孫濱濱，黃祝剛，賈 佳，鄭琪欣，孟亞楠（山東齊都藥業(yè)有限公司，山東 淄博 255400）

電感耦合等離子體質(zhì)譜（inductively coupled plasma mass spectrometry，ICP-MS）已廣泛應(yīng)用于分析領(lǐng)域內(nèi)痕量、微量和常量元素的測定，該技術(shù)的優(yōu)勢包括靈敏度高、分析速度快、動態(tài)范圍和元素測量范圍寬、可實現(xiàn)一次采集完成多元素同時測定[1]。由于某些元素雜質(zhì)具有毒性，還可能對藥品的穩(wěn)定性、保質(zhì)期產(chǎn)生影響，引發(fā)副作用，故元素雜質(zhì)含量需要嚴(yán)格控制[2]。根據(jù)《國際人用藥物注冊技術(shù)協(xié)調(diào)會元素雜質(zhì)指導(dǎo)原則》注射劑評估要求，對非有意添加的1類[砷（As）、鎘（Cd）、汞（Hg）、鉛（Pb）]、2A類[鈷（Co）、鎳（Ni）、釩（V）]和3類中的鋰（Li）、銻（Sb）、銅（Cu）進(jìn)行評估[3]?？紤]到生產(chǎn)過程易引入鐵（Fe），又增加了Fe元素的研究[4]。

小兒鈉鉀鎂鈣葡萄糖注射液由鈉鉀鎂鈣鹽及葡萄糖組成，主要用于補充小兒體內(nèi)水分及維持電解質(zhì)平衡[5]，在ICP-MS分析中屬于高鹽樣品分析，常規(guī)檢測模式若直接進(jìn)樣基體效應(yīng)嚴(yán)重[6]，內(nèi)標(biāo)回收率偏低。本實驗采用耐高鹽進(jìn)樣系統(tǒng)利用氣溶膠稀釋，在保證靈敏度的情況下高鹽樣品可以直接進(jìn)樣，內(nèi)標(biāo)回收率較好，為高鹽樣品中元素雜質(zhì)的檢測與分析提供了參考。

1 儀器與試藥

Agilent7900電感耦合等離子體質(zhì)譜儀（美國Agilent公司）；硝酸[67% ～ 70%，痕量金屬級，賽默飛世爾科技（中國）有限公司]；鹽酸（37%，優(yōu)級純，默克股份兩合公司）；異丙醇（色譜純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）；Cd標(biāo)準(zhǔn)溶液、Pb標(biāo)準(zhǔn)溶液、Hg標(biāo)準(zhǔn)溶液、Co標(biāo)準(zhǔn)溶液、V標(biāo)準(zhǔn)溶液、As標(biāo)準(zhǔn)溶液、Ni標(biāo)準(zhǔn)溶液、Sb標(biāo)準(zhǔn)溶液、Li標(biāo)準(zhǔn)溶液、Cu標(biāo)準(zhǔn)溶液（1000 μg·mL-1，國家有色金屬及電子材料分析測試中心）；Fe標(biāo)準(zhǔn)溶液（10 mg·mL-1，國家有色金屬及電子材料分析測試中心）；內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液[碲（Te）25 μg·mL-1、鈧（Sc）10 μg·mL-1、鍺（Ge）/銦（In）/镥（Lu）/鉍（Bi）25 μg·mL-1]、調(diào)諧液[鈰（Ce）、Co、Li、鎂（Mg）、鉈（Tl）、釔（Y）1 μg·L-1]均購自安捷倫科技（中國）有限公司；小兒鈉鉀鎂鈣葡萄糖注射液（規(guī)格：100 mL，山東齊都藥業(yè)有限公司，批號：9B18073002、9B18073003、9B18073004）。

