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        非洲豬瘟和經(jīng)典豬瘟綜合監(jiān)測(cè)計(jì)劃—數(shù)據(jù)處理及附件

        2020-12-01 01:59:54譯校劉林青張淼潔翟新驗(yàn)中國(guó)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心
        中國(guó)畜牧業(yè) 2020年16期
        關(guān)鍵詞:實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

        譯校│劉林青 張淼潔 翟新驗(yàn)(中國(guó)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心)

        一、數(shù)據(jù)

        1.數(shù)據(jù)平臺(tái)。用于數(shù)據(jù)收集的數(shù)據(jù)平臺(tái)應(yīng)包括以下內(nèi)容:野生動(dòng)物服務(wù)機(jī)構(gòu)(WS)維護(hù)的電子表格;國(guó)家動(dòng)物衛(wèi)生實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)(NAHLN)實(shí)驗(yàn)室信息系統(tǒng)(LMS);國(guó)家獸醫(yī)服務(wù)機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室(NVSL)診斷數(shù)據(jù)庫(kù)的可搜索檢測(cè)結(jié)果應(yīng)用程序(STRAND);獸醫(yī)服務(wù)綜合監(jiān)測(cè)模塊(VSISM);實(shí)驗(yàn)室提交模塊(CLSM),用于實(shí)驗(yàn)室提交數(shù)據(jù);應(yīng)急管理響應(yīng)系統(tǒng)(EMRS)。

        2.用于非洲豬瘟和經(jīng)典豬瘟監(jiān)測(cè)的初始數(shù)據(jù)收集和管理過(guò)程(表1)。

        非洲豬瘟(ASF)和經(jīng)典豬瘟(CSF)綜合監(jiān)測(cè)計(jì)劃使用了幾個(gè)現(xiàn)有的CSF監(jiān)測(cè)采樣方式。目前,通過(guò)獸醫(yī)服務(wù)機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室報(bào)告互聯(lián)網(wǎng)技術(shù)(IT)系統(tǒng)對(duì)部分CSF監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行管理,而新獲得的監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)收集正在遷移到新開發(fā)的CLSM-VSISM數(shù)據(jù)系統(tǒng)。VSISM建立在通用模塊化物種和與疫病無(wú)關(guān)的軟件結(jié)構(gòu)內(nèi)的CRM框架上,以允許在單次訪問(wèn)期間進(jìn)行多種疫病采樣。由于這種結(jié)構(gòu),與CSF數(shù)據(jù)收集相一致地添加ASF監(jiān)測(cè)功能相對(duì)簡(jiǎn)單。隨著新的聯(lián)合監(jiān)測(cè)工作的開展,用戶將有機(jī)會(huì)一次遷移到針對(duì)兩種疫病的新IT管理系統(tǒng)。對(duì)于監(jiān)管獸醫(yī)采樣,將通過(guò)基于Web的CLSM數(shù)據(jù)門戶輸入采樣數(shù)據(jù),該門戶將通過(guò)下拉列表和受限輸入?yún)f(xié)議來(lái)捕獲完整和標(biāo)準(zhǔn)化的現(xiàn)場(chǎng)數(shù)據(jù)。

        當(dāng)前,CLSM基于字段的數(shù)據(jù)收集模塊僅限于收集目標(biāo)樣本的監(jiān)管人員使用。但是,類似的數(shù)據(jù)結(jié)構(gòu)和最低限度的要求將被應(yīng)用到與合格的獸醫(yī)提交給NAHLN實(shí)驗(yàn)室的病例兼容的病豬相關(guān)流行病學(xué)數(shù)據(jù)。VS和NAHLN實(shí)驗(yàn)室的IT人員將開發(fā)標(biāo)準(zhǔn)化的消息結(jié)構(gòu),以便將最小案例數(shù)據(jù)以及ASF、CSF檢測(cè)訂單和結(jié)果通過(guò)LMS傳遞到VSISM CSF-ASF數(shù)據(jù)集中。將要求實(shí)驗(yàn)室收集或記錄任何必填數(shù)據(jù)字段的條目,無(wú)論是來(lái)自實(shí)驗(yàn)室的加入表格,還是與提交選定進(jìn)行FAD檢測(cè)樣品的獸醫(yī)進(jìn)行溝通。VS將要求所有必需的數(shù)據(jù)都通過(guò)LMS上傳給實(shí)驗(yàn)室,以符合報(bào)銷ASF-CSF檢測(cè)費(fèi)用的條件。

