 日齡最高，隨后感染率均隨日齡增大呈現(xiàn)下降趨勢。本次調(diào)查結(jié)果與張嘉試驗結(jié)果相似，建議在兔生產(chǎn)中應加強對幼齡兔球蟲病的檢測和防控。

表3 各種類球蟲感染率調(diào)查結(jié)果Table 3 Results of infection rate of various coccidioides

a.中型艾美爾球蟲(E.mebiaKcsscl,1929)b.梨形艾美爾球蟲(E.piriformisKotlan et Pospesch,1934) c.斯氏艾美爾球蟲 (E.stiedaeKiss kalt et Hartmann,1907) d.納格浦爾艾美爾球蟲(E.nagpurensisGuil et Ray,1966) e.腸艾美爾球蟲(E.intestinalisCheissin,1948) f.盲腸艾美爾球蟲(E.coecicolaCheissin,1947) g.馬氏艾美爾球蟲(E.matsubayashiiTsunoda,1952) h.小型艾美爾球蟲 (E.imeriaexiguaYakimoff,1934)

吳昌標等[1]研究表明，致病性較強的球蟲主要有斯氏艾美爾球蟲、腸艾美爾球蟲、松林艾美爾球蟲和中型艾美爾球蟲,其中斯氏艾美爾球蟲致病性最強。本試驗共檢測出8種球蟲，其中盲腸艾美爾球蟲、納格浦爾艾美爾球蟲、斯氏艾美爾球蟲為優(yōu)勢種，所占比例分別為：25.3%、23.1%、14.3%，其中致病性較強的斯氏艾美爾球蟲、盲腸艾美爾球蟲，本試驗結(jié)果與吳昌標研究結(jié)果相似。建議針對優(yōu)勢蟲種制定相應驅(qū)蟲方案，可提高驅(qū)蟲效率。

為控制兔球蟲病的發(fā)生,應做好以下幾點工作:改善飼養(yǎng)管理條件以提高兔的非特異性抵抗力；在夏秋兩季可在飲水中按時按量投服抗球蟲藥物注意抗球蟲藥的輪換使用，避免產(chǎn)生抗藥性；在藥物預防的同時可應用兔球蟲疫苗對兔球蟲病進行預防。

表4 幼蟲形態(tài)學調(diào)查結(jié)果Table 4 Results of larval morphological investigation