2 方法與結(jié)果

2.1 限度濃度

根據(jù)注射劑評估要求中每日允許暴露量（permitted daily exposure，PDE）及小兒鈉鉀鎂鈣葡萄糖注射液說明書每日最大用量為2 L的規(guī)定，計算得出待測元素Cd、Pb、As、Hg、Co、V、Ni、Sb、Li、Cu、Fe的限度濃度（J），詳見表1。

表1 各元素PDE值及限度濃度Tab 1 PDE and limit concentration of each element

2.2 儀器工作條件

測定模式為He模式，等離子體模式為HMI-8，采樣深度10.0 mm，射頻功率1600 W，霧化氣流量0.67 L·min-1，稀釋氣流量0.26 L·min-1，輔助氣流量0.9 L·min-1，等離子氣流量15.0 L·min-1，蠕動泵轉(zhuǎn)速0.10 rps，霧化室溫度2.0 ℃。

2.3 溶液制備

2.3.1 內(nèi)標(biāo)溶液 精密量取內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液1 mL于50 mL量瓶中，加入25 mL異丙醇，用2%硝酸和1%鹽酸混合溶液稀釋至刻度，搖勻。

2.3.2 線性溶液 精密量取表2中各體積單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液于100 mL量瓶中，用2%硝酸和1%鹽酸混合溶液稀釋至刻度，搖勻，作為多元素貯備液。分別精密量取0.3 mL、0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL多元素貯備液于50 mL量瓶中，用2%硝酸和1%鹽酸混合溶液定容至刻度，搖勻，得到0.3 J、0.5 J、1.0 J、1.5 J、2.0 J線性溶液。

表2 各單元素加入量及線性溶液濃度Tab 2 The addition of each single element and linear solution concentration

2.4 測定法

本試驗選用45Sc、72Ge、115In、209Bi為內(nèi)標(biāo)元素，其中51V、56Fe、59Co以45Sc為內(nèi)標(biāo)，60Ni、63Cu、75As以72Ge為內(nèi)標(biāo)，111Cd、121Sb以115In為內(nèi)標(biāo)，7Li、201Hg、208Pb以209Bi為內(nèi)標(biāo)。儀器調(diào)諧完畢后，依次引入空白溶液、標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液及樣品溶液，以各元素濃度為橫坐標(biāo)，Ratio值（待測元素與內(nèi)標(biāo)元素響應(yīng)值比值）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算得到樣品中各元素雜質(zhì)的含量。

2.5 方法學(xué)驗證

2.5.1 線性和范圍 在各元素限度濃度的0 ～ 200%范圍內(nèi)設(shè)定0 J、0.3 J、0.5 J、1.0 J、1.5 J、2.0 J共6個點，考察各元素濃度與Ratio值的線性關(guān)系。以各元素濃度為橫坐標(biāo)，Ratio值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到各元素線性方程和相關(guān)系數(shù)。詳見表3，各元素線性相關(guān)系數(shù)r均大于0.999 0，表明線性關(guān)系良好。

2.5.2 檢測限與定量限 取空白溶液連續(xù)測定11次，計算11次空白溶液響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差（SD），根據(jù)LOD = 3SD/K、LOQ = 10SD/K（K為各元素濃度與響應(yīng)值線性方程斜率）計算各元素檢測限和定量限。詳見表4，各元素檢測限和定量限均低于限度值的10%，能夠滿足檢測要求。

表3 各元素線性試驗結(jié)果Tab 3 Linear test results of each element

表4 各元素檢測限與定量限結(jié)果Tab 4 Results of the limit of detection and quantitation of each element

2.5.3 加樣回收率試驗 分別精密量取0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL多元素貯備液于50 mL量瓶中，用2%硝酸和1%鹽酸酸化的小兒鈉鉀鎂鈣葡萄糖注射液稀釋至刻度，搖勻，作為低、中、高濃度的加標(biāo)供試品溶液，每個濃度平行3份，另取2%硝酸和1%鹽酸酸化的小兒鈉鉀鎂鈣葡萄糖注射液作為樣品溶液，進(jìn)行回收率試驗，要求加樣回收率在70% ～ 150%。詳見表5，各元素低、中、高濃度下的回收率在83.42% ～ 111.62%范圍內(nèi)，符合要求。