        NVSL-FADDL LMS系統(tǒng)目前無(wú)法進(jìn)行電子消息傳遞。最初,所需的WS野生豬場(chǎng)提交數(shù)據(jù)將通過(guò)電子表格與VS共享,以包括在監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)報(bào)告中。VS計(jì)劃經(jīng)理將通過(guò)STRAND從NVSL-FADDL獲得WS野生豬樣本的ASF、CSF陰性檢測(cè)結(jié)果。

        3.ASF-CSF監(jiān)測(cè)樣本所需的最小數(shù)據(jù)元素。在過(guò)去的12年中,審查CSF監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)的一個(gè)顯著弱點(diǎn)是與樣本相關(guān)的數(shù)據(jù)(即與樣本結(jié)果相關(guān)的數(shù)據(jù)對(duì)于評(píng)估目標(biāo)監(jiān)測(cè)效果至關(guān)重要)的報(bào)告不一致。具有記錄風(fēng)險(xiǎn)狀況的樣品比沒(méi)有已知風(fēng)險(xiǎn)因素記錄的隨機(jī)監(jiān)測(cè)樣品珍貴很多。此外,樣本池應(yīng)代表在該定義里的各種群體(足夠的覆蓋范圍)。

        為了記錄所需的風(fēng)險(xiǎn)概況,必須獲得以下關(guān)于樣本的數(shù)據(jù)元素信息(最小數(shù)據(jù)元素可能因監(jiān)測(cè)方式而異):采樣動(dòng)物的年齡;與條形碼試管或容器編號(hào)綁定的動(dòng)物ID(或組/圍欄說(shuō)明);收集、檢測(cè)和報(bào)告樣品的日期(出廠日期);豬群的臨床體征和病史(如果有的話),尤其是那些符合病例選擇標(biāo)準(zhǔn)的;實(shí)驗(yàn)室檢測(cè);生產(chǎn)現(xiàn)場(chǎng)、屠宰場(chǎng)或市場(chǎng)的場(chǎng)所識(shí)別碼(PIN)(如果沒(méi)有PIN,可以輸入經(jīng)緯度,以便于查找或分配PIN);生產(chǎn)類型;提交者(如果有);樣本選擇標(biāo)準(zhǔn)/臨床體征(如果有);樣本類型(例如血清、扁桃體、脾臟、淋巴結(jié)、全血等);屠宰場(chǎng)代碼(例如FSIS號(hào));提交方式;要求的檢測(cè);檢測(cè)結(jié)果和解釋。

        4.未來(lái)的統(tǒng)一電子數(shù)據(jù)收集替代方案。VS將與實(shí)驗(yàn)室IT,APHIS(動(dòng)物衛(wèi)生檢驗(yàn)局) IT和主題專家緊密合作,旨在探索避免重復(fù)數(shù)據(jù)輸入,改善電子數(shù)據(jù)收集和傳輸。

        二、數(shù)據(jù)分析、解釋和度量

        由以下幾方面進(jìn)行數(shù)據(jù)分析、解釋和度量。

        1.代表性。

        (1)地理。診斷實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)樣本的地理分布通常應(yīng)反映美國(guó)豬群的種群分布。此外,抽樣的群體數(shù)量應(yīng)反映每個(gè)州的群體數(shù)量。

