張 強(qiáng)，王艷萍，苗 凱，臧 睿，冷青文，趙宗勝，曾維斌*

(1.石河子大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，新疆 石河子 832000；2.深圳羅茲曼國(guó)際轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究院，廣東 深圳 518119)

目前國(guó)內(nèi)外對(duì)哺乳動(dòng)物皮膚結(jié)構(gòu)的研究報(bào)道較多，大多以皮膚結(jié)構(gòu)與毛發(fā)關(guān)系[1-2]以及皮革加工為主[3-4]。驢皮厚度是評(píng)價(jià)驢皮優(yōu)劣的重要指標(biāo)，同樣驢皮厚度也是制約阿膠等級(jí)的重要因素[5]。制作皮革用的動(dòng)物皮膚厚度的測(cè)量一般采用游標(biāo)卡尺測(cè)量法。也有學(xué)者用超聲儀對(duì)德州驢皮膚厚度測(cè)定發(fā)現(xiàn)德州驢臀皮最厚，腹皮最薄[6]。本研究通過(guò)觀(guān)察新疆驢不同部位皮膚組織結(jié)構(gòu)及其厚度變化規(guī)律，分析驢皮中膠原蛋白及其它結(jié)構(gòu)組織的分布情況，為阿膠原料選取提供一定的參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

本試驗(yàn)樣品來(lái)自阿克蘇某肉驢屠宰場(chǎng)的6頭新疆公驢，其年齡為5～7歲，頭部電擊致暈后頸靜脈放血處死，分別采集面部、背部、腿部、頸部和腹部皮膚新鮮組織，大小為1 cm2，采集后立即投入到10%甲醛溶液中固定。

1.2 試驗(yàn)儀器與主要試劑

Leica手搖輪式石蠟切片機(jī)，Motic Digi Class 1.2顯微數(shù)碼互動(dòng)拍照系統(tǒng)，DK-600型電熱恒溫水浴鍋，DNP-9082BS-Ⅲ電熱恒溫培養(yǎng)箱，95%乙醇、100%乙醇、二甲苯、甲醛、石蠟、蘇木素、伊紅、濃鹽酸等。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 組織切片制作 采集的驢皮組織用10%甲醛固定1周，因驢皮比較堅(jiān)韌，在固定液中浸泡的時(shí)間較長(zhǎng)。用流水沖洗48 h，洗去組織中多余的甲醛；梯度濃度乙醇脫水，起始濃度為50%，以后為60%，75%(過(guò)夜)、85%、95%和100%；二甲苯兩次透明，每次10 min；石蠟浸透(要比一般組織器官浸蠟時(shí)間長(zhǎng)，約需要4～6 h)和包埋；Leica手搖切片機(jī)連續(xù)切片，切片厚度為7 μm，40 ℃水浴攤片，55 ℃恒溫培養(yǎng)箱烤片2 h以上；蘇木精伊紅染色。

1.3.2 皮膚結(jié)構(gòu)與厚度測(cè)量 HE染色的切片，每頭驢在每個(gè)部位挑選展片平整無(wú)皺褶、染色效果好的切片10張，Motic Digi Class 1l-S顯微數(shù)碼互動(dòng)系統(tǒng)拍照，使用 Motic Images Advanced 3.2軟件進(jìn)行處理，在放大100倍的視野中觀(guān)察并進(jìn)行測(cè)量。

1.4 數(shù)據(jù)分析

應(yīng)用 excel 17.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，spss 22.0 統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行單因素方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 新疆驢皮膚組織結(jié)構(gòu)

由圖1可知，新疆驢表皮比較薄，由2～8層細(xì)胞構(gòu)成，最外層的是角質(zhì)層，為扁平角質(zhì)化的細(xì)胞，細(xì)胞核退化，細(xì)胞質(zhì)含大量的角蛋白，嗜酸性，在皮膚的不同部位，角化程度不同。角質(zhì)層下面是顆粒層，由一層將要角質(zhì)化的扁平細(xì)胞構(gòu)成。棘細(xì)胞層由1～2 層多角形細(xì)胞構(gòu)成，頸部皮膚缺乏此層。最內(nèi)層的是基底層細(xì)胞，通過(guò)半橋粒、質(zhì)膜內(nèi)褶等結(jié)構(gòu)與基底膜相連，細(xì)胞形狀為立方形或低柱狀，細(xì)胞排列密集，細(xì)胞為圓形，嗜堿性強(qiáng)。

真皮的淺層為乳頭層，深層為網(wǎng)狀層。乳頭層借基膜與表皮的基底層細(xì)胞連結(jié)，含有豐富密集排列的膠原纖維。網(wǎng)狀層膠原纖維比較粗，呈縱橫交錯(cuò)排列，內(nèi)含有大量的毛囊、汗腺、皮脂腺等皮膚的衍生物和血管、神經(jīng)等結(jié)構(gòu)。驢的毛囊屬于單毛囊，腿部和腹部毛囊較臉部、頸部和背部的多。驢的皮脂腺比較發(fā)達(dá)，在腹部排列密集，其它部位相對(duì)比較少。驢的汗腺多為分支泡狀腺，在背部、臉部、腹部和腿部比較發(fā)達(dá)，而在頸部存在的很少，主要分布在真皮的網(wǎng)狀層。