2.5.4 重復(fù)性試驗 精密量取多元素貯備液1.0 mL于50 mL量瓶中，用2%硝酸和1%鹽酸酸化的小兒鈉鉀鎂鈣葡萄糖注射液稀釋至刻度，搖勻，平行制備6份，進(jìn)樣分析，根據(jù)連續(xù)6次測定結(jié)果計算各元素RSD，考察其重復(fù)性，要求各元素RSD不超過20%。詳見表6，11種元素雜質(zhì)重復(fù)性RSD≤4.46%，表明方法的重復(fù)性良好。

表5 加樣回收率試驗結(jié)果. n = 9Tab 5 Results of the recovery rate of spiked sample. n = 9

2.5.5 中間精密度試驗 由另一位分析人員在不同時間，按照重復(fù)性項下方法進(jìn)行實驗，考察隨機(jī)變動因素對精密度的影響，采用12次測定結(jié)果的RSD來驗證中間精密度，要求各待測元素RSD不超過25%。結(jié)果如表6所示，各元素12次測定結(jié)果RSD≤5.19%，表明該方法中間精密度良好。

2.6 樣品檢測

用2%硝酸和1%鹽酸酸化的小兒鈉鉀鎂鈣葡萄糖注射液作為樣品溶液，采用上述方法進(jìn)樣分析。結(jié)果如表7所示，3批樣品中11種元素雜質(zhì)含量均小于規(guī)定的限度值且低于控制閾值（限度濃度的30%），表明樣品中所測11種元素雜質(zhì)無風(fēng)險，無需額外控制。

表6 各元素重復(fù)性及中間精密度試驗結(jié)果Tab 6 Repeatability and intermediate precision test results of each element

表7 樣品中各元素含量測定結(jié)果Tab 7 Content determination results of each element in samples

3 討論

3.1 方法的選擇

目前，高鹽基質(zhì)樣品中元素雜質(zhì)的常用檢測方法為電感耦合等離子體發(fā)射光譜法（inductively coupled plasma optical emission spectrometry，ICP-OES），其線性范圍廣、穩(wěn)定性好[7]。但對于日用量大的高鹽注射劑來說，各元素限度濃度較小，ICP-OES不能滿足檢測要求。相較于ICP-OES，ICP-MS有更高的靈敏度，檢出限可達(dá)10-12g·mL-1，更適用于痕量和超痕量元素分析[8]，可用于大用量高鹽注射劑元素雜質(zhì)的含量測定。

3.2 降低高鹽基質(zhì)的信號干擾

使用ICP-MS測定高鹽基質(zhì)樣品時，基質(zhì)元素會以基質(zhì)沉積、電離抑制、離子散焦等方式影響分析物信號，使待測元素信號大大降低。傳統(tǒng)的檢測方法通常將樣品稀釋后進(jìn)樣以降低基質(zhì)干擾[9]，但同時也會使元素限度降低，對儀器靈敏度要求更高。本實驗采用高鹽基質(zhì)進(jìn)樣系統(tǒng)的氣溶膠稀釋技術(shù)，在分析高鹽基質(zhì)樣品時，直接進(jìn)樣，使用優(yōu)化的等離子體模式，顯著降低了基質(zhì)效應(yīng)，提高了長期穩(wěn)定性。

綜上，本文建立了ICP-MS直接進(jìn)樣測定小兒鈉鉀鎂鈣葡萄糖注射液中11種元素雜質(zhì)含量的方法并進(jìn)行了方法學(xué)驗證，對3批樣品進(jìn)行檢測，優(yōu)化等離子體模式為HMI-8，使儀器在降低基質(zhì)干擾的情況下具有較好的靈敏度，為高鹽基質(zhì)樣品元素雜質(zhì)的含量測定及風(fēng)險評估提供了參考。