        屠宰監(jiān)測(cè)樣本的地理分布通常應(yīng)反映該計(jì)劃針對(duì)的豬屠宰場(chǎng)的分布(烘烤市場(chǎng)、聚集點(diǎn))。商業(yè)屠宰場(chǎng)主要位于中西部地區(qū)的上游,而較小的屠宰場(chǎng)則分布在美國(guó)各地。由于著重在佛羅里達(dá)州、得克薩斯州和波多黎各的采樣,預(yù)計(jì)這些州的采樣數(shù)會(huì)高于其他州。

        高風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)樣本的地理分布應(yīng)分布在全國(guó)各地,重點(diǎn)是佛羅里達(dá)州、得克薩斯州和波多黎各。此外,預(yù)計(jì)允許垃圾飼喂的州在該監(jiān)測(cè)方式中的樣本數(shù)量要比根據(jù)其豬群養(yǎng)殖量預(yù)期的多。如果可以獲得詳細(xì)信息,則可以在縣一級(jí)評(píng)估地理代表性,并且預(yù)計(jì)會(huì)有更多的樣本來(lái)自垃圾掩埋場(chǎng)或國(guó)際港口附近的縣。

        野豬監(jiān)測(cè):野豬樣本的地理分布應(yīng)反映野豬種群分布。大多數(shù)樣品應(yīng)來(lái)自已建立野生豬種群的州。

        (2)生產(chǎn)類型/年齡。診斷實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè):此監(jiān)測(cè)中的樣品應(yīng)反映商品豬場(chǎng)的年齡和生產(chǎn)類型分布。

        屠宰監(jiān)測(cè):這類監(jiān)測(cè)中生產(chǎn)類型的不同與商品、不合格和高風(fēng)險(xiǎn)生產(chǎn)動(dòng)物之間樣品的大致分布接近。預(yù)期年齡分布為4個(gè)月,以發(fā)現(xiàn)專門針對(duì)焙烤市場(chǎng)銷售的豬只以及生長(zhǎng)速度低于同類群的不合格商品豬。

        高風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè):對(duì)于ASF和CSF,此監(jiān)測(cè)中的樣本主要是非商品生產(chǎn)類型。其中,應(yīng)包括后院畜群、垃圾飼喂豬和過(guò)渡性群體,其中垃圾飼喂豬占CSF樣本的大部分。

        野豬監(jiān)測(cè):預(yù)期年齡分布主要是成年動(dòng)物,少年和幼年的比例較小。生產(chǎn)類型不適用于此監(jiān)測(cè)。

        表1 當(dāng)前用于ASF-CSF監(jiān)測(cè)的類型和業(yè)務(wù)流程

        (3)時(shí)間分布。診斷實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè):在一年中的各個(gè)星期和月中,病豬的提交應(yīng)均勻分布。

        屠宰監(jiān)測(cè):提交應(yīng)大約每月平均一次。取決于地區(qū)溫度差異和慶?;顒?dòng)/節(jié)假日的時(shí)間,提交烤肉類樣品的時(shí)間可能更具季節(jié)性。

        高風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè):極端溫度下,垃圾飼喂豬樣本更有季節(jié)性,以減少對(duì)動(dòng)物的壓力。

        野豬監(jiān)測(cè):這些樣本全年收集,提供具有時(shí)間代表性的樣本。

        2.檢測(cè)概率。對(duì)于每種監(jiān)測(cè)方式、每種疫病,疫病檢測(cè)概率應(yīng)該進(jìn)行研究。表2和表3列出了估計(jì)的初始患病率檢測(cè)水平和潛在感染動(dòng)物的數(shù)量。

        3.報(bào)告的臨床特征與病例定義的相符性。診斷實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)樣品提交的理由應(yīng)在一致的臨床體征中分配,最少或沒(méi)有檢測(cè)到?jīng)]有提交或“一般豬提交”理由的樣品。

        屠宰監(jiān)測(cè)應(yīng)從定罪的動(dòng)物提交以進(jìn)行臨床跡象或驗(yàn)尸病灶與上述提交原因一致。

        高風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)提交的原因應(yīng)在一致的臨床體征中分配,最少要檢查樣品或沒(méi)有樣品,沒(méi)有提交或“一般豬的提交”的理由。

