張?zhí)m

（西寧市疾病預防控制中心 青海 西寧 810007）

目前，常用的微生物快速檢測技術(shù)有兩類，一類是由傳統(tǒng)微生物檢測技術(shù)改良而來，最具代表性的是快速測試板；另一類是運用生物工程、熒光法等高精尖科技，可直接特異性檢測微生物及其代謝產(chǎn)物等來對微生物做出有效鑒別，最具代表性的是ATP 發(fā)光技術(shù)。前者可將樣品處理過程簡化，可提高檢測靈敏度。其培養(yǎng)方法得到改良，用時和傳統(tǒng)技術(shù)相比卻未縮短，只是檢測用時縮短了一些，而檢測費用有所提高[1]。后者優(yōu)點在于省略培養(yǎng)步驟或培養(yǎng)時間較短，檢測用時顯著縮短，但需配備一些精密設備，且對檢測人員有一定技術(shù)要求[2]。

1.微生物檢測技術(shù)在飲用水檢測上的應用現(xiàn)狀

生活飲用水中微生物指標主要有4 種，即總大腸菌群、耐熱大腸菌群、大腸埃希氏菌等。微生物檢測需于無菌環(huán)境下進行，檢測室一般用紫外線燈進行消毒，樣品處理時所應用的儀器、器皿等均要經(jīng)過高壓滅菌。對培養(yǎng)基的制備尤其重視，將所需藥劑混勻后需做好消毒處理[3]。就飲用水檢測的實際情況而言，應用快速測試板更經(jīng)濟實惠、簡便快速，故首選此方法對飲用水進行生物檢測。

2.快速測試板檢測原理及具體開展步驟

2.1 快速測試板檢測原理

快速測試板為一種預先配置成的培養(yǎng)基產(chǎn)品，由營養(yǎng)培養(yǎng)基、吸水凝膠等兩部分組成。營養(yǎng)培養(yǎng)基根據(jù)特異性的酶底物反應可于自然環(huán)境下對不同的微生物做出鑒定，還能有效檢測共存的多菌種微生物。培養(yǎng)基顯色的原理為微生物在代謝過程中可生成的一種酶，其可和顯色底物發(fā)生作用。顯色底物組分有產(chǎn)色基因、微生物的一些可代謝物質(zhì)，產(chǎn)色基因受到特異性酶的作用會有一定顏色出現(xiàn)，通過對菌落顏色進行觀察，從而有利于鑒別菌種[4]。有關研究發(fā)現(xiàn)[5]，應用顯色培養(yǎng)基對微生物進行篩查，其反應靈敏性高于傳統(tǒng)培養(yǎng)基，可提高菌落計數(shù)準確度及效率。

2.2 具體開展步驟

應用快速測試板，可縮減樣品處理、消毒及培養(yǎng)基制備等操作過程。在提取到水樣后，于無菌環(huán)境下將快速測試板置于操作臺上。打開上層膜后，用經(jīng)過消毒處理的吸管吸取水樣1mL并將之滴到紙片上，再蓋好上層膜，靜置至培養(yǎng)基充分凝固，一般需10s 左右。疊好測試片后放于原自封袋內(nèi)，封上袋口，透明面向上水平放于恒溫箱中。按照檢測項目實際情況，設定時間及溫度進行培養(yǎng)，最后通過菌落顏色及特征加以鑒別。

3.快速測試板的運用

將快速測試板應用到飲用水微生物檢驗中，取500 份水樣進行4 種菌體的分批檢驗，且對25 份水樣進行了精密度試驗，及以傳統(tǒng)方法做對照的試驗。

3.1 菌落總數(shù)檢測

參照《生活飲用水標準檢驗方法》并采用平皿計數(shù)法對菌落總數(shù)進行測定，在營養(yǎng)瓊脂上放置樣品，并于有氧條件下36 ℃培養(yǎng)48h，通過肉眼觀察獲知樣品中所含菌落數(shù)。菌落總數(shù)測試板使用原理同國際標準一致，先采集水樣1mL，于測試板上涂抹營養(yǎng)培養(yǎng)基，將四唑紅作為脫氫酶指示劑并將其添加進去，菌落顯現(xiàn)紅色，從而可提高計數(shù)效率，并有助于提升其準確度[6]。

3.2 總大腸菌群檢測

在37℃條件下培養(yǎng)24h 能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭陰性無芽孢桿菌被稱為總大腸菌群。按照生活飲用水水質(zhì)指標檢測方法，對于此類菌群檢測方法主要有多管法、濾膜法、酵底物法等3 種。

3.3 耐熱大腸菌群檢測

在44.5℃條件下仍可生長并發(fā)酵乳糖的大腸菌群則為耐熱大腸菌。故通過增加此菌群的培養(yǎng)溫度，可對來自自然環(huán)境及糞便中的大腸菌群做出有效區(qū)分。目前，耐熱大腸菌群的檢測方法主要有濾膜法、多管法等2 種。

3.4 大腸埃希氏菌檢測

此菌群又被稱為大腸桿菌，對人、動物具有較強的致病性，尤其是嬰幼兒、幼畜，極易導致其腹瀉或患敗血癥。根據(jù)國家《生活飲用水衛(wèi)生標準》，通過檢測發(fā)現(xiàn)水樣中有總大腸菌群存在時，應進一步檢測是否存在大腸埃希氏菌或耐熱大腸菌群這2 種菌群；如未發(fā)現(xiàn)有總大腸菌群存在，則無需對上述2 種菌群進行檢測[7]。大腸埃希氏菌檢測的方法同國標規(guī)定的檢測總大腸菌群方法一致。

4.總結(jié)

水資源污染是當下我國面臨的重要問題。為保證居民飲水安全，對飲用水進行微生物檢驗十分有必要。快速測試板在飲用水微生物檢驗中應用，可很好地解決既往使用傳統(tǒng)方法培養(yǎng)基批次不同、制備條件不同等所帶來的問題。同時檢測操作更加便捷，取樣更加便利。此外，還可減少檢測費用，縮短檢測時間，并提高檢測準確度。