2.2 新疆驢不同部位表皮與真皮的厚度變化

由表1可知，新疆驢表皮平均厚度為(42.27±9.62) μm，面部皮膚表皮最厚，顯著厚于其它部位(P<0.05)。新疆驢真皮的平均厚度為(2055.43±616.00) μm，背部皮膚真皮最厚，顯著厚于其它部位(P<0.05)，腿部真皮最薄，極顯著低于其它部位(P<0.01)。皮膚總厚度的變化與真皮變化一致，背部最厚，腿部最薄。

表1 新疆驢不同部位皮膚厚度測(cè)量Table 1 Skin thickness measurement of different parts of Xinjiang donkey

3 討 論

皮膚被覆于動(dòng)物體表，是機(jī)體最大的一個(gè)器官，表皮是皮膚的最外層，起到抵御嚴(yán)寒、風(fēng)沙侵入的作用。動(dòng)物的皮膚是皮革、藥、食等方面主要原料。許琴等[7]研究發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)白豬表皮層由角質(zhì)層、顆粒層、生發(fā)層三層構(gòu)成，人皮膚表層由五層構(gòu)成，其上皮細(xì)胞以單層柱狀細(xì)胞為主，而本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)新疆驢上皮細(xì)胞形狀為立方形或低柱狀。胡倩倩等[8]研究表明，皖東黃牛皮膚表皮由內(nèi)向外可分為基底層、棘層、顆粒層和角質(zhì)層四層，新疆驢表皮皮膚的結(jié)構(gòu)也由這四層構(gòu)成，但新疆驢頸部皮膚缺乏棘層；造成此差異的原因可能是由于物種差異。新疆驢真皮由乳頭層和網(wǎng)狀層構(gòu)成，內(nèi)含有毛囊、汗腺、皮脂腺等皮膚的衍生物和血管、神經(jīng)等結(jié)構(gòu)，此結(jié)果與青海駱駝皮膚組織結(jié)構(gòu)類(lèi)似[9]，而新疆驢真皮中比駱駝?wù)嫫ず胸S富密集排列的膠原纖維，是阿膠的主要成分。

阿膠是驢真皮經(jīng)濃縮制成的固體膠，其主效成分膠原蛋白是一種結(jié)構(gòu)蛋白，可使皮膚具有彈性和光澤，當(dāng)膠原蛋白流失時(shí)，皮膚中層萎縮，出現(xiàn)皺紋[10]。大鼠皮膚隨著真皮層的增厚其膠原蛋白的含量也隨之增加，與皮膚的厚度呈正相關(guān)[11]。PAN等[12]研究發(fā)現(xiàn)在牛皮中，臀部真皮最厚，膠原蛋白含量最高。澳大利亞美利奴綿羊真皮層以臀部最厚，頸部次之，腹部最薄，臀部與腹部厚度之比約為1.6∶1[4]。曾祥芬等[13]研究魯西黃牛皮膚結(jié)構(gòu)中發(fā)現(xiàn)其腹部皮膚平均厚度最薄，頸部次之，臀部為最厚。本研究發(fā)現(xiàn)，新疆驢背部表皮最厚，顯著厚于其它部位。本課題前期研究也表明，新疆驢真皮膠原蛋白含量及膠原蛋白基因表達(dá)量，背頸部最高，其次是腹部和腿部，臉部最少，這與本次對(duì)真皮厚度的測(cè)量結(jié)果一致[5]。在毛發(fā)稀疏部位較厚，濃密部位較薄。而左秋等[14]研究發(fā)現(xiàn)牦牛頸部真皮最厚，臀部次之，腹部最薄，與本研究稍有不同，可能是因?yàn)殛笈Ｉ钤诟吆０蔚貐^(qū)造成的。王敏等[6]利用組織切片法測(cè)定德州驢皮膚的總厚度時(shí)發(fā)現(xiàn)，臀皮最厚，最薄的頸皮和腹皮。新疆驢皮膚背部最厚，腹部最薄，與德州驢皮膚的厚度相近，也可以為阿膠產(chǎn)業(yè)提供優(yōu)良的原材料。

4 結(jié) 論

新疆驢皮膚由淺至深分為表皮、真皮和皮下組織三部分，其表皮比較薄，由角質(zhì)層、顆粒層、棘細(xì)胞層、基底層細(xì)胞組成；頸部皮膚缺乏棘層。真皮由乳頭層和網(wǎng)狀層兩層組成，乳頭層含有豐富密集排列的膠原纖維；驢的毛囊屬于單毛囊，其皮脂腺比較發(fā)達(dá)，其汗腺主要分布在真皮的網(wǎng)狀層。真皮層越厚膠原蛋白含量越高，新疆驢皮膚結(jié)構(gòu)背部和頸部真皮最厚，是制作高品質(zhì)阿膠的較好原料。