        4.及時(shí)性。應(yīng)盡快提交樣本,對(duì)于各類監(jiān)測(cè)方式,均應(yīng)采樣后48小時(shí)內(nèi)提交。

        檢測(cè)周期:組織樣品應(yīng)盡快進(jìn)行檢測(cè),保存和檢測(cè)時(shí)間不超過(guò)1周;血清樣本(CSF)應(yīng)在收到后7~10天內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。

        三、附錄1:非洲豬瘟病例定義

        1.臨床體征。ASF是非洲豬瘟病毒(ASFV)引起的家豬和野豬均能感染的傳染病,該病毒是非洲豬瘟病毒科里的惟一病毒。它可以通過(guò)直接或間接接觸或通過(guò)鈍緣蜱屬進(jìn)行傳播。感染類型包括最急性、急性、亞急性或慢性。感染豬恢復(fù)過(guò)來(lái)后,可以成為病毒的持續(xù)感染載體。

        (1)最急性。由高毒力毒株引起。通常發(fā)現(xiàn)時(shí)豬已經(jīng)死亡,有時(shí)沒(méi)有疫病的臨床特征或剖檢病變。

        (2)急性。由高毒力毒株引起。臨床特征包括發(fā)燒、加重的脈搏和呼吸頻率、嗜睡、厭食和臥倒。可能出現(xiàn)黃疸、嘔吐、出血性腹瀉、眼部有分泌物、鼻腔有出血性分泌物和流產(chǎn)等癥狀。豬通常表現(xiàn)出紅腫、出血和/或瘀斑皮。死亡前一到兩天,豬只可能會(huì)出現(xiàn)厭食癥,精神沉郁或精疲力竭,共濟(jì)失調(diào)。感染后2~13天死亡。死亡率接近100%。尸檢后常見(jiàn)病變包括:脾臟腫大、易碎,肝腫大,腎瘀點(diǎn)/出血,淋巴結(jié)腫大,以及其他器官的出血/瘀斑,包括膀胱、肺、心臟、胃和腸。

        (3)亞急性。由中等毒力毒株引起。臨床癥狀類似于急性型,但不嚴(yán)重。病程5~30天,死亡率較低(30%~70%)。感染后15~45天死亡。臨床特征、剖檢病變與急性型相似,但通常不太嚴(yán)重。

        (4)慢性。由低毒力毒株引起。臨床癥狀超過(guò)2~15個(gè)月,變化很大,可能包括體重減輕、發(fā)燒、呼吸道癥狀、皮膚壞死、心包炎、肺粘連和關(guān)節(jié)腫脹。死亡率低。剖檢病變包括消瘦和局部干酪樣壞死,以及肺硬化。

        2.實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)。

        (1)病原分離和鑒定。收集全血(EDTA和肝素)、脾臟、淋巴結(jié)、扁桃體和腎臟。保持樣品盡可能低溫而不凍結(jié)。檢測(cè)包括:病毒分離(VI)、直接熒光反應(yīng)(DFA)、測(cè)序和實(shí)時(shí)PCR(rPCR)。

        表2 估計(jì)的初步流行率檢測(cè)水平和可能感染的動(dòng)物數(shù)量—ASF監(jiān)測(cè)

        表3 估計(jì)的初步流行率檢測(cè)水平和可能感染的動(dòng)物數(shù)量—CSF監(jiān)測(cè)

        (2)血清學(xué)。通過(guò)ELISA檢測(cè)血清中的抗體、間接熒光抗體(IFA)和免疫過(guò)氧化物酶檢測(cè)(IPT)??贵w會(huì)在感染后7~10天出現(xiàn),并且可以持續(xù)一生。感染強(qiáng)毒的豬可能在產(chǎn)生抗體之前死亡。

        3.病例定義和報(bào)告標(biāo)準(zhǔn)。

        (1)可疑病例??梢刹±悍螦SF臨床特征和流行病學(xué)特點(diǎn)的動(dòng)物。

        (2)推定陽(yáng)性病例。推定陽(yáng)性病例:具有非陰性篩查實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的可疑病例經(jīng)國(guó)家獸醫(yī)服務(wù)機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室(NVSL)境外動(dòng)物疫病診斷實(shí)驗(yàn)室(FADDL)或國(guó)家動(dòng)物健康局的ASFV(PCR)結(jié)果實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室獲準(zhǔn)進(jìn)行ASF檢測(cè),或在NVSL FADDL通過(guò)兩種不同的抗體檢測(cè),可疑病例ASFV抗體呈陽(yáng)性。

        (3)確認(rèn)陽(yáng)性病例。確認(rèn)陽(yáng)性病例:從其中分離出ASF病毒并由NVSL FADDL或農(nóng)業(yè)部指定的實(shí)驗(yàn)室鑒定,或假設(shè)陽(yáng)性病例,經(jīng)NVSL FADDL檢測(cè),ASFV抗原陽(yáng)性的病例。

        注意:在任何ASF暴發(fā)中,病例定義都可以在第一個(gè)推定陽(yáng)性或確診陽(yáng)性病例(索引病例)后進(jìn)行修改。整個(gè)暴發(fā)期間病例定義將被審查,并根據(jù)其他信息或根除工作需要的變化進(jìn)行修改。

        四、附錄2:經(jīng)典豬瘟病例定義

        1.臨床體征。經(jīng)典豬瘟是由豬瘟病毒引起的,一種很小的黃病毒科和瘟病毒屬的囊膜RNA病毒。潛伏期的范圍可能從2到15天不等,但通常為7~10天。豬瘟有多種不同的臨床癥狀(急性、慢性和先天性感染),這主要取決于動(dòng)物之前對(duì)病毒的接觸情況、病毒毒性(高、中和低)以及諸如年齡之類的宿主因素和營(yíng)養(yǎng)狀況。

        與年長(zhǎng)動(dòng)物相比,年幼動(dòng)物通常受到的影響更大,死亡率可能高達(dá)90%;在較老的種豬中,感染通常是輕度甚至亞臨床的。年幼動(dòng)物受到的影響往往更加嚴(yán)重,并且更有可能表現(xiàn)出經(jīng)典的急性表現(xiàn)。經(jīng)典的急性表現(xiàn)很少見(jiàn)了。相反,更溫和的表現(xiàn)和臨床癥狀占主導(dǎo)。流行的CSF病毒株為中度至低度毒力,使臨床診斷變得困難,尤其是在年長(zhǎng)動(dòng)物中。低毒力菌株通常會(huì)引起輕度疫病或亞臨床感染,這可能導(dǎo)致長(zhǎng)期無(wú)法發(fā)現(xiàn)。除了低毒力菌株,白細(xì)胞減少癥是一個(gè)相當(dāng)普遍的臨床實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn)。

        (1)急性。通常在12周齡以下斷奶的對(duì)抗生素?zé)o反應(yīng)的斷奶仔豬中發(fā)生,特征是發(fā)燒,精神沉郁,皮膚充血,結(jié)膜炎和行動(dòng)遲緩,后跟輕癱,流產(chǎn)(稀有)和/或腹瀉。

        (2)慢性。從急性感染中恢復(fù)過(guò)來(lái)的豬可能會(huì)發(fā)展成慢性,在這個(gè)過(guò)程中,會(huì)出現(xiàn)厭食、發(fā)燒、腹瀉、皮炎,并且可能導(dǎo)致群體中出現(xiàn)小個(gè)頭豬。特征為急性感染,繼而在發(fā)燒復(fù)發(fā)之前短暫恢復(fù),厭食導(dǎo)致消瘦,發(fā)病后1~3個(gè)月死亡。

        (3)先天性感染。先天性感染可導(dǎo)致繁殖功能降低表現(xiàn),群體中出現(xiàn)流產(chǎn)或仔豬虛弱等臨床表現(xiàn)。妊娠50~70天后母豬感染,生下的幼豬可能患有先天性震顫或臨死前的幾個(gè)月持續(xù)感染并表現(xiàn)出正常,目前臨床上發(fā)現(xiàn)出生后11個(gè)月的存活期(妊娠50~70天之前感染的母豬可能會(huì)流產(chǎn)、分娩死產(chǎn)、產(chǎn)木乃伊胎或?qū)е孪忍煨匀毕莸呢i)。

        2.實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)。

        (1)病原鑒定:扁桃體、脾臟、腎臟、淋巴結(jié)或回腸遠(yuǎn)端應(yīng)在低溫條件下(不冷凍)運(yùn)輸,并且不添加防腐劑。臨床患病豬的全血(肝素或EDTA處理)也是合適的樣品。檢測(cè)方法包括對(duì)樣品組織使用CSF特異性單克隆抗體的免疫組化(IHC)(ABC染色)、PCR(rPCR和RTPCR)以及病毒分離,然后進(jìn)行ABC染色和/或rPCR或RT-PCR。

        (2)血清學(xué)檢測(cè):血清學(xué)檢測(cè)包括中和過(guò)氧化物酶聯(lián)用檢測(cè)(也稱為免疫過(guò)氧化物酶病毒中和檢測(cè)-IPVN),免疫過(guò)氧化物酶檢測(cè)(IP)和E2抗體ELISA。由于使用強(qiáng)毒株的免疫抑制,在感染后18天之前檢測(cè)不到動(dòng)物體內(nèi)的抗體,后續(xù)抗體會(huì)至少持續(xù)數(shù)年。對(duì)于慢性感染,如果有抗體的話,可能會(huì)在感染第一個(gè)月后短暫檢測(cè)到抗體,但很快就消失了。先天感染的豬持續(xù)存在病毒血癥,很少產(chǎn)生特異性抗體。

        3.病例定義和報(bào)告標(biāo)準(zhǔn)。

        (1)可疑病例??梢刹±哂幸韵绿卣鳎号c經(jīng)典豬瘟一致的臨床體征、病史或流行病學(xué)特點(diǎn);或者常規(guī)監(jiān)測(cè)中rPCR/RT-PCR結(jié)果陽(yáng)性或者不確定的,并且沒(méi)有臨床判斷依據(jù),其他實(shí)驗(yàn)室診斷(測(cè)序信息或確認(rèn)性檢測(cè))或流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果待定;或者在常規(guī)檢測(cè)過(guò)程中對(duì)樣品進(jìn)行抗體ELISA監(jiān)測(cè)陽(yáng)性,隨后IP和IP-VN檢測(cè)均獲得陽(yáng)性結(jié)果,但流行病學(xué)信息或臨床癥狀與經(jīng)典豬瘟不一致的。

        (2)推定陽(yáng)性病例。樣品初始rPCR/RT-PCR結(jié)果陽(yáng)性,豬群有或沒(méi)有經(jīng)典豬瘟的臨床體征和/或流行病學(xué)特點(diǎn),在境外動(dòng)物疫病診斷中心進(jìn)行重復(fù)rPCR/RT-PCR或基因組測(cè)序?yàn)殛?yáng)性的可疑病例;或者流行病學(xué)信息和/或臨床癥狀與經(jīng)典豬瘟一致的豬群;rPCR或RT-PCR陽(yáng)性;或者對(duì)組織樣本進(jìn)行ABC檢測(cè)陽(yáng)性;或者IP-VN檢測(cè)陽(yáng)性的病例稱為推定陽(yáng)性病例。

        (3)確診陽(yáng)性病例。從豬中分離出CSF病毒,并且經(jīng)國(guó)家獸醫(yī)服務(wù)機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室,F(xiàn)ADDL或由農(nóng)業(yè)部指定的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行測(cè)序確認(rèn)的病例稱為確診陽(yáng)性病